2.2. Bacterial strains, plasmids, a

2.2. Bacterial strains, plasmids, and culture media

Chromosomal DNA of Enterobacter sp. FMB-1 was used as a
source for SIase gene. The composition of SPY medium and growth conditions for Enterobacter sp. FMB-1 has been previously described (Cho et al., 2007b). Escherichia coli XL1-blue [endA1 gyrA96 (nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F’[::Tn10 proA+B+ lacIq D(lacZ)M15] hsdR17(rK mK+)] was used as a host for DNA manipulation
and transformation. L. lactis MG1363 was used as a host for heterologous expression of SIase. Two Lactococcus expression vectors, pAMJ2006 and pAMJ2008, were kindly provided by Bioneer A/S (Horsholm, Denmark). In these vectors, an optimized signal peptide,SP310mut2, is designed to secrete heterologous proteins into the extracellular environment (Ravn et al., 2003). Recombinant L.lactis MG1363 were cultured at 30 C in M17 broth supplemented with 0.5% glucose (GM17) or MRS (Difco Laboratories, Detroit, MI,USA). To select recombinant E. coli and L. lactis harboring the recombinant SIase gene, erythromycin was added into LB and GM17 media at the concentrations of 100 and 5 lg/mL,
respectively.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. แบคทีเรียสายพันธุ์ plasmids และสื่อวัฒนธรรม ใช้ sp.ของโครโมโซมดีเอ็นเอของ Enterobacter FMB-1 เป็นการแหล่งที่มาสำหรับยีน SIase องค์ประกอบของ SPY กลางและเติบโตเงื่อนไขสำหรับ Enterobacter sp. FMB-1 ได้เคยอธิบายไว้ (Cho et al. 2007b) Escherichia coli XL1-น้ำเงิน [endA1 gyrA96 lac relA1 thi-1 recA1 (nalR) glnV44 F'[:: Tn10 พร้าว + B + lacIq D (lacZ) M15] hsdR17 (mK K + r)] ใช้เป็นโฮสต์สำหรับการจัดการที่ดีเอ็นเอและการเปลี่ยนแปลง L. lactis MG1363 ใช้เป็นโฮสต์สำหรับนิพจน์ heterologous ของ SIase สอง Lactococcus นิพจน์เวกเตอร์ pAMJ2006 และ pAMJ2008 ได้โปรดโดย Bioneer a/s (Horsholm เดนมาร์ก) ในเวกเตอร์เหล่านี้ การปรับสัญญาณเปปไทด์ SP310mut2 ถูกออกแบบมาขับ heterologous โปรตีนในสภาพแวดล้อมสาร (Ravn et al. 2003) Recombinant L.lactis MG1363 ถูกล้างที่ 30 C ในซุป M17 เสริม ด้วยกลูโคส 0.5% (GM17) หรือ MRS (ห้องปฏิบัติการ Difco ดีทรอยต์ MI สหรัฐอเมริกา) เลือก E. coli และ L. lactis recombinant เก็บงำยีน SIase recombinant ร่างถูกเพิ่มลงในปอนด์และ GM17 สื่อที่ความเข้มข้นของ 100 และ 5 lg/mLตามลาดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 สายพันธุ์แบคทีเรีย, พลาสมิดและสื่อวัฒนธรรม

โครโมโซมดีเอ็นเอของ Enterobacter SP FMB-1 ถูกใช้เป็น
แหล่งสำหรับ SIase ยีน องค์ประกอบของ SPY กลางและการเจริญเติบโตของเงื่อนไขในการ Enterobacter SP FMB-1 ได้รับการอธิบายก่อนหน้านี้ (Cho et al., 2007B) Escherichia coli XL1 ฟ้า [endA1 gyrA96 (nalR) Thi-1 recA1 relA1 ครั่ง glnV44 F '[:: Tn10 มลายู + B + lacIq D (lacZ) M15] hsdR17 (R? K mK +)] ได้ถูกใช้ในการเป็นเจ้าภาพสำหรับการจัดการดีเอ็นเอ
และการเปลี่ยนแปลง L. lactis MG1363 ได้ถูกใช้ในการเป็นเจ้าภาพในการแสดงออกของ heterologous SIase สอง Lactococcus เวกเตอร์แสดงออก pAMJ2006 และ pAMJ2008 ได้ให้ความกรุณาโดย Bioneer A / S (Hørsholm, เดนมาร์ก) ในเวกเตอร์เหล่านี้เป็นสัญญาณเปปไทด์ที่ดีที่สุด SP310mut2 ถูกออกแบบมาเพื่อหลั่งโปรตีน heterologous ในสภาพแวดล้อม extracellular นี้ (Ravn et al., 2003) recombinant L.lactis MG1363 เลี้ยงวันที่ 30 องศาเซลเซียสในน้ำซุป M17 เสริมด้วยกลูโคส 0.5% (GM17) หรือ MRS (Difco ห้องปฏิบัติการ, ดีทรอยต์, มิชิแกน, สหรัฐอเมริกา) เพื่อเลือก recombinant E. coli และ L. lactis เก็บงำยีน SIase recombinant, erythromycin ถูกเพิ่มเข้าไปใน LB และ GM17 สื่อที่ความเข้มข้น 100 และ 5 LG / มิลลิลิตร,
ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . แบคทีเรียสายพันธุ์ ) และสื่อวัฒนธรรมโครโมโซมอลดีเอ็นเอของ Enterobacter sp . fmb-1 ถูกใช้เป็นแหล่งยีน siase . องค์ประกอบของสื่อสอดแนมและเงื่อนไขการเจริญเติบโตสำหรับ Enterobacter sp . fmb-1 ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( โช et al . , 2007b ) Escherichia coli xl1 สีฟ้า [ enda1 gyra96 ( nalr ) thi-1 reca1 rela1 ครั่ง glnv44 F ' [ : : tn10 proa + B + laciq D ( lacz ) M15 ] hsdr17 ( RK MK + ) ] ใช้เป็นโฮสต์สำหรับดีเอ็นเอและการเปลี่ยนแปลง L . lactis mg1363 ถูกใช้เป็นโฮสต์สำหรับการแสดงชนิดของ siase . สองเวกเตอร์การแสดงออกแลคโตค คัส pamj2006 pamj2008 , และ , กรุณาให้ bioneer / S ( horsholm , เดนมาร์ก ) เวกเตอร์เหล่านี้ การปรับสัญญาณเปปไทด์ sp310mut2 ถูกออกแบบมาเพื่อการหลั่งโปรตีนชนิดสู่สิ่งแวดล้อมภายนอก ( ravn et al . , 2003 ) l.lactis mg1363 เซลล์เพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส ในน้ำซุป m17 เติมกลูโคส 0.5 ( gm17 ) หรือ คุณนาย ( difco ห้องปฏิบัติการ , ดีทรอยต์ , มิชิแกน , สหรัฐอเมริกา เพื่อเลือกเซลล์ E . coli และ L . lactis ที่ยีน siase ซินถูกเพิ่มลงในรีคอมบิแนนท์ปอนด์และ gm17 สื่อที่ความเข้มข้น 100 และ 5 LG / มิลลิลิตรตามลำดับ