8-epi-PGF2, which has been propose

8-epi-PGF2, which has been proposed as a marker of oxidative
stress, was measured by using an enzyme immunoassay kit
(37). First, samples (0.5–1 mL) were mixed gently with 50 L
affinity sorbent (mouse anti-8-isoprostane covalently bound to
Sepharose 4B) (Cayman Chemical Co, Ann Arbor, MI) for 60 min
at room temperature to purify the samples. Next, the samples were
briefly centrifuged at 11 750  g (4 C) so that the sorbent would
form a sediment (Cayman Chemical Co). The sorbent, which contains
the bound 8-isoprostane, was rinsed with washing solution,
and, after the supernatant fluid was discarded, the sorbent pellet
was resuspended in 300 L of an ethanol elution solution. The
ethanol washes were evaporated to dryness in a vacuum centrifuge
and were immediately dissolved in 125 L enzyme
immunoassay buffer. Then, samples were analyzed in duplicate
by using the enzyme immunoassay kit. This assay is based on the
competition between 8-isoprostane and an 8-isoprostane-acetylcholinesterase
conjugate (8-isoprostane tracer) for a limited
number of 8-isoprostane-specific rabbit antiserum binding sites.
The rabbit antiserum 8-isoprostane (either free or tracer) complex
binds to the rabbit immunoglobulin G mouse monoclonal antibody
that was previously attached to the well. The plate was washed to
remove any unbound reagents and then Ellman’s reagent (which
contains the substrate to 8-isoprostane-acetylcholinesterase; Cayman
Chemical Co) was added to the well. The product of this enzymatic
reaction has a distinct yellow color and absorbs strongly at
412 nm. The intensity of this color, determined spectrophotometrically,
is proportional to the amount of 8-isoprostane tracer
bound to the well, which is inversely proportional to the amount
of free 8-isoprostane present in the well during the incubation. The
concentration of 8-isoprostane in the test samples was interpolated
from the standard curve by using log transformation (16).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

8-epi-PGF2 ซึ่งได้รับการเสนอชื่อเป็นเครื่องหมายของ oxidativeความเครียด ถูกวัด โดยใช้ชุด immunoassay มีเอนไซม์(37) ตัวอย่างแรก (0.5-1 mL) ถูกผสมเบา ๆ กับ 50 Lความเกี่ยวข้องสัมพันธ์ (เมาส์ต่อต้าน-8-isoprostane กับ covalentlySepharose 4B) (บริษัทเคมีเคย์ Ann Arbor, MI) ใน 60 นาทีที่อุณหภูมิห้องต้องทำตัวอย่าง ถัดไป ตัวอย่างดีสั้น ๆ centrifuged ที่ 11 750 g (4 C) เพื่อให้การดูดซับจะแบบตะกอน (เคย์เคมี Co) การดูดซับ ซึ่งประกอบด้วยการผูก 8-isoprostane ถูก rinsed กับโซลูชั่นและ น้ำมัน supernatant ถูก ละทิ้ง เม็ดดูดซับมี resuspended ใน L 300 ของโซลูชันการ elution เอทานอล ที่เอทานอล washes ได้หายไปกับความแห้งกร้านในเครื่องหมุนเหวี่ยงสูญญากาศและละลายได้ทันทีในเอนไซม์ 125 Lบัฟเฟอร์ immunoassay แล้ว มีวิเคราะห์ตัวอย่างสำเนาโดยใช้ชุด immunoassay เอนไซม์ ทดสอบนี้ตามแข่งขันระหว่าง 8-isoprostane-acetylcholinesterase และ 8-isoprostaneค่าสังยุค (ติดตาม 8 isoprostane) สำหรับการจำกัด(มหาชน)จำนวน 8 isoprostane เฉพาะกระต่าย antiserum รวมไซต์กระต่าย antiserum 8-isoprostane (อย่างใดอย่างหนึ่งฟรี หรือติดตาม) ซับซ้อนbinds กับกระต่าย immunoglobulin G เมาส์ monoclonal แอนติบอดีก่อนหน้านี้ที่ถูกแนบอยู่กับดี มีล้างจานเอาใด ๆ reagents ผูก แล้วรีเอเจนต์ของ Ellman (ซึ่งประกอบด้วยพื้นผิวการ 8-isoprostane-acetylcholinesterase เคย์แมนบริษัทเคมี) ถูกเพิ่มเข้าไปดี ผลิตภัณฑ์ของเอนไซม์ในระบบนี้ปฏิกิริยามีทั้งสีเหลือง และดูดซับอย่างที่412 nm ความเข้มของสีนี้ spectrophotometrically กำหนดเป็นสัดส่วนกับจำนวนติดตาม 8-isoprostaneผูกดี ซึ่งเป็นสัดส่วนกับยอดเงิน inverselyของฟรี 8-isoprostane ในดีในระหว่างการฟักตัว ที่เข้มข้น 8-isoprostane ในตัวอย่างทดสอบเป็นการสจากเส้นโค้งมาตรฐานโดยใช้การแปลงแฟ้มบันทึก (16)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

