Pigment extraction. Pretreated and

Pigment extraction. Pretreated and well homogenised
sample of 100 g was weighed in a 1-liter
beaker and 500 ml of the extraction solvent was
added immediately. The extraction solvents were
added in the ratio of 1:5 (w/v). The samples were
stirred with a glass rod every 5 min to ensure a
well mixed extraction. After the extraction in the
dark at room temperature for 4 h, the extract was
centrifuged (5000 r/min) at 4°C for 20 min in a
Optima L-100XP (Beckman Co., Windermere,
USA). Then the supernatant was separated and
filtered. This pigment solution was used for further
purification and analysis.
Anthocyanin purification. A C18 Sep-Pak cartridge
(Waters Associates, Milford, USA) was activated
for 30 min with distilled water and HPLC
grade methanol, respectively. The pigment solution
was loaded onto the column. After successive
washing with 5-fold volume of distilled water
(acidified with 0.1% HCl) and ethyl acetate, anthocyanins
were eluted with methanol containing
0.1% HCl. The anthocyanin solution was collected
and condensed at 40°C using a N-1000V-W rotary
evaporator (Eyela Co., Tokyo, Japan) under vacuum.
For the spectroscopy and element analysis, a
part of the condensed anthocyanin solution was
dried for spectroscopy analysis with a CVE-2000
centrifugal evaporator under vacuum (Eyela Co.,
Tokyo, Japan).
Acid hydrolysis of anthocyanins. First, 5 ml of
2N HCl was added to 1 ml of the purified anthocyanin
solution (3 mg/ml) in a screw-cap test tube,
flushed with nitrogen, and capped. The pigments
were hydrolysed at 100°C for 1.5 h; then, the solution
was immediately cooled in an ice bath (Longo
& Vasapollo 2005). The hydrolysate was purified
using a 500 mg sorbent weight C-18 Sep-Pak
cartridge (Waters) as previously described.
HPLC-PAD analysis and preparation. Highperformance
liquid chromatography (HPLC) was
performed on a Waters RP C18 column (250 ×
4.6 mm i.d., 5 µm C18, Waters Assoc., Milford,
USA) using a Waters 2696 separation module
equipped with a 996 photodiode array detector.
A gradient mobile phase was used for elution: A
– water containing 0.1% TFA (trifluoroacetic acid);
B – acetonitrile containing 0.1% TFA. The elution
profile was 0–60 min: 0 min, 10% B; 0–2 min, 10%
B; 2–35 min, 10–90% B; 35–40 min, 90–100% B;
40–60 min, 100% B. The flow rate was 1.0 ml per
minute

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เม็ดสกัด Pretreated และทั้งนี้คือการชั่งน้ำหนักตัวอย่าง 100 กรัมใน 1 ลิตรบีกเกอร์และ 500 มล.ของตัวทำละลายสกัดเพิ่มทันที สารละลายสกัดได้เพิ่มในอัตราส่วน 1:5 (w/v) ตัวอย่างได้กวน ด้วยก้านแก้วทุก 5 นาทีเพื่อให้การสกัดผสมกัน หลังจากที่สกัดในการเป็นสารสกัดที่มืดที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 4 hเหวี่ยง (5000 r/min) ที่ 4° C 20 นาทีในการOptima L-100XP (Beckman Co. วินเดอร์เมียร์สหรัฐอเมริกา) Supernatant ถูกแยก แล้ว และกรองนั้น ใช้สำหรับแก้ปัญหาเม็ดสีนี้ต่อไปบริสุทธิ์และการวิเคราะห์การทำให้บริสุทธิ์นั้น ตลับหมึก C18 Sep-ปาก(น้ำร่วม ลฟอร์ด สหรัฐอเมริกา) ถูกเปิดใช้งาน30 นาทีกับน้ำกลั่นและ HPLCเกรดเมทานอล ตามลำดับ การแก้ปัญหาเม็ดสีถูกโหลดลงในคอลัมน์ หลังต่อ ๆ มาล้าง ด้วยน้ำกลั่น 5-fold(0.1% กรด HCl) และเอทิลอะซิเต ท anthocyaninsถูก eluted กับเมทานอลที่ประกอบด้วย0.1% HCl รวบรวมวิธีการแก้ปัญหานั้นและแบบย่อที่ 40° C โดยใช้หมุน N-1000V-Wระเหย (Eyela Co. โตเกียว ญี่ปุ่น) ภายใต้สุญญากาศสำหรับการวิเคราะห์สเปกโทรสโกและองค์ประกอบ การเป็นส่วนหนึ่งของโซลูชันนั้นประกอบแห้งสำหรับการวิเคราะห์สเปกโทรสโกกับ CVE-2000แรงเหวี่ยงระเหยภายใต้สุญญากาศ (Eyela Co.