Results From a Single qPCR Assay ca

Results From a Single qPCR Assay can be Difficult to Interpret. In this experiment, a set of 120 Dicer-substrate RNAs (DsiRNAs) were used for RNAi targeting of the 5’ UTR, coding sequence (CDS), and 3’UTR of “Gene X” mRNA; their positioning is indicated by the colored X axis bar. mRNA knockdown was measured using 2 qPCR assays, one amplifying a region near the 5’ end of the coding sequence of “Gene X” (Assay 1, red diamonds), and the other amplifying a fragment in the 3’ UTR (Assay 2, blue circles). The percentage of “Gene X” mRNA detected by Assay 1 varies, depending on the DsiRNA target site. These data demonstrate that when DsiRNAs that targeted more 3’ “Gene X” positions were used, the expression levels detected by the 5’ and 3’ qPCR assays were significantly different. This result exemplifies the importance of using more than one qPCR assay per target to identify one that will provide a consistent measure of mRNA expression knockdown. Multiplex qPCR is an efficient, cost-effective method for analyzing several such assays in a single reaction.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลลัพธ์จากตัวเดียว qPCR Assay สามารถ Difficult จะ Interpret ในการทดลองนี้ ใช้ชุด 120 RNAs Dicer พื้นผิว (DsiRNAs) สำหรับการ RNAi กำหนดเป้าหมายของการ 5' UTR รหัสลำดับ (ซีดี), และ 3' UTR ของ mRNA "ยีน X" การวางตำแหน่งแสดง โดยสี X แกนบาร์ mRNA knockdown ถูกวัดโดยใช้ 2 qPCR assays หนึ่งมือบริเวณใกล้ปลาย 5' ของลำดับรหัสของ "ยีน X" (วิเคราะห์ 1 เพชรสีแดง), และอื่น ๆ ที่มือส่วนใน 3' UTR (ทดสอบ 2 วงกลมสีน้ำเงิน) เปอร์เซ็นต์ของ mRNA "ยีน X" พบ 1 วิเคราะห์แตก ไซต์เป้าหมาย DsiRNA กัน ข้อมูลเหล่านี้แสดงที่เมื่อ DsiRNAs ที่กำหนดเป้าหมายเพิ่มเติม 3' ใช้ตำแหน่ง "ยีน X" ระดับนิพจน์ที่ตรวจพบ โดย assays qPCR 5' และ 3' แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ ผลลัพธ์นี้ exemplifies ความสำคัญของการใช้มากกว่าหนึ่ง qPCR วิเคราะห์ต่อเป้าหมายระบุที่จะให้การวัดที่สอดคล้องกันของ mRNA นิพจน์ knockdown Multiplex qPCR เป็นวิธีมีประสิทธิภาพ คุ้มค่าสำหรับการวิเคราะห์ต่าง ๆ เช่น assays ในปฏิกิริยาเดียว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลจากเดียว qPCR Assay สามารถยากที่จะตีความ ในการทดลองนี้เป็นชุดของ 120 RNAs Dicer-พื้นผิว (DsiRNAs) ถูกนำมาใช้สำหรับ RNAi กำหนดเป้​​าหมายของ 5 'UTR เข้ารหัสลำดับ (CDS) และ 3'UTR ของ "ยีน X" mRNA; การวางตำแหน่งของพวกเขาถูกระบุโดยแถบแกน X สี ล้มลง mRNA ถูกวัดโดยใช้ 2 ชุดตรวจ qPCR หนึ่งปรากฏการณ์ภูมิภาคใกล้ 5 'ในตอนท้ายของลำดับการเข้ารหัสของ "ยีน X" (Assay 1, เพชรสีแดง) และอื่น ๆ ที่ขยายส่วนใน 3' UTR (Assay 2 วงกลมสีฟ้า) ร้อยละของ "ยีน X" mRNA ตรวจพบโดย Assay 1 แตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับเว็บไซต์เป้าหมาย DsiRNA ข้อมูลเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าเมื่อ DsiRNAs ที่ตรงเป้าหมายมากขึ้น 3 '"ยีน X" ในตำแหน่งที่ถูกนำมาใช้ระดับการแสดงออกที่ตรวจพบโดย 5' และ 3 'ตรวจ qPCR แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ ผลที่ได้นี้เป็นตัวอย่างสำคัญของการใช้มากกว่าหนึ่งทดสอบ qPCR ต่อเป้าหมายในการระบุอย่างใดอย่างหนึ่งที่จะช่วยให้เป็นมาตรการที่สอดคล้องกันของการแสดงออกของ mRNA ล้มลง Multiplex qPCR ที่มีประสิทธิภาพวิธีการที่มีประสิทธิภาพในการวิเคราะห์การตรวจดังกล่าวในหลายปฏิกิริยาเดียว

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลจากการทดสอบ qpcr เดียวสามารถจะยากที่จะตีความ ในการทดลองนี้ ชุด 120 พระจริยวัตรพื้นผิว RNAs ( dsirnas ) ถูกนำมาใช้เพื่อหาเป้าหมายของ 5 ' UTR ลำดับการเข้ารหัส ( ซีดี ) และ 3'utr ของ " ยีน X " ของ การวางตำแหน่งของพวกเขาจะแสดงด้วยสี แกน X Bar น็อคของการวัด qpcr ) 2 ,หนึ่งขยายภูมิภาคใกล้ 5 จบการเขียนลำดับของ " ยีน X " ( ( 1 , เพชรสีแดง ) , และอื่น ๆขยายส่วนใน 3 ' UTR ( วงกลมสีฟ้า ( 2 ) เปอร์เซ็นต์ของ " ยีน X " พบว่า mRNA 1 ขึ้นอยู่กับเว็บไซต์เป้าหมาย dsirna . ข้อมูลเหล่านี้แสดงให้เห็นว่า เมื่อ dsirnas ที่เป้าหมาย 3 ' " ยีน X " ตำแหน่งถูกใช้ไประดับการแสดงออกที่ตรวจพบโดย 5 ' และ 3 ' qpcr ) แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ผลนี้เป็นตัวอย่างที่สำคัญของการใช้มากกว่าหนึ่ง qpcr ต่อเป้าหมายเพื่อระบุวิธีหนึ่งที่จะให้วัดที่สอดคล้องกันของ mRNA แสดงออกน็อคดาวน์ . qpcr เป็นมัลติเพล็กซ์ที่มีประสิทธิภาพ วิธีที่มีประสิทธิภาพในการวิเคราะห์ต่างๆ ใช้ในปฏิกิริยาเดี่ยว