2.3. Quantification of the concentr

2.3. Quantification of the concentration and inhibitory activity of
reuterin
Reuterin concentration was quantified bya colorimetric method
adapted from Circle et al. (1945). Briefly, serial dilutions of purified
reuterin in sterile distilled water were prepared and colorimetric
reaction after the addition of tryptophan solution (0.01 M solution
in 0.1 N HCl) and concentrated HCl (32%, 10 N) were carried out.
Solutions were incubated at 60?C for 5 min in a Thermomixer
compact (Eppendorf, Hamburg, Germany) to develop colour. The
absorbance was measured at 490 nm with a Beckman DU-650
spectrophotometer (Beckman Coulter, Inc., Palo Alto, CA, USA). A
standard curve of acrolein in water (0e4 mM) was also prepared
plotting acrolein concentrations against the average of three
absorbance measurements for each concentration. Samples with
reuterin were compared against the acrolein standard to calculate
molar concentration of reuterin stock solution. Experiments were
carried out in triplicate.
The inhibitoryactivityof reuterin stock solutionwas determined
by using the modified assay of Chung et al. (1989) using E. coli K12
as indicator strain. Reuterin aqueous solutionwas serially diluted in
sterile water and 150 ml were added to microtiter plate wells.
Overnight culture of test strain was diluted to approximately
104CFU/g in double strength Tryptic Soy Broth (TSB, Biolife) and
150 ml volumes were dispensed to each well. Distilled water
without reuterin was used as negative control. Plates were incu-
bated at 37?C and the absorbance was read during 24 h using a
Multiskan Spectrum microplate reader (Multiskan Spectrum,
Thermo Labsystems, Finland) at a wavelength of 600 nm. Reuterin
arbitrary units (AU) were defined as the reciprocal of the highest
two-fold dilution that did not allow the growth of the indicator
strain. Three independent experiments were conducted and three
replicates per reuterin concentration were analyzed.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การนับความเข้มข้นและลิปกลอสไขกิจกรรมของreuterinความเข้มข้นของ Reuterin ถูกวิธีเทียบเคียง quantified byaดัดแปลงจากวง et al. (ค.ศ. 1945) สั้น ๆ dilutions ประจำของศูนย์คุ้มครองฯreuterin ในน้ำกลั่นฆ่าเชื้อเตรียมไว้ และเทียบเคียงปฏิกิริยาหลังจากการเพิ่มของทริปโตเฟน (โซลูชัน 0.01 Mใน 0.1 N HCl) และเข้มข้น HCl (32%, 10 N) ได้ดำเนินการโซลูชั่นถูก incubated ที่ 60 C สำหรับ 5 นาทีในการ Thermomixerกระชับ (Eppendorf ฮัมบูร์ก เยอรมนี) พัฒนาสี ที่มีวัด absorbance ที่ 490 nm กับ Beckman DU-650เครื่องทดสอบกรดด่าง (Beckman Coulter, Inc. ดัลลัส CA, USA) Aเส้นโค้งมาตรฐานของ acrolein ในน้ำ (0e4 mM) มีพร้อมพล็อต acrolein ความเข้มข้นกับค่าเฉลี่ยของ 3วัด absorbance สำหรับแต่ละความเข้มข้น ตัวอย่างที่มีreuterin ถูกเปรียบเทียบกับ acrolein มาตรฐานในการคำนวณเข้มข้นแก้ปัญหาหุ้น reuterin สบ การทดลองได้ดำเนินการใน triplicateการ inhibitoryactivityof reuterin หุ้น solutionwas กำหนดโดยการแก้ไขวิเคราะห์ของ Chung et al. (1989) ใช้ E. coli K12เป็นต้องใช้ตัวบ่งชี้ Reuterin solutionwas อควี serially diluted ในน้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อและ 150 ml ถูกเพิ่มเพื่อ microtiter แผ่นบ่อต้องใช้ทดสอบแรมวัฒนธรรมถูกผสมไปประมาณ104CFU/g คู่พรึบ Tryptic ซุปถั่วเหลือง (TSB, Biolife) และปริมาณ 150 ml มีคำให้ดีละ น้ำกลั่นโดย reuterin ถูกใช้เป็นตัวควบคุมค่าลบ แผ่น incu-bated ที่ 37 C และ absorbance ที่ถูกอ่านในระหว่างการใช้ 24 ชมอ่าน microplate Multiskan สเปกตรัม (Multiskan Spectrumเทอร์โม Labsystems ฟินแลนด์) ที่ความยาวคลื่นของ 600 nm Reuterinกำหนดหน่วย (AU) ถูกกำหนดเป็นส่วนกลับของสูงสุดสองพับเจือจางที่ไม่อนุญาตให้มีการเจริญเติบโตของตัวบ่งชี้ต้องใช้ ได้ดำเนินการทดลองขึ้นอยู่กับสาม และสามต่อความเข้มข้นของ reuterin เหมือนกับถูกวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 ปริมาณของความเข้มข้นและการยับยั้งของ
reuterin
เข้มข้น Reuterin ถูกวัด bya
วิธีการสีที่ดัดแปลงมาจากวงกลมet al, (1945) สั้น ๆ , เจือจางอนุกรมของบริสุทธิ์
reuterin
ในน้ำกลั่นปลอดเชื้อได้รับการเตรียมความพร้อมและสีปฏิกิริยาหลังจากที่นอกเหนือจากการแก้ปัญหาโพรไบโอ(0.01 แก้ปัญหา M
0.1 N HCl) และเข้มข้น HCl (32%, 10 N) ได้ดำเนินการ.
โซลูชั่นถูกบ่มที่ 60 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีใน Thermomixer
ขนาดกะทัดรัด (Eppendorf ฮัมบูร์กเยอรมนี) ในการพัฒนาสี
การดูดกลืนแสงวัดที่ 490 นาโนเมตรที่มีเบคค์ DU-650
spectrophotometer (Beckman Coulter, Inc พาโลอัลโต, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา)
กราฟมาตรฐานของ acrolein ในน้ำ (มิลลิ 0e4)
ถูกจัดทำขึ้นนอกจากนี้ยังมีการวางแผนความเข้มข้นacrolein
กับค่าเฉลี่ยของสามการวัดการดูดกลืนแสงความเข้มข้นของแต่ละคน ตัวอย่างที่มี
reuterin ถูกนำมาเปรียบเทียบกับมาตรฐาน acrolein
ในการคำนวณความเข้มข้นของการแก้ปัญหากรามหุ้นreuterin
การทดลองดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า.
reuterin solutionwas หุ้น inhibitoryactivityof
กำหนดโดยใช้การทดสอบแก้ไขChung et al, (1989) โดยใช้อี K12 coli
เป็นสายพันธุ์ที่ตัวบ่งชี้ solutionwas น้ำ Reuterin
ปรับลดลำดับในน้ำหมันและ150 มล. ถูกเพิ่มเข้าไปในหลุมแผ่นไมโคร.
วัฒนธรรมค้างคืนสายพันธุ์ทดสอบลดลงเหลือประมาณ
104CFU / g ในความแข็งแรงคู่ Tryptic Soy Broth (TSB, BioLife) และ
150 มล. ปริมาณที่ถูกจ่ายให้กับแต่ละดี . น้ำกลั่นโดยไม่ต้อง reuterin ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบ
แผ่นถูก incu-
ซึ้งน้อยลงที่ 37 องศาเซลเซียสและการดูดกลืนแสงได้อ่านในช่วง 24 ชั่วโมงโดยใช้
Multiskan สเปกตรัมอ่าน microplate (Multiskan
สเปกตรัมเทอร์โมLabsystems, ฟินแลนด์) ที่ความยาวคลื่น 600 นาโนเมตร Reuterin
หน่วยพล (AU) ได้รับการกำหนดให้เป็นซึ่งกันและกันของสูงสุดเจือจางสองเท่าที่ไม่อนุญาตให้มีการเจริญเติบโตของตัวบ่งชี้ที่สายพันธุ์ สามทดลองที่เป็นอิสระได้ดำเนินการสามซ้ำต่อความเข้มข้น reuterin วิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 ปริมาณของความเข้มข้นและกิจกรรมการยับยั้งของรูเทอริน

