separate biochemical assays (Table

separate biochemical assays (Table 1). The first was
a fluorescence-polarization-based RNA-binding
assay to determine the affinity of each mutant for a
small RNA hairpin [16]. The majority of mutations did
not significantly affect RNA binding, but C290D and
C290E did result in weakened affinities with 4-fold
and 8-fold increases in Kd, respectively. The second
assay was a classical oligo-dT/poly(A) extension
assay that measures the bulk incorporation of
α-
32P-UMP nucleotides upon primer extensions
with 50- to 300-nt-long templates. Activities are
reported as a percentage of the wild-type control
activity that has been set to 100%. Due to the nature
of this extension assay, higher activity is generally
associated with polymerases that can processively
elongate long stretches of RNA in a short amount of
time, which is due to minimizing the number of slow
initiation events. Last, we investigated the ability of
each mutant to undergo three successive rounds of
nucleotide addition in a stepwise nucleotide incorporation
assay using a RNA hairpin substrate similar
to that used in the RNA-binding assay.
The resulting data have been used to divide the
mutant polymerases into three biochemical activity
classes (Table 1). Class I mutants retain the ability to
undergo three rounds of nucleotide addition and
have activities in the poly(A) elongation assay that
differ significantly from that of the wild-type enzyme.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยก assays ชีวเคมี (ตารางที่ 1) เป็นครั้งแรกผูกอาร์เอ็นเอ-fluorescence โพลาไรซ์ตามวิเคราะห์เพื่อกำหนดความสัมพันธ์ของแต่ละ mutant สำหรับการ[16] กิ๊บอาร์เอ็นเอขนาดเล็ก ส่วนใหญ่ของการกลายพันธุ์ได้อย่างมีนัยสำคัญไม่มีผลต่ออาร์เอ็นเอรวม แต่ C290D และC290E ได้ผลอย่างไร affinities มี 4-foldและ 8-fold เพิ่มใน Kd ตามลำดับ ที่สองวิเคราะห์มีส่วนขยายเป็น oligo-dT/poly(A) คลาสสิกวิเคราะห์ที่วัดการประสานจำนวนมากΑ-นิวคลีโอไทด์ 32P-UMP ตามส่วนขยายของพื้นกับแม่ 50 ถึง 300-nt-ยาว กิจกรรมรายงานเป็นเปอร์เซ็นต์ของการควบคุมชนิดของป่ากิจกรรมที่มีการตั้งค่าถึง 100% เนื่องจากธรรมชาติของการทดสอบนี้ส่วนขยาย กิจกรรมสูงโดยทั่วไปจะเกี่ยวข้องกับ polymerases ที่สามารถ processivelyelongate ยาวอาร์เอ็นเอในการย่อเวลา ซึ่งเกิดจากการลดจำนวนของช้าเหตุการณ์เริ่มต้น สุดท้าย เราตรวจสอบความสามารถของแต่ละ mutant จะรับรอบต่อเนื่อง 3นอกจากนี้นิวคลีโอไทด์ในประสาน stepwise นิวคลีโอไทด์ทดสอบใช้กับอาร์เอ็นเอกิ๊บพื้นผิวเหมือนกันที่ใช้ในการวิเคราะห์รวมอาร์เอ็นเอใช้เพื่อแบ่งข้อมูลผลลัพธ์polymerases กลายพันธุ์เป็นกิจกรรมเชิงชีวเคมี 3ห้องเรียน (ตารางที่ 1) คลาฉันสามารถรักษาสายพันธุ์รับรอบที่สามนี้นิวคลีโอไทด์ และมีกิจกรรมใน poly(A) elongation assay ที่แตกต่างอย่างมีนัยสำคัญจากเอนไซม์ชนิดป่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจทางชีวเคมีที่แยกจากกัน (ตารางที่ 1) เป็นครั้งแรกที่
เรืองแสงโพลาไรซ์ที่ใช้ RNA ผูกพัน
ทดสอบเพื่อตรวจสอบความสัมพันธ์ของแต่ละคนกลายพันธุ์สำหรับ
กิ๊บ RNA ขนาดเล็ก [16] ส่วนใหญ่ของการกลายพันธุ์ที่ไม่
ได้ส่งผลกระทบต่อ RNA ผูกพัน แต่ C290D และ
C290E ไม่ส่งผลให้เกิดความพอใจลดลง 4 เท่า
และเพิ่มขึ้น 8 เท่าใน Kd ตามลำดับ สอง
การทดสอบเป็น Oligo-dT คลาสสิก / โพลี (A) การขยาย
การทดสอบว่ามาตรการการรวมกลุ่มของ
α-
นิวคลีโอ 32P-ขานตามนามสกุลของไพรเมอร์
ที่มี 50 ถึง 300-NT-นานแม่ กิจกรรมที่มีการ
รายงานว่าร้อยละของการควบคุมป่าประเภท
กิจกรรมที่ได้รับการตั้งค่าให้เป็น 100% เพราะธรรมชาติ
ของการทดสอบโดยอาศัยส่วนขยายนี้กิจกรรมที่สูงขึ้นโดยทั่วไป
ที่เกี่ยวข้องกับ polymerases ที่ processively สามารถ
ยืดยาวเหยียดของอาร์เอ็นเอในปริมาณที่สั้นของ
เวลาซึ่งเกิดจากการลดจำนวนของช้า
เหตุการณ์เริ่มต้น ที่ผ่านมาเราตรวจสอบความสามารถของ
แต่ละคนกลายพันธุ์จะได้รับรอบสามต่อเนื่องของ
นอกจากนี้เบื่อหน่ายในการรวมตัวกันเบื่อหน่ายแบบขั้นตอน
การตรวจสอบปริมาณการใช้สารตั้งต้นกิ๊บ RNA คล้าย
กับที่ใช้ในการทดสอบ RNA ผูกพัน.
ข้อมูลผลได้ถูกนำมาใช้ในการแบ่ง
polymerases กลายพันธุ์ เป็นสามกิจกรรมทางชีวเคมี
ชั้นเรียน (ตารางที่ 1) Class I กลายพันธุ์รักษาความสามารถในการ
รับรอบสามของการเติมเบื่อหน่ายและ
มีกิจกรรมในโรงเรียนอาชีวะ (A) การทดสอบการยืดตัวที่
แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญจากที่ของเอนไซม์ชนิดป่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แยกทางชีวเคมี ) ( ตารางที่ 1 ) ตัวแรก

