METHODOLOGYMaterialsRed and white r

METHODOLOGY
Materials
Red and white raw rice samples belonging to BG group were purchased from local market.
All microbiological media were obtained from Oxoid, UK. Anaerogen sachets were
purchased from Oxoid, UK.
Culture media
deMan Rogosa and Sharpe (MRS) agar (Oxoid, UK) was used as reported previously for
isolation of lactic acid producing bacteria (De Man et al., 1960). MRS agar with 0.1-0.2%
sorbitol interfere with the growth of Staphylococcus spp., Bacillus spp. and number of yeasts
(Janet et al., 2012) and more importantly is selective for Lactobacillus spp. (Tharmaraj and
Shah, 2003). MRS media supplemented with L-cysteine (0.2-5%) is a selective medium for
isolation of selected Lactobacilli and Bifidobacteria (Haddadin et al., 2004). MRS, MRSsorbitol (0.2%) and MRS-L-cysteine (0.25%) media were used in order to improve the
specificity of the medium for the isolation of different species of Lactobacillus. The pH of
the MRS, MRS sorbitol (0.2%) and MRS L cysteine (0.25%) media were 6.2, 6 and, 5.8
respectively.
Preparation of rice samples
The red raw and white rice (75 g) were cooked with water (rice: water 1:3) for 30 min to
obtain a soft consistency. Fermentation was carried out by soaking raw or cooked rice (50 g)
in sterile distilled water (rice: water 1:3) overnight (12-16 hours) in clay pots (250 ml) at
ambient temperature (27 oC).
Isolation of Lactic Acid Bacteria (LAB) from fermented rice
Fermented rice steep (10 ml) from both white and red cooked and uncooked rice were
collected separately after shaking well in the Vortex and diluted in sterile saline (0.85%)
solution to obtain concentrations 10 0 , 10-1 , 10-2 and 10-3 dilutions. Aliquots (100 µl) of the
prepared dilutions and undiluted sample were inoculated on to petri plates in duplicate using
spread plate method. The inoculated plates were incubated at 37 oC for 3 days under
anaerobic conditions created by Anaerogen gas packs (Oxoid) (Table 1). The colony of
gram-positive, and catalase negative bacilli were sub-cultured and purified by streaking on
plates containing relevant MRS media and subsequently purification was carried out 4 to 5
times for the confirmation of the purity of the culture.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ระเบียบวิธี
วัสดุ
สีแดงและตัวอย่างข้าวดิบสีขาวอยู่ในกลุ่ม BG ที่ซื้อมาจากตลาดในประเทศ.
สื่อทางจุลชีววิทยาทั้งหมดที่ได้รับจาก Oxoid, สหราชอาณาจักร ซอง Anaerogen ถูก
ซื้อมาจาก Oxoid, สหราชอาณาจักร.
วัฒนธรรมสื่อ
Deman Rogosa และชาร์ป (MRS) วุ้น (Oxoid สหราชอาณาจักร) ถูกนำมาใช้ตามที่รายงานก่อนหน้านี้สำหรับ
การแยกของกรดแลคติกแบคทีเรียผลิต (De Man et al., 1960) อาหารเลี้ยงเชื้อ MRS กับ 0.1-0.2%
ซอร์บิทอยุ่งเกี่ยวกับการเจริญเติบโตของเชื้อ Staphylococcus spp ได้., Bacillus spp และจำนวนยีสต์
(เจเน็ต et al., 2012) และที่สำคัญคือการเลือกสำหรับ Lactobacillus spp (Tharmaraj และ
อิหร่าน, 2003) สื่อ MRS เสริมด้วย L-cysteine (0.2-5%) เป็นสื่อที่เลือกสำหรับ
การแยกเลือก Lactobacilli และไบฟิโดแบคทีเรีย (Haddadin et al., 2004) นาง MRSsorbitol (0.2%) และ MRS-L-cysteine (0.25%) สื่อถูกนำมาใช้เพื่อปรับปรุง
ความจำเพาะของสื่อกลางในการแยกสายพันธุ์ที่แตกต่างกันของแลคโตบาซิลลัส ค่า pH ของ
นางนางซอร์บิทอ (0.2%) และนาง L cysteine (0.25%) สื่อ 6.2, 6 และ 5.8
ตามลำดับ.
