Total RNA was extracted from frozen testis (n = 10) using TRI re- agent (Molecular Research Center, Cincinnati, OH). RNA samples (1 lg) were reverse transcribed using murine leukaemia virus re- verse transcriptase, according to the standard protocol of the supplier (Applied Biosystems, Foster City, CA). Primers were presented in Table 1. All primer sets were validated to ensure efficient ampli- fication of a single product before use in assays. Real-time poly- merase chain reaction (PCR) was performed using SYBR Premix EX Taq kit according to the manufacturer’s instructions (Takara, Shiga, Japan) in the MyiQ real-time PCR detection system (Bio- rad, Hercules, CA). Relative mRNA levels were calculated using the comparative 2 DDCt method.
อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากลูกอัณฑะแช่แข็ง (n = 10) โดยใช้ TRI อีก Agent (โมเลกุลศูนย์วิจัย Cincinnati, OH) ตัวอย่าง RNA (1 LG) ได้รับการถ่ายทอดกลับโดยใช้ไวรัสโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวหมากลอนอีก transcriptase ตามโปรโตคอลมาตรฐานของผู้ผลิต (Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย) ไพรเมอร์ที่มีการนำเสนอในตารางที่ 1 ชุดทั้งหมดไพรเมอร์ที่ได้รับการตรวจสอบเพื่อให้แน่ใจว่า EF Fi ประสิทธิภาพตะแกรง Fi ไอออนบวกของผลิตภัณฑ์เดียวก่อนที่จะใช้ในการตรวจ แบบ Real-time โพลี merase ปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) คือการดำเนินการโดยใช้ชุด SYBR พรีมิกซ์ EX Taq ตามคำแนะนำของผู้ผลิต (Takara ชิ, ญี่ปุ่น) ในเวลาจริงระบบการตรวจสอบ MyiQ PCR (Bio- RAD, Hercules, CA) ระดับ mRNA ญาติถูกคำนวณโดยใช้วิธีการเปรียบเทียบ 2 DDCt
การแปล กรุณารอสักครู่..