8 EPI-PGF2 ?,
ซึ่งได้รับการเสนอให้เป็นเครื่องหมายของการออกซิเดชั่ความเครียดวัดโดยใช้ชุดimmunoassay เอนไซม์
(37) ครั้งแรกตัวอย่าง (0.5-1 มิลลิลิตร) ผสมเบา ๆ ด้วย 50 L
สัมพันธ์ที่ใกล้ชิดตัวดูดซับ (เมาส์ต่อต้าน 8 isoprostane ผูกพัน covalently เพื่อ
Sepharose 4B) (เคย์แมน Chemical Co, Ann Arbor, MI) 60
นาทีที่อุณหภูมิห้องในการชำระล้างตัวอย่าง ถัดไปตัวอย่างหมุนเหวี่ยงสั้นที่ 11 750?
กรัม (4 องศาเซลเซียส)
เพื่อที่จะดูดซับรูปแบบตะกอน(เคย์แมน Chemical Co) ตัวดูดซับซึ่งมีขอบเขต 8 isoprostane ถูกล้างด้วยน้ำยาซักผ้าและหลังจากของเหลวที่ถูกทิ้งเม็ดดูดซับถูก resuspended ใน 300 ลิตรวิธีการแก้ปัญหาชะเอทานอล ล้างเอทานอลได้รับการระเหยแห้งในเครื่องหมุนเหวี่ยงสูญญากาศและละลายทันทีใน 125? เอนไซม์ L บัฟเฟอร์ immunoassay จากนั้นกลุ่มตัวอย่างที่ได้มาวิเคราะห์ในที่ซ้ำกันโดยใช้ชุด immunoassay เอนไซม์ การทดสอบนี้จะขึ้นอยู่กับการแข่งขันระหว่าง 8 isoprostane และ 8 isoprostane-สารคอนจูเกต(8 isoprostane ติดตาม) สำหรับ จำกัดจำนวน antiserum กระต่าย 8 isoprostane เฉพาะเว็บไซต์ที่มีผลผูกพัน. antiserum กระต่าย 8 isoprostane (ฟรีหรือ ตามรอย) ที่ซับซ้อนผูกกับกระต่ายอิมมูโนเมาส์โมโนโคลนอลแอนติบอดีจีที่แนบมาก่อนหน้านี้ได้เป็นอย่างดี แผ่นที่ได้รับการล้างเอาสารเคมีใด ๆ ที่ไม่ได้ผูกไว้แล้วน้ำยา Ellman (ซึ่งมีพื้นผิว8 isoprostane-สาร; เคย์แมนChemical Co) เพิ่มขึ้นเป็นอย่างดี ผลิตภัณฑ์ของเอนไซม์นี้ปฏิกิริยามีสีเหลืองที่แตกต่างกันอย่างมากและดูดซับที่412 นาโนเมตร ความเข้มของสีนี้กำหนด spectrophotometrically, เป็นสัดส่วนกับปริมาณของการติดตาม 8 isoprostane ที่จะผูกพันกันซึ่งจะแปรผกผันกับจำนวนเงินในปัจจุบัน 8 isoprostane ฟรีในดีในช่วงการบ่ม ความเข้มข้นของ 8 isoprostane ในตัวอย่างทดสอบถูกหยันจากกราฟมาตรฐานโดยใช้การเปลี่ยนแปลงเข้าสู่ระบบ(16)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

8-epi-pgf2  ซึ่งได้รับการเสนอเป็นเครื่องหมายของความเครียด oxidative
ถูกวัดโดยการใช้เอนไซม์ที่มีชุด
( 37 ) แรก ตัวอย่าง ( 0.5 – 1 มิลลิลิตรผสมเบา ๆ กับ 50  L
สามารถดูดซับ ( anti-8-isoprostane เมาส์ covalently เกี่ยวข้องผูกพัน

( 4B ) เคย์แมนเคมี Co , Ann Arbor , Mi ) 60 นาที
อุณหภูมิห้องให้ตัวอย่าง ถัดไป จำนวน
สั้นที่ระดับ 750  11 กรัม ( 4  C ) เพื่อดูดซับจะ
แบบฟอร์มตะกอน ( Cayman Chemical Co ) ดูดซับซึ่งประกอบด้วย
ไว้ 8-isoprostane ถูกล้างด้วยล้างสารละลาย
และหลังจากน้ำน่านถูกทิ้งดูดซับเม็ด
คือ resuspended 300  L ของเอทานอลที่ใช้โซลูชั่น
ล้างเป็นเอทานอลระเหยแห้งในสูญญากาศ
และทันที ที่ละลายใน 125  ผมเอนไซม์
ที่มีบัฟเฟอร์ แล้ววิเคราะห์ในซ้ำ
โดยใช้เอนไซม์ที่มีชุด การทดสอบนี้จะขึ้นอยู่กับ
การแข่งขันระหว่าง 8-isoprostane และ 8-isoprostane-acetylcholinesterase
) ( 8-isoprostane Tracer ) สำหรับจำนวน จำกัด ของกระต่ายผูก 8-isoprostane-specific แอนติ

เว็บไซต์กระต่ายแอนติ 8-isoprostane ( ทั้งฟรีหรือติดตาม ) ซับซ้อน
ที่ผูกกับโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่ออิมมูโนโกลบูลินกระต่ายเมาส์
ที่เคยแนบด้วย จานล้าง

ลบใด ๆของสารเคมีสารเคมีหลุดแล้วเ ล์แมน ( ซึ่ง
ประกอบด้วยวัสดุเคมี Co Ltd 8-isoprostane-acetylcholinesterase ;
) ถูกเพิ่มเข้าไปด้วย สินค้า
เอนไซม์นี้ปฏิกิริยามีสีเหลืองและดูดซับที่แตกต่างกันอย่างมาก
412 นาโนเมตร ความเข้มของสี นี้กำหนดนี้
, เป็นสัดส่วนกับปริมาณ 8-isoprostane Tracer
ผูกไว้อย่างดี ซึ่งแปรผกผันกับปริมาณ
ของฟรี 8-isoprostane ในปัจจุบันเป็นอย่างดีในระหว่างการบ่ม
ความเข้มข้นของ 8-isoprostane ในตัวอย่างทดสอบถูกหยัน
จากเส้นโค้งมาตรฐาน โดยใช้การแปลงเข้าสู่ระบบ ( 16 )