Enzyme purification proceduresBanan

Enzyme purification procedures
Banana pulps from seven different stages of ripening were cut into small pieces which were then frozen by liquid nitrogen.
The frozen pieces were blended into powder and 20 mM sodium acetate buffer, pH 5.5 was added at the ratio of 1:1 (v/v).
The final volume was 450 ml.
The suspension of each sample was centrifuged at 12,096´g for 30 min and the supernatant was used for determination of enzyme activity and protein content.
The supernatant showing the highest specific activity of xylanase was used as a crude enzyme solution.
The enzyme was then fractionated by precipitating
with ammonium sulfate at 80% saturation.
After centrifugation, the pellet was suspended in a small
volume of 20 mM acetate buffer, pH 5.5, and dialyzed against the same buffer.
The dialyzed solution was loaded onto a column (1.5 cm ´ 15 cm)
of CM-cellulose (Sigma, U.S.A.) previously equilibrated with the same buffer.
The unbound proteins were eluted with the same buffer and the
bound proteins were then eluted with a linear gradient of NaCl (0 to 500 mM) in the same buffer.
Both unbound and bound fractions were determined for xylanase and cellulase activities including protein content.
Fractions containing xylanase were pooled and concentrated by Aquasorb and dialyzed against the same buffer.
The dialyzed solution was loaded onto a column (1.5 cm ´ 90 cm) of Sephadex G-50 (Pharmacia, U.S.A.), and eluted with the same
buffer, the fractions containing xylanase activity
were pooled and concentrated by Aquasorb.
The resulting solution was used as a source of purified
xylanase.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ของเอนไซม์
pulps กล้วยจากระยะต่าง ๆ เจ็ดของ ripening ถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ ที่ถูกแช่แข็ง ด้วยไนโตรเจนเหลวแล้ว
ชิ้นแช่แข็งได้ผสมผงและบัฟเฟอร์ acetate โซเดียม 20 มม. ค่า pH 5.5 มีเพิ่มในอัตราส่วน 1:1 (v/v) .
ปริมาตรสุดท้ายเป็น 450 ml.
ระงับของแต่ละอย่างถูก centrifuged ที่ 12096´g 30 นาทีและ supernatant ถูกใช้สำหรับการกำหนดของเอนไซม์และโปรตีน
ใช้ supernatant แสดงสูงสุดกิจกรรมของไซลาเนสเป็นโซลูชันเอนไซม์ดิบ
เอนไซม์นี้ถูกแบ่ง โดยปัจจัยแล้ว
กับซัลเฟตแอมโมเนียที่ความเข้ม 80%
หลัง centrifugation เม็ดที่ถูกระงับในขนาดเล็ก
ปริมาตร 20 มม.บัฟเฟอร์ acetate ค่า pH 5.5 และ dialyzed กับบัฟเฟอร์ที่เดียวกัน
โซลูชัน dialyzed ถูกโหลดลงในคอลัมน์ (´ 1.5 ซม. 15 ซม.)
