Method 6 modified from Tai & Tanksl

Method 6 modified from Tai & Tanksley (1990). Protocol:
1. Add 700 µL extraction buffer (100 mM Tris-HCl pH 8.0, 50 mM EDTA pH 8.0, 0.5 M NaCl, 1.25 % SDS, 8.3 mM NaOH, and 0.38 % Na bisulfate) before some more grinding, and transfer to a micro centrifuge.
2. Add 1.4 µL (0.2 %) β-mercaptoetanol and 5 µL RNaseA (10 mg/mL), mixed until getting a homogeneous mixture. Incubate at 65 ºC for 15 min and add 0.22 ml of 5 M potassium acetate, and mix. Place the tube at -20 ºC for 10 min, and then centrifuge at 10,000 rpm for 3 min in a micro centrifuge.
3. Transfer the supernatant to a new tube. Precipitate the DNA by adding a 0.7 volume of isopropanol, mix well, and centrifuge at 10,000 rpm for 3 min.
4. Pour of the supernatant and rinse the pellet with 70 % ethanol. Resuspend the pellet in 300 µL of T5E (50 mM Tris-HCl pH 8.0, 10 mM EDTA) by briefly vortexing, incubating at 65 ºC for 5 min, and re-vortexing.
5. Add 150 µL of 7.4 M ammonium acetate and mix well before centrifugation for 3 min and removal of the supernatant to a new tube.
6. Precipitate the DNA by mixing with 330 µL of isopropanol and centrifuge for 3 min.
7. Rinse the pellet with 70 % ethanol and re-suspend in 100 µL of T5E by vortexing, incubating at 65 ºC for 5 min, and re-vortexing.
8. Add 10 µL of 3 M sodium acetate and 75 µL of isopropanol, mix well followed by centrifugation for 3 min to re-precipitate the DNA.
9. Wash the pellet with 70 % ethanol, and add 150 µL of TE to dissolve the DNA. Store the DNA solution at -20 ºC.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีที่ 6 แก้ไขจากไทและ Tanksley (1990) โพรโทคอล:1. เพิ่มบัฟเฟอร์สกัด µL 700 (100 mM ทริสเรทติ้ง HCl pH 8.0, 50 มม. EDTA pH 8.0, 0.5 M NaCl, SDS 1.25%, 8.3 มม. NaOH และ bisulfate นา 0.38%) ก่อนบางเพิ่มเติมบด และโอนไปยังเครื่องหมุนเหวี่ยงขนาดเล็ก2. เพิ่ม 1.4 µL (0.2%) 5 µL และβ-mercaptoetanol RNaseA (10 mg/mL), ผสมรับผสมเป็นเนื้อเดียวกัน ฟักที่ 65 ºC สำหรับ 15 นาที และเพิ่ม 0.22 มิลลิลิตร 5 ม.โพแทสเซียมอะซิเตท และผสม วางหลอดที่-20 องศาเซลเซียส 10 นาที แล้ว เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาทีในเครื่องหมุนเหวี่ยงขนาดเล็ก3. โอนของ supernatant ไปหลอดใหม่ ตกตะกอนดีเอ็นเอ โดยการเพิ่มปริมาณ 0.7 ของ isopropanol ส่วนผสม และเครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาที4. เทของ supernatant และล้างเม็ด ด้วย 70% เอทานอล Resuspend เม็ดใน 300 µL ของ T5E (50 มม.ทริสเรทติ้ง HCl pH 8.0, 10 mM EDTA) โดยสั้น ๆ vortexing, incubating ที่ 65 ºC สำหรับ 5 นาที และ re-vortexing5. เพิ่ม 150 µL ของอะซิเตแอมโมเนีย 7.4 เมตร และผสมก่อนหมุนเหวี่ยงสำหรับ 3 นาทีและการกำจัดของ supernatant ไปหลอดใหม่6. ตกตะกอนดีเอ็นเอ โดยการผสมกับ 330 µL isopropanol และเหวี่ยง 3 นาที7. ล้างเม็ด ด้วย 70% เอทานอล และการระงับใน 100 µL ของ T5E โดย vortexing, incubating ที่ 65 ºC สำหรับ 5 นาที และ re-vortexing8. เพิ่ม 10 µL ของ 3 M โซเดียมอะซิเตทและ 75 µL ของ isopropanol ผสมกันตาม ด้วยหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 3 นาทีเพื่อให้ตกตะกอนดีเอ็นเออีกครั้ง9. ล้างเม็ด ด้วย 70% เอทานอล และเพิ่ม 150 µL ของ TE จะละลายดีเอ็นเอ เก็บโซลูชันดีเอ็นเอที่-20 ºC

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีที่ 6 การแก้ไขจากไท & Tanksley (1990) โปรโตคอล:
1 เพิ่ม 700 บัฟเฟอร์สกัดไมโครลิตร (100 มิลลิเมตร Tris-HCl ค่า pH 8.0 ขนาด 50 มม EDTA ค่า pH 8.0, 0.5 M NaCl 1.25% SDS 8.3 มิลลิ NaOH และ 0.38% ณ bisulfate) ก่อนที่จะบดบางมากขึ้นและการถ่ายโอนไปแปะไมโคร
2 เพิ่ม 1.4 ไมโครลิตร (0.2%) β-mercaptoetanol และ 5 ไมโครลิตร RNaseA (10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ผสมจนได้รับการผสมเป็นเนื้อเดียวกัน ฟักที่ 65 องศาเซลเซียสนาน 15 นาทีและเพิ่ม 0.22 มล. 5 M โพแทสเซียมอะซิเตทและผสม วางท่อที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีและจากนั้นหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาทีในการหมุนเหวี่ยงไมโคร.