โตเกียว ญี่ปุ่น)ไฮโตรไลซ์กรดของ anthocyanins แรก 5 มล.ของ2N HCl ถูก 1 มล.ของโฟเลทสูงบริสุทธิ์โซลูชั่น (3 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) ในหลอดทดสอบฝาเกลียวล้าง ด้วยไนโตรเจน และต่อยอด เม็ดสีถูกถูกย่อยที่ 100° C สำหรับ 1.5 h จากนั้น การแก้ปัญหาความร้อนในอ่างน้ำแข็ง (Longo ทันที& Vasapollo 2005) ด้วยความบริสุทธิ์โดยใช้น้ำหนัก 500 มก.ดูดซับ C-18 Sep-ปากตลับหมึก (น้ำ) ตามที่เคย อธิบายไว้วิเคราะห์ HPLC แผ่นและการเตรียมการ Highperformanceเป็นของเหลว chromatography (HPLC)ดำเนินการบนคอลัมน์ C18 RP น้ำ (250 ×รศ 4.6 มม.ประชาชน 5 µm C18 น่านน้ำ ลฟอร์ดสหรัฐอเมริกา) โดยใช้โมดูลแยกน้ำ 2696พร้อมเครื่องตรวจจับเรย์โอด 996เฟสเคลื่อนไล่ระดับสีใช้สำหรับชะ: A-น้ำที่ประกอบด้วย 0.1% TFA (กรด trifluoroacetic);B – acetonitrile ที่ประกอบด้วย 0.1% TFA การชะโพรไฟล์ถูก 0 – 60 นาที: 0 นาที 10% B 0 – 2 นาที 10%B 2 – 35 นาที 10 – 90% B 35-40 นาที 90-100% B40 – 60 นาที 100% ข. คืออัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตรต่อนาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สกัดรงควัตถุ ปรับสภาพและเข้ากันได้ดี
ตัวอย่าง 100 กรัมได้รับการชั่งน้ำหนักใน 1 ลิตร
บีกเกอร์และ 500 มล. ของตัวทำละลายในการสกัดที่ถูก
เพิ่มทันที ตัวทำละลายสกัดถูก
เพิ่มเข้ามาในอัตราส่วน 1: 5 (w / v) ตัวอย่างถูก
กวนกับก้านแก้วทุก ๆ 5 นาทีเพื่อให้แน่ใจว่า
การสกัดผสมกัน หลังจากการสกัดใน
ที่มืดที่อุณหภูมิห้องนาน 4 ชั่วโมง, สารสกัดจากถูก
หมุนเหวี่ยง (5000 R / นาที) วันที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีใน
Optima L-100XP (Beckman Co. , Windermere,
USA) จากนั้นใสถูกแยกออกและ
การกรอง วิธีการแก้ปัญหาเม็ดสีนี้ถูกใช้สำหรับการต่อไป
ฟอกและการวิเคราะห์.
ฟอก Anthocyanin C18 ก.ย. ปากตลับหมึก
(น้ำ Associates, ฟอร์ด, สหรัฐอเมริกา) ถูกเปิดใช้งาน
เป็นเวลา 30 นาทีด้วยน้ำกลั่นและ HPLC
เมทานอลชั้นประถมศึกษาปีตามลำดับ วิธีการแก้ปัญหาเม็ดสี
ถูกโหลดลงในคอลัมน์ หลังจากที่ต่อเนื่อง
ซักผ้าที่มีปริมาณ 5 เท่าของน้ำกลั่น
(กรดไฮโดรคลอริก 0.1%) และเอทิลอะซิเตท, anthocyanins
ถูกชะด้วยเมทานอลที่มี
0.1% HCl วิธีการแก้ปัญหา anthocyanin ถูกเก็บรวบรวม
และควบแน่นที่ 40 องศาเซลเซียสโดยใช้ N-1000V-W โรตารี่
ระเหย (Eyela Co. , กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ภายใต้สูญญากาศ.
สำหรับสเปกโทรสโกและบรรยากาศการวิเคราะห์เป็น
ส่วนหนึ่งของการแก้ปัญหาแบบย่อ anthocyanin ถูก
แห้งสำหรับสเปกโทรสโก การวิเคราะห์ด้วย CVE-2000
เครื่องระเหยแบบแรงเหวี่ยงภายใต้สูญญากาศ (Eyela Co. ,
กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น).
กรดจองจำของ anthocyanins ครั้งแรก 5 มิลลิลิตร
2N HCl ถูกบันทึกอยู่ใน 1 มิลลิลิตรของ anthocyanin บริสุทธิ์
วิธีการแก้ปัญหา (3 mg / ml) ในหลอดทดลองกรูหมวก
แดงกับไนโตรเจนและต่อยอด เม็ดสี
ถูกย่อยที่ 100 ° C เป็นเวลา 1.5 ชั่วโมง; แล้วแก้ปัญหา
ถูกระบายความร้อนได้ทันทีในอ่างน้ำแข็ง (ลองโก
และ Vasapollo 2005) ไฮโดรไลบริสุทธิ์
โดยใช้น้ำหนัก 500 mg ดูดซับ C-18 ก.ย. ปาก
ตลับหมึก (น้ำ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้.
