Gels were photographed and PCR
bands quantified by using a standard DNA (100 bp ladder, Promega).
PCR products were then separated by Denaturing Gradient Gel
Electrophoresis (DGGE) [(Dcode TM universal mutation detection
system, Bio-Rad)], using the procedure first described by Muyzer,
De Waal, and Uitterlinden (1993) and improved by Leesing
(2005). Similar amounts of PCR amplicons were loaded into 8%
(w/v) polyacrylamide gels (acrylamide/N,N-methylene bisacrylamide,
37.5/1, Promega) in 1 TAE buffer (40 mM TriseHCl, pH 7.4,
20 mM sodium acetate, 1.0 mM Na2-EDTA). Electrophoreses were
performed at 60 C, using a denaturing gradient in the 30e60%
range (100% corresponding to 7 M urea and 40% v/v formamide,
Promega). The gels were electrophoresed at 20 V for 10 min and
then at 80 V for 12 h. After electrophoresis, the gels were stained for
30 min with ethidium bromide, rinsed in distilled water for 20 min
and then photographed as described above.
Gels were photographed and PCRbands quantified by using a standard DNA (100 bp ladder, Promega).PCR products were then separated by Denaturing Gradient GelElectrophoresis (DGGE) [(Dcode TM universal mutation detectionsystem, Bio-Rad)], using the procedure first described by Muyzer,De Waal, and Uitterlinden (1993) and improved by Leesing(2005). Similar amounts of PCR amplicons were loaded into 8%(w/v) polyacrylamide gels (acrylamide/N,N-methylene bisacrylamide,37.5/1, Promega) in 1 TAE buffer (40 mM TriseHCl, pH 7.4,20 mM sodium acetate, 1.0 mM Na2-EDTA). Electrophoreses wereperformed at 60 C, using a denaturing gradient in the 30e60%range (100% corresponding to 7 M urea and 40% v/v formamide,Promega). The gels were electrophoresed at 20 V for 10 min andthen at 80 V for 12 h. After electrophoresis, the gels were stained for30 min with ethidium bromide, rinsed in distilled water for 20 minand then photographed as described above.
การแปล กรุณารอสักครู่..
เจลถูกถ่ายภาพและ PCR
วงดนตรีที่วัดโดยใช้ดีเอ็นเอมาตรฐาน (100 บันได bp, Promega).
ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกแยกออกแล้วโดย denaturing ไล่โทนสีเจล
Electrophoresis (DGGE) [(Dcode TM
การตรวจหาการกลายพันธุ์สากลระบบBio-Rad)] โดยใช้ ขั้นตอนแรกโดย Muyzer,
De Waal และ Uitterlinden (1993) และการปรับปรุงโดย Leesing
(2005) จำนวนที่ใกล้เคียงของ amplicons PCR ถูกโหลดลง 8%
(w / v) เจลอะคริเลต (ริลาไมด์ / N, N-bisacrylamide เมทิลีน,
37.5 / 1, Promega) ใน 1? บัฟเฟอร์ TAE (40 มิลลิ TriseHCl พีเอช 7.4,
20 มิลลิ acetate โซเดียม 1.0 มิลลิ Na2-EDTA) Electrophoreses ถูกดำเนินการใน 60 C โดยใช้การไล่ระดับสี denaturing ใน 30e60% ช่วง (100% สอดคล้องกับ 7 M ยูเรียและ 40% ปริมาตร / ปริมาตร formamide, Promega) เจลถูก electrophoresed ที่ 20 V เป็นเวลา 10 นาทีและจากนั้นที่80 V 12 ชั่วโมง หลังจากที่อิเลคเจลที่ถูกย้อมสีสำหรับ30 นาทีกับโบรไมด์ ethidium ล้างในน้ำกลั่นเป็นเวลา 20 นาทีและถ่ายภาพแล้วที่อธิบายข้างต้น
การแปล กรุณารอสักครู่..
เจลได้ถ่ายภาพและ PCR
แถบวัดโดยใช้ดีเอ็นเอมาตรฐาน ( บันได , 100 BP promega ) .
ผลิตภัณฑ์ PCR จึงแยกจากกันโดยี่ลาดเจล
electrophoresis ( การทดลอง ) [ ( dcode TM สากลการตรวจหา
ระบบชีวภาพราด ) ] , การใช้ขั้นตอนแรกที่อธิบายโดย muyzer
, เดอ วาล และ uitterlinden ( 1993 ) และการปรับปรุงโดย กาหลง
( 2005 )จำนวนที่คล้ายกันของ PCR amplicons ถูกโหลดลง 8 %
( w / v ) ( โพลีอะคริลาไมด์เจลอะคริลาไมด์ / n n-methylene bisacrylamide 37.5/1
, , promega ) ใน 1 แทบัฟเฟอร์ ( 40 มม. trisehcl pH 7.4
20 มิลลิเมตรโซเดียมอะซิเตต , 1.0 mM EDTA ๆ ) electrophoreses ถูก
แสดงที่ 60 องศาเซลเซียสโดยใช้ี่ลาดในช่วง 30e60 %
( 100% สอดคล้องกับ 7 M ยูเรียและ 40 % v / v Formamide ,
promega )เจลเป็น electrophoresed 20 V 10 นาที
แล้วที่ 80 V 12 ชั่วโมง หลังจากอิเล็กเจลใช้ย้อมสำหรับ
30 นาทีกับทิเดียมโบรไมด์ , ล้างในน้ำกลั่นนาน 20 นาทีแล้วถ่ายรูป
ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น
การแปล กรุณารอสักครู่..