2.6. Conformation of the open readi

2.6. Conformation of the open reading frame (ORF) sequences of
anthocyanin biosynthetic genes In a previous study, an Illumina/Solexa library of petals in
P. suffruticosa ‘Luoyang Hong’ was constructed and sequenced (Zhang et al., 2014). Based on the related unigene sequences from this transcriptome-wide overview in petal, five regulatory genes
(PsbHLH1, PsbHLH3, PsWD40-1, PsWD40-2 and PsMYB2) and six structural genes (PsCHS1, PsCHI1, PsF3H1, PsF3 H1, PsDFR1 and PsANS1) in the anthocyanin biosynthesis pathway were obtained
with reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) or rapid amplification of cDNA end (RACE) technology, and the open reading frame (ORF) sequences of these eleven genes were further confirmed with the designed primers (Table 1). According to a previous study (Zhou et al., 2010a), PCR product purifying and sequencing were performed as follows: the amplified PCR products were analyzed on a 1.0% agarose gel, and specific bands of expected size were purified by Gel/PCR Extraction Kit (Biomiga,China). Isolated DNA fragments were TA-cloned into the pGEM-T Easy Vector (Promega, USA) and then transformed into competent Top10 Escherichia coli cells. Putative positive clones were identified by PCR with T7 and SP6 sequencing primers before sequenced by AuGCT (Beijing, China) on a 377 automated DNA sequencer (PerkinElmer, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. conformation ของเปิดอ่าน (ORF) ลำดับของเฟรมมีโฟเลทสูงยีน biosynthetic ในการศึกษาก่อนหน้านี้ การไลบรารี Illumina/Solexa ของกลีบในP. suffruticosa 'Hong ลั่วหยาง' ถูกสร้างขึ้น และเรียงลำดับ (Zhang et al., 2014) ตามลำดับ unigene ที่เกี่ยวข้องจากภาพรวมในกลีบดอกไม้ ยีน regulatory ห้า transcriptome ทั้งนี้(PsbHLH1, PsbHLH3, PsWD40 1, PsWD40-2 และ PsMYB2) และได้รับหกโครงสร้างยีน (PsCHS1, PsCHI1, PsF3H1, PsF3 H1, PsDFR1 และ PsANS1) ในทางเดินการสังเคราะห์มีโฟเลทสูงปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส transcriptase กลับ (RT-PCR) หรือขยายอย่างรวดเร็วของ cDNA สิ้นสุด (แข่งขัน) และเทคโนโลยีเฟรมเปิดอ่าน (ORF) ลำดับของยีนเหล่านี้สิบเอ็ดได้เพิ่มเติมยืนยัน ด้วยไพรเมอร์ที่ออกแบบ (ตารางที่ 1) ตามศึกษาก่อนหน้าการ (โจว et al., 2010a), PCR ผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์และจัดลำดับได้ปฏิบัติดังนี้: ผลิตภัณฑ์ PCR เอาต์ได้วิเคราะห์บน agarose 1.0% เจ และวงเฉพาะขนาดคาดได้บริสุทธิ์ โดยชุดสกัด เจล/PCR (Biomiga จีน) ชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่แยกได้ TA โคลนในการ pGEM-T ง่ายเวกเตอร์ (Promega สหรัฐอเมริกา) และแก่นอำนาจ Top10 Escherichia coli เซลล์ Putative บวกระบุโคลน โดย PCR กับไพรเมอร์ลำดับ T7 และ SP6 ก่อนเรียงลำดับตาม AuGCT (ปักกิ่ง จีน) บน 377 การอัตโนมัติ DNA sequencer (PerkinElmer สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 โครงสร้างของเฟรมเปิดอ่าน ( ORF ) ลำดับ
แอนโธไซยานินการยีนในการศึกษาก่อนหน้านี้ที่ Illumina / solexa ห้องสมุดของกลีบดอกไม้
P ' หงส์ ' suffruticosa ลั่วหยางได้สร้างและลำดับ ( Zhang et al . , 2010 ) ยึดที่เกี่ยวข้อง unigene ลำดับจากทราน ริปโตมนี้กว้างภาพรวมในกลีบดอกไม้ 5 กฎระเบียบยีน
( psbhlh1 psbhlh3 pswd40-1 , , ,และ pswd40-2 psmyb2 ) และหกยีนโครงสร้าง ( pschs1 pschi1 psf3h1 , , , และ psf3 H1 , psdfr1 psans1 ) ในวิถีการสังเคราะห์แอนโธไซยานินได้
กับ reverse transcriptase polymerase chain reaction ( RT-PCR ) หรือ การเพิ่มปริมาณอย่างรวดเร็วของยีน ( แข่ง ) เทคโนโลยี และเปิดอ่านกรอบ ( ORF ) ลำดับของยีนเหล่านี้มีสิบเอ็ด ยืนยันเพิ่มเติมด้วยการออกแบบไพรเมอร์ ( ตารางที่ 1 )จากการศึกษาก่อนหน้านี้ ( โจว et al . , 2010a ) ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์และจัดลำดับได้ดังนี้ การขยาย PCR วิเคราะห์บนผลิตภัณฑ์เจล , 1.0% และเฉพาะแถบคาดขนาดได้ทำให้บริสุทธิ์ด้วยชุดสกัดเจล PCR ( biomiga , จีน ) แยกดีเอ็นเอถูกทาโคลนเข้าไปใน pgem-t ง่าย ( promega เวกเตอร์ ,สหรัฐอเมริกา ) และจากนั้นแปลงเป็นเชี่ยวชาญ TOP10 Escherichia coli เซลล์ โคลนซึ่งถูกระบุโดยวิธี PCR บวกกับขี้น. sp6 ลำดับและไพรเมอร์ก่อนนี้ โดย augct ( ปักกิ่ง , จีน ) ที่เป็นลำดับ DNA แบบอัตโนมัติ ( Perkinelmer , USA )