3 โอนใสไปยังหลอดใหม่ ตกตะกอนดีเอ็นเอโดยการเพิ่มปริมาณ 0.7 ของ isopropanol ผสมให้เข้ากันและหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาที.
4 เทสารละลายและล้างอัดเม็ดที่มีเอทานอล 70% Resuspend เม็ดใน 300 ไมโครลิตรของ T5E (50 mM Tris-HCl ค่า pH 8.0, 10 mM EDTA) โดยในเวลาสั้น ๆ vortexing, การบ่มที่ 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและ re-vortexing.
5 เพิ่ม 150 ไมโครลิตร 7.4 M แอมโมเนียมอะซิเตทและผสมให้เข้ากันก่อนที่จะหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 3 นาทีและการกำจัดของสารละลายไปยังหลอดใหม่.
6 ตกตะกอนดีเอ็นเอโดยการผสมกับ 330 ไมโครลิตรของ isopropanol และ centrifuge 3 นาที.
7 ล้างอัดเม็ดที่มีเอทานอล 70% และอีกระงับใน 100 ไมโครลิตรของ T5E โดย vortexing, การบ่มที่ 65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและ re-vortexing.
8 เพิ่ม 10 ไมโครลิตร 3 M โซเดียมอะซิเตทและ 75 ไมโครลิตรของ isopropanol ผสมตามเป็นอย่างดีโดยการหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 3 นาทีอีกครั้งตกตะกอนดีเอ็นเอ.
9 ล้างอัดเม็ดที่มีเอทานอล 70% และเพิ่ม 150 ไมโครลิตรของ TE จะละลายดีเอ็นเอ วิธีการแก้ปัญหาการจัดเก็บดีเอ็นเอที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีที่ 6 ที่ดัดแปลงจากใต้ & Tanksley ( 1990 ) โปรโตคอล :1 . เพิ่ม 700 µผมใช้สาร ( 100 มม. หรือกรดไฮโดรคลอริก pH 8.0 , 50 mM EDTA pH 8.0 , 0.5 โมลาร์ , 1.25 % SDS , NaOH , 8.3 มม. และ 0.38 % นาไบซัลเฟต ) ก่อนหน่อยคัฟ และโอนไปยังเครื่องไมโคร2 . เพิ่ม 1.4 µ L ( 0.2% ) และบีตา - mercaptoetanol 5 rnasea ผมµ ( 10 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร ผสมจนส่วนผสมเข้าเป็นเนื้อเดียวกัน บ่มที่อุณหภูมิ 65 ºเป็นเวลา 15 นาที และเพิ่ม 0.22 กรัม 5 acetate , โพแทสเซียม และผสม วางท่อ ที่ - 20 ºนาน 10 นาที แล้วเครื่องที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาทีในเครื่องไมโคร3 . โอนให้นำหลอดใหม่ การเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอโดย 0.7 ของไอโซโพรพานอล ผสมให้เข้ากัน และเครื่องที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาที4 . เทของน่าน และล้างเม็ดด้วยแอลกอฮอล์ 70% resuspend เม็ด 300 µ l t5e ( 50 มม. โดยกรดไฮโดรคลอริก pH 8.0 , 10 mM EDTA ) โดยคร่าว ๆ vortexing เพาะที่ 65 , ºองศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที และ vortexing .5 . เพิ่ม 150 µ l แอมโมเนียมอะซิเตตและ 7.4 เมตรให้เข้ากันก่อนปั่น 3 นาทีและการกำจัดของน่านกับหลอดใหม่6 . ตะกอนดีเอ็นเอ โดยผสมกับµ 330 ลิตรและไอโซโพรพานอลเครื่องนาน 3 นาที7 . บ้วนอาหารเม็ดที่มีเอทานอล 70% และระงับใน 100 µ l t5e โดย vortexing เพาะที่ 65 , ºองศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที และ vortexing .8 . เพิ่ม 10 µ L 3 M โซเดียมอะซิเตต และ 75 µ L ของไอโซโพรพานอล ผสมให้เข้ากัน ตามด้วยปั่น 3 มินอีกครั้ง และ DNA9 . ล้างเม็ดด้วยเอทานอล 70% และเพิ่ม 150 µ l te ละลาย DNA เก็บสารละลายดีเอ็นเอที่ - 20 º C