ของ CM-เซลลูโลส (ซิก สหรัฐอเมริกา) ก่อนหน้านี้ equilibrated กับบัฟเฟอร์เดียวกัน
โปรตีนผูกถูก eluted กับบัฟเฟอร์เดียวและ
โปรตีนผูกได้แล้ว eluted กับไล่เส้นของ NaCl (0-500 มิลลิเมตร) ในบัฟเฟอร์เดียวกัน
เศษส่วนทั้งผูก และผูกถูกกำหนดสำหรับกิจกรรมไซลาเนสและ cellulase รวมทั้งโปรตีน
ประกอบด้วยไซลาเนสเศษถูกทางถูกพู และเข้มข้น โดย Aquasorb และ dialyzed กับบัฟเฟอร์ที่เดียวกัน
โซลูชัน dialyzed ถูกโหลดลงในคอลัมน์ (´ 1.5 ซม. 90 ซม.) ของ Sephadex G-50 (Pharmacia สหรัฐอเมริกา), และ eluted ด้วยเหมือนกัน
บัฟเฟอร์ เศษส่วนที่ประกอบด้วยกิจกรรมไซลาเนส
ถูกทางถูกพู และเข้มข้น โดย Aquasorb
การแก้ปัญหาได้ถูกใช้เป็นแหล่งของบริสุทธิ์
ไซลาเนส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

pulps
ซึ่งจะช่วยกล้วยตามขั้นตอนบริสุทธิ์เอนไซม์จากเจ็ดขั้นตอนที่แตกต่างของเห็ดหมวกก็ถูกตัดเป็นชิ้นเล็กๆขนาดเล็กซึ่งมีแล้วแช่แข็งด้วยไนโตรเจนเหลว
แช่แข็งเป็นชิ้นเล็กชิ้นน้อยถูกผสมผสานเข้ากับผงและ 20 มม.(เช่นอะคีเทตบัฟเฟอร์ Ph 5.5 ได้ถูกเพิ่มลงในอัตราส่วน 1 : 1 ( v V /)..
ระดับเสียงสุดท้ายเป็น 450 มล.
การระงับใช้ที่ของตัวอย่างแต่ละครั้งเป็น centrifuged ที่ 12096 ' g สำหรับ 30 นาทีและ supernatant นั้นถูกใช้สำหรับการกำหนดเนื้อหาโปรตีนและการทำงานของเอนไซม์
supernatant ที่แสดงกิจกรรมบางระดับสูงสุดของ xylanase ได้เคยถูกใช้เป็นโซลูชันเอนไซม์น้ำมันดิบที่.
เอนไซม์ที่เป็น fractionated โดย precipitating
ด้วยจุนสี its ammonium ที่ความอิ่มตัวของสี 80% แล้ว.
หลังจากผลิตเม็ดที่ถูกพักในขนาดเล็ก
ซึ่งจะช่วยลดระดับเสียงของ 20 มม.เช่นอะคีเทตบัฟเฟอร์ Ph 5.5และ dialyzed กับกันชนกัน.
โซลูชัน dialyzed ที่จะถูกโหลดไปยังคอลัมน์(' 1.5 ซม. 15 ซ.ม.)
ของซ.ม. - เซลลูโลส(ซิกมาสหรัฐอเมริกา)ก่อนหน้านี้ equilibrated พร้อมบัฟเฟอร์สำหรับเดียวกัน
โปรตีนแก้ได้ eluted พร้อมบัฟเฟอร์สำหรับเดียวกันและที่
โปรตีน eluted ผูกพันอยู่กับการไล่ระดับสีตามแนวยาวของ NaCl ( 0 ถึง 500 มม.)ในบัฟเฟอร์เดียวกันแล้ว.
เพียงเศษเสี้ยววินาทีทั้งนั้นและมีกำหนดสำหรับกิจกรรม xylanase cellulase รวมถึงเนื้อหาและโปรตีน
เพียงเศษเสี้ยววินาทีที่มี xylanase เป็นกลุ่มและโดยมากแล้วอยู่โดย aquasorb และ dialyzed กับกันชนเดียวกัน
โซลูชัน dialyzed ที่จะถูกโหลดไปยังคอลัมน์(' 1.5 ซม. 90 ซม.)ของ sephadex G 50 (ในบริเวณใกล้เคียงในสหรัฐอเมริกา)และ eluted เดียวกัน
ซึ่งจะช่วยถอดวงแหวนรองเหยือกออกเพียงเศษเสี้ยววินาทีที่ประกอบด้วยกิจกรรม xylanase
ซึ่งจะช่วยได้และโดยมากแล้วอยู่ในกลุ่ม aquasorb
ผลลัพธ์ของโซลูชันที่ถูกใช้เป็นแหล่งที่มาของบริสุทธิ์
xylanase