PCR was carried out in 20 µl volume

PCR was carried out in 20 µl volumes each containing 200 ng of DNA, 0.2 mM each of dNTP, 0.5 µM of each oligonucleotide primer and 1 U Taq polymerase. Reactions were carried out in a thermal cycler (Life Technologies, California, USA) using the following program: an initial denaturation at 94 °C for 2 min; 30 cycles of 94 °C for 1 min, 54 °C for 1 min (B. subtilis) and 45 °C for 1 min (P. fluorescens), 72 °C for 1 min, final extension at 72 °C for 7 min. Amplified DNA were electrophoresed in a 1% agarose gel, stained with ethidium bromide and visualized under UV trans-illuminator. For amplification of B. subtilis species specific DNA fragment from ytcP gene, the following primers were used: Forward 5′ GCTTACGGGTTATCCCGC3′ and reverse 5′ CCGACCCCATTTCAGACATATC3′ (Kwon et al., 2009). The primers used for amplification of P. fluorescens species specific DNA fragment from 16S–23S ITS region were: Forward 5′: AAGTCGTAACAAGGTAG3′ and reverse 5′ GACCATATATAACCCCAAG3′ (Rameshkumar et al., 2002).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

PCR ถูกดำเนินการใน 20 µl ไดรฟ์ข้อมูลแต่ละที่ประกอบด้วย 200 ng ของดีเอ็นเอ 0.2 มม.แต่ละ dNTP, 0.5 µM แต่ละพื้น oligonucleotide และพอลิเมอเรส U Taq 1 ปฏิกิริยาได้ดำเนิน cycler ร้อน (ชีวิตเทคโนโลยี แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) โดยใช้โปรแกรมต่อไปนี้: denaturation เป็นเริ่มต้นที่ 94 ° C สำหรับ 2 นาที รอบ 30 94 องศาเซลเซียส 1 นาที การ 54 ° C (subtilis เกิด) 1 นาที และ 45 ° C ใน 1 นาที (P. fluorescens), 72 องศาเซลเซียสใน 1 นาที ขยายสุดท้ายที่ 72 ° C สำหรับ 7 นาทีขยายดีเอ็นเอมี electrophoresed ในเจ 1% agarose สีกับโบรไมด์ ethidium และ visualized ภายใต้ UV ทรานส์ illuminator การขยายของส่วน DNA สายพันธุ์เฉพาะ subtilis เกิดจากยีน ytcP ใช้ไพรเมอร์ดังต่อไปนี้: ส่งต่อกลับ 5′ CCGACCCCATTTCAGACATATC3′ และ 5′ GCTTACGGGTTATCCCGC3′ (Kwon et al., 2009) ไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับขยายของส่วน DNA เฉพาะชนิด P. fluorescens จาก 16S – 23S ของภูมิภาคถูก: 5′ ไปข้างหน้า: AAGTCGTAACAAGGTAG3′ และกลับ 5′ GACCATATATAACCCCAAG3′ (Rameshkumar และ al., 2002)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PCR ได้ดำเนินการใน 20 ไมโครลิตรปริมาณแต่ละที่มี 200 นาโนกรัมของดีเอ็นเอ 0.2 มิลลิแต่ละ dNTP, 0.5 ไมครอนของไพรเมอร์ oligonucleotide แต่ละคนและ 1 U โพลิเมอร์ Taq ปฏิกิริยาได้ดำเนินการใน Cycler ร้อน (ไลฟ์เทคโนโลยีแคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา) โดยใช้โปรแกรมต่อไปนี้: denaturation เริ่มต้นที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที; 30 รอบของ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที 54 ° C เป็นเวลา 1 นาที (B. subtilis) และ 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที (พี fluorescens) 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีส่วนขยายสุดท้ายที่ 72 ° C เป็นเวลา 7 นาที . ดีเอ็นเอถูกขยาย electrophoresed ใน 1% agarose เจล, ย้อมด้วย ethidium bromide และมองเห็นภายใต้แสงยูวีทรานส์ไฟ สำหรับการขยายของสายพันธุ์บี subtilis ชิ้นดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงจากยีน ytcP, ไพรเมอร์ต่อไปนี้ถูกใช้ไปข้างหน้า 5 'GCTTACGGGTTATCCCGC3' และย้อนกลับ 5 'CCGACCCCATTTCAGACATATC3 (. ควอน et al, 2009) ไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับการขยายของพี fluorescens สายพันธุ์ชิ้นดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงจาก 16S-23S ภูมิภาค ITS คือไปข้างหน้า 5 ': AAGTCGTAACAAGGTAG3' และย้อนกลับ 5 'GACCATATATAACCCCAAG3 (. Rameshkumar, et al, 2002)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โดยได้ดำเนินการใน 20 เล่มµ L แต่ละที่มี 200 นาโนดีเอ็นเอ , 0.2 มม. แต่ละ dntp 0.5 เมตร ซึ่งแต่ละµรองพื้น 1 U ได้ดีโดย . ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นในรอบความร้อน ( ชีวิตเทคโนโลยี แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) โดยใช้โปรแกรมต่อไปนี้ : ( เริ่มต้นที่ 94 ° C เป็นเวลา 2 นาที 30 รอบ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที 54 ° C เป็นเวลา 1 นาที ( B . subtilis ) และ 45 ° C เป็นเวลา 1 นาที ( Pี่ ) , 72 ° C เป็นเวลา 1 นาทีที่ 72 ° C ) สุดท้าย 7 นาที แถบดีเอ็นเอถูก electrophoresed ในเจล ( 1 ) ย้อมด้วยคู่ bromide และมองเห็นภายใต้แสงไฟยูวีทราน . สำหรับเด็กของ B . subtilis สายพันธุ์เฉพาะของดีเอ็นเอจากยีน ytcp , ไพรเมอร์ต่อไปนี้ที่ใช้ : ไปข้างหน้า 5 นั้นได้รับ gcttacgggttatcccgc3 และกลับ 5 นั้นได้รับ ccgaccccatttcagacatatc3 ( ควอน et al . ,2009 ) ไพรเมอร์แบบ P . fluorescens สายพันธุ์ที่ใช้เฉพาะดีเอ็นเอจาก 16S – 23s ภูมิภาค : ไปข้างหน้า 5 ’ : aagtcgtaacaaggtag3 ได้รับและกลับ 5 นั้นได้รับ gaccatatataaccccaag3 ( rameshkumar et al . , 2002 )