วิเคราะห์ HPLC-pad และการเตรียมการ Highperformance
ของเหลว chromatography (HPLC) คือการ
ดำเนินการในคอลัมน์น้ำ RP C18 (250 ×
4.6 มม id, 5 ไมครอน C18 น้ำรศ., ฟอร์ด
ประเทศสหรัฐอเมริกา) โดยใช้โมดูลแยกน้ำ 2696
พร้อมกับ 996 โฟโตไดโอดเครื่องตรวจจับอาร์เรย์.
ลาดมือถือ ขั้นตอนที่ใช้สำหรับการชะ: เป็น
- น้ำที่มี 0.1% TFA (กรด TRIFLUOROACETIC);
B - acetonitrile มี 0.1% TFA ชะ
รายละเอียดเป็น 0-60 นาที: 0 นาที 10% B; 0-2 นาที, 10%
B; 2-35 นาที, 10-90% B; 35-40 นาที, 90-100% B;
40-60 นาที, 100% บีอัตราการไหลเป็น 1.0 มิลลิลิตรต่อ
นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดสี ได้รับแล้ว homogenisedตัวอย่าง 100 กรัมชั่งใน 1-literบีกเกอร์และ 500 มิลลิลิตรของสารละลายสกัดเพิ่มทันที การสกัดตัวทำละลายเพิ่มในอัตราส่วน 1 : 5 ( w / v ) กลุ่มตัวอย่างคนด้วยแท่งแก้วทุก 5 นาที เพื่อให้แน่ใจว่าสกัดผสมดี หลังจากสกัดในมืดที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 4 ชั่วโมง สารสกัด คือระดับ ( 5 , 000 r / min ) ที่อุณหภูมิ 4 องศา C เป็นเวลา 20 นาทีในOptima l-100xp ( Beckman Co . , Windermere ,สหรัฐอเมริกา ) จากนั้นนำแยกและกรอง โซลูชั่นเม็ดนี้ถูกใช้สำหรับเพิ่มเติมการทำให้บริสุทธิ์และการวิเคราะห์แอนโธไซยานินบริสุทธิ์ เป็น c18 ก.ย. ปากหมึก( น้ำ Associates , ฟอร์ด , USA ) ถูกเปิด30 นาทีกับน้ำกลั่นและ HPLCเกรดเมทานอล ตามลำดับ เม็ด โซลูชั่นถูกโหลดลงในคอลัมน์ หลังจากได้ต่อเนื่องล้างด้วยน้ำกลั่นปริมาตรของผู้อื่น( ปรับด้วย 0.1% HCl ) และเอทิลอะซิเตทได้อย่างชัดเจนมีตัวอย่างที่มีกับเมทานอล0.1 % HCL . แอนโทไซยานิน โซลูชั่น ที่รวบรวมย่อที่ 40 ° C และใช้ n-1000v-w โรตารีเครื่องระเหย ( eyela Co . , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) ภายใต้สุญญากาศสำหรับสเปกโทรสโกปีและองค์ประกอบการวิเคราะห์ ,ส่วนหนึ่งของการแก้ปัญหา คือ แอนโทไซยานิน ย่อแห้งสำหรับการวิเคราะห์ด้วย cve-2000 สเปกโทรสโกปีปั๊มหอยโข่งแบบสุญญากาศ ( eyela Co . ,โตเกียว , ญี่ปุ่น )กรดของแอนโทไซยานิน . แรก 5 มิลลิลิตร2 นอร์มัลเพิ่มเติม 1 มิลลิลิตร และแอนโทไซยานินโซลูชั่น ( 3 มก. / มล. ) ในสกรูฝาทดสอบหลอดหน้าแดงด้วยไนโตรเจน และปรบมือ . สีอยู่ที่ 100 องศา C 1.5 ชั่วโมง แล้ว โซลูชั่นได้ทันทีลงในน้ำแข็งบาท ( ลองโก& vasapollo 2005 ) การไฮโดรไลเสทบริสุทธิ์ใช้ 500 มิลลิกรัมน้ำหนักเพื่อดูดซับ - อ.ตลับหมึก ( น้ำ ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้การวิเคราะห์และการเตรียม hplc-pad . highperformanceของเหลว chromatography ( HPLC )ที่แสดงในคอลัมน์ C18 250 ×น่านน้ำฟิลิปปินส์4.6 มม. บัตร 5 µ M c18 รศ. Milford , น้ำ ,สหรัฐอเมริกา ) โดยใช้น้ำ 2696 แยกโมดูลพร้อมกับเพลงโฟโตไดโอดเรย์ตรวจจับการไล่ระดับสีเฟสเคลื่อนที่ ( ใช้สำหรับ :- น้ำที่มีระดับ 0.1% ( กรดไตรฟลูออโรอะซิติก )บี–ไนที่มีระดับ 0.1 เปอร์เซ็นต์ . การใช้โปรไฟล์ 0 – 60 นาที : 0 Min 10 % B ; 0 – 2 นาที , 10 %B 2 – 3 นาที 10 – 90 % B ; 35 – 40 นาที 90 – 100 % B ;40 – 60 นาที , 100 % B . อัตราการไหลเท่ากับ 1.0 มิลลิลิตร ต่อนาที