รูเทอรินความเข้มข้นปริมาณด้วยวิธี Colorimetric
ดัดแปลงจากวงกลม et al . ( 1945 ) สั้น ๆ , ซีเรียลเจือจางบริสุทธิ์ปลอดเชื้อ
รูเทอรินในน้ำกลั่นเตรียมและปฏิกิริยา 7.4
หลังจากเติมทริปโตเฟน โซลูชั่น ( 0.01 M
ใน 0.1 N สารละลาย HCl ) และเข้มข้น HCl ( 32 %10 ) พบว่า โซลูชั่น
อุณหภูมิ 60 ? C เป็นเวลา 5 นาทีใน thermomixer
ขนาดกะทัดรัด ( เพนดอร์ฟ , ฮัมบูร์ก , เยอรมนี ) พัฒนาสี
ค่าวัดที่ 490 nm กับเบคแมน du-650
Spectrophotometer ( เบคแมน คูลเตอร์ อิงค์ พาโล อัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) เป็นเส้นโค้งมาตรฐานของโคลีนในน้ำ
( 0e4 มม. ) ก็เตรียมวางแผนกับค่าเฉลี่ยปริมาณโคลีน
3
ค่าการวัดของแต่ละความเข้มข้น ตัวอย่างเปรียบเทียบกับมาตรฐาน รูเทอริน

อะโครลีนเพื่อคำนวณความเข้มข้นโดยโมลของสารละลาย Stock รูเทอริน . การทดลอง
ดำเนินการทั้งสามใบ inhibitoryactivityof รูเทอริน

solutionwas กำหนดหุ้นโดยใช้วิธีดัดแปลงของชอง et al . ( 1989 ) ใช้ E . coli K12
เป็นตัวกรองรูเทอรินน้ำให้เจือจางในน้ำเป็น solutionwas
เป็นหมันและมีการเพิ่มเวล 150 มิลลิลิตรไมโครเพลท
วัฒนธรรมค้างคืนทดสอบความเครียดเจือจางประมาณ
104cfu / กรัมในน้ำซุปถั่วเหลือง ( TSB ความแรงของคู่ , อาหาร biolife ) และปริมาณ 150 มิลลิลิตรมี dispensed
กัน . น้ำกลั่น
โดยไม่รูเทอรินใช้ควบคุมลบ แผ่นเป็น incu -
ลดที่ 37C และการดูดกลืนแสงได้อ่านในช่วง 24 ชั่วโมง โดยใช้พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( multiskan อ่าน
multiskan สเปกตรัมสเปกตรัม
เทอร์โม labsystems , ฟินแลนด์ ) ที่ความยาวคลื่น 600 นาโนเมตร รูเทอริน
พลหน่วย ( AU ) กำหนดเป็นส่วนกลับของ dilution สูงสุด
สองเท่านั้นไม่อนุญาตให้ การเจริญเติบโตของตัวบ่งชี้
เมื่อย 3 การทดลองการทดลอง 3
และอิสระซ้ำต่อรูเทอรินปริมาณวิเคราะห์