เตรียมความพร้อมของตัวอย่างข้าว
แดงข้าวดิบและสีขาว (75 กรัม) ถูกปรุงด้วยน้ำ (ข้าว : น้ำ 1: 3) เป็นเวลา 30 นาทีที่จะ
ได้รับความสอดคล้องนุ่ม การหมักได้ดำเนินการโดยการแช่ข้าวดิบหรือสุก (50 กรัม)
ในน้ำกลั่นปลอดเชื้อ (ข้าวน้ำ 1: 3) ในชั่วข้ามคืน (12-16 ชั่วโมง) ในกระถางดินเผา (250 มล.) ที่
. อุณหภูมิ (27 องศาเซลเซียส)
การแยก กรดแลคติกแบคทีเรีย (แล็บ) จากข้าวหมัก
สูงชันข้าวหมัก (10 มล.) จากทั้งข้าวขาวและสีแดงสุกและดิบถูก
เก็บรวบรวมแยกหลังจากเขย่าดีใน Vortex และเจือจางในน้ำเกลือปราศจากเชื้อ (0.85%)
วิธีการแก้ปัญหาเพื่อให้ได้ความเข้มข้น 10 0 10-1, 10-2 และ 10-3 เจือจาง aliquots (100 ไมโครลิตร) ของ
เจือจางเตรียมความพร้อมและตัวอย่างเจือปนถูกเชื้อบนจานเพาะเชื้อในที่ซ้ำกันโดยใช้
วิธีการแพร่กระจายแผ่น แผ่นเชื้อบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 วันภายใต้
สภาวะไร้ออกซิเจนที่สร้างขึ้นโดยแพ็คก๊าซ Anaerogen (Oxoid) (ตารางที่ 1) อาณานิคมของ
แกรมบวกและเชิงลบ catalase แบคทีเรียย่อยมีการเพาะเลี้ยงและการทำให้บริสุทธิ์โดยพุ่งบน
จานที่มีสื่อ MRS ที่เกี่ยวข้องและต่อมาทำให้บริสุทธิ์ได้ดำเนินการ 4-5
ครั้งเพื่อยืนยันความบริสุทธิ์ของวัฒนธรรมที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการวัสดุสีแดงและสีขาวข้าวดิบตัวอย่างเป็นของ BG กลุ่ม ซื้อมาจากตลาดในประเทศสื่อทางจุลชีววิทยาทั้งหมดได้จาก oxoid , สหราชอาณาจักร . anaerogen ซองคือซื้อจาก oxoid , สหราชอาณาจักร .สื่อวัฒนธรรมดีเมิน rogosa ชาร์ป ( นาง ) และวุ้น ( oxoid , UK ) เคยรายงานก่อนหน้านี้สำหรับการแยกแบคทีเรียผลิตกรดแลคติก ( de Man et al . , 1960 ) นางวุ้นกับ 0.1-0.2 %ซอร์บิทอลขัดขวางการเจริญเติบโตของเชื้อ Staphylococcus spp . ชนิดและจำนวนยีสต์( เจเน็ต et al . , 2012 ) และที่สำคัญคือเลือก Lactobacillus spp . ( tharmaraj และShah , 2003 ) นางสื่อเสริมแอลซิสเตอีน ( 0.2-5 % ) จะเลือกขนาดกลางการคัดเลือก Bifidobacteria และ Lactobacilli เลือก ( haddadin et al . , 2004 ) นาง mrssorbitol ( 0.2% ) และ mrs-l-cysteine ( 0.25% ) สื่อที่ใช้เพื่อปรับปรุงความจำเพาะของตัวกลางสำหรับการแยกของสายพันธุ์ที่แตกต่างกันของ Lactobacillus . pH ของคุณนาย คุณนาย ซอร์บิทอล ( 0.2% ) และนางแอลซิสเตอีน ( 0.25% ) สื่อ 6.2 , 6 และสำตามลำดับการเตรียมตัวอย่างข้าวสีแดงและสีขาวข้าวดิบ ( 75 กรัม ) ต้มกับน้ำ ( ข้าว : น้ำ 1 : 3 ) 30 นาทีขอรับความสอดคล้องนุ่ม และกระทำโดยการแช่ข้าวดิบหรือสุก ( 50 กรัม )ในการฆ่าเชื้อน้ำ ( ข้าว : น้ำ 1 : 3 ) ค้างคืน ( 12-16 ชั่วโมง ) ในกระถางดินเผา ( 250 ml . )อุณหภูมิห้อง ( 27 องศาเซลเซียส )การคัดแยกแบคทีเรียกรดแล็กติก ( Lab ) จากการหมักข้าวข้าวหมากชัน ( 10 ml ) จากทั้งขาวและแดงสุกและข้าวดิบคือเก็บแยกต่างหากหลังจากเขย่าใน vortex และเจือจางในน้ำเกลือปลอดเชื้อ ( 0.85 % )วิธีการแก้ปัญหาเพื่อให้ได้ความเข้มข้น 10 0 , 10-1 10-2 10-3 , และวิธีการ . เฉยๆ ( 100 µ L ) ของวิธีการเตรียมและจำนวนเชื้อเจือปนในจาน Petri ในซ้ำโดยใช้วิธีแผ่นกระจาย ส่วนแผ่นเป็นเชื้อบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 วัน ภายใต้สภาพไร้อากาศที่สร้างขึ้นโดยชุดแก๊ส anaerogen ( oxoid ) ( ตารางที่ 1 ) อาณานิคมของเชื้อแบคทีเรียแกรมบวกและลบสามารถย่อยอาหารและทำให้บริสุทธิ์ โดย streaking บนจานที่เกี่ยวข้องและต่อมานางสื่อบริสุทธิ์ ทำ 4 - 5ครั้ง เพื่อยืนยันความบริสุทธิ์ของวัฒนธรรม