) เรืองโพลาไรเซชันซึ่งผูกพันโดยศึกษาความสัมพันธ์ของแต่ละยีนกลายพันธุ์ ( กิ๊บเป็น
ขนาดเล็ก 16 ] ส่วนใหญ่ของการกลายพันธุ์แล้ว
ไม่มีผลต่อ RNA ผูก แต่ c290d และ
c290e ได้ผลในบอด affinities กับ 4 เท่าและเพิ่มขึ้น
8-fold kD ตามลำดับ 2
การทดสอบเป็นคลาสสิกโอลิโก DT / poly ( A )
) ขยายมาตรการเป็นกลุ่มการรวมตัวของ

32p-ump แอลฟานิวคลีโอไทด์บนรองพื้นนามสกุล
กับ 50 - 300 NT นานแม่แบบ กิจกรรม
รายงานเป็นร้อยละของการควบคุม
กิจกรรมที่ถูกกำหนดให้ 100 % เนื่องจากธรรมชาติของการขยายกิจกรรมนี้

โดยที่สูงโดยทั่วไปคือที่เกี่ยวข้องกับ polymerases ที่สามารถ processively
ยาวยาวเหยียดของ RNA ในสั้น
เวลา ซึ่งเกิดจากการลดจำนวนของเหตุการณ์ที่เริ่มต้นช้า

สุดท้าย เราได้ตรวจสอบความสามารถของ
แต่ละกลายพันธุ์ผ่าน 3 นัดต่อเนื่อง นอกจากนี้ลำดับเบสในยีน =

) การใช้พื้นผิวที่คล้ายกัน
ปิ่น .ที่ใช้ในการทำให้ RNA ( . . .
ข้อมูลจะถูกใช้เพื่อ แบ่งเป็น 3 ห้องเรียน กิจกรรม polymerases กลายพันธุ์

ทางชีวเคมี ( ตารางที่ 1 ) ผมเรียนพันธ์รักษาความสามารถ

เจอสามรอบนอกจากนี้ลำดับเบส
มีกิจกรรมใน poly ( A ) พบว่ามีค่า
แตกต่างจากที่ผลิตเอนไซม์