Based on the identification of the

Based on the identification of the A. terreus cis-aconitate decarboxylase, in a further step to improve itaconic acid production in fungi, A. niger was chosen as the CAD expression host. This choice based on its efficient citric acid production and a long tradition of safe use. To obtain itaconic acid producing A. niger strains, the CAD gene provided with the constitutive gpdA expression signals (Punt et al., 1988) was transformed into A. niger strain AB 1.13 (Mattern et al., 1992; Punt et al., 2008). Five colonies were randomly selected for shakeflask cultivation to analyze itaconic acid production and for the Southern blot analysis to verify the presence of the cadA gene in these strains. As demonstrated in Table 6, all five transformants produced itaconic acid albeit at low levels. In Fig. 4, it is shown that all of the five AB 1.13 CAD transformants contain cadA gene copies whereas no cadA signal was observed with the wt A. niger strain AB 1.13. Among all five transformants, two strains with the highest copies number and itaconic acid production in shake flasks (CAD10.1 and CAD 16.1) were selected for cultivation in the A. terreus itaconate production medium. Parental strain A. niger AB 1.13 was cultivated
under the same conditions as a negative control. For biomass determination, mycelium was harvested twice a day throughout the whole cultivation. Medium samples (supernatant) were collected by auto-sampling for itaconic acid determination. The medium samples were analyzed for the presence of organic acids by HPLC analysis (Fig. 5). The levels of itaconic acid, citric acid and oxalic acid in the three strains were compared. As shown, itaconate was detected in the cultivation medium of both transformants. In both strains, about 0.6 g/l itaconic acid was detected. There is no itaconate formation detected in parental strain AB 1.13. All strains had quite similar glucose consumption and biomass formulation profiles (Table 7). Interestingly, the three strains also showed differences in citric acid and oxalic acid production, which are the two major acids produced in wild type A. niger. Citric acid is the precursor of itaconic acid while oxalate can be considered as a waste product in the TCA cycle. Both transformant strains showed reduced levels of these acids where CAD 10.1 showed the most strongly reduced levels.
In this strain about 85% of the produced acids consist of itaconic acid.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตามรหัสของ A. terreus cis aconitate decarboxylase ในขั้นตอนเพิ่มเติมเพื่อปรับปรุงการผลิตกรด itaconic เชื้อรา อ.ไนเจอร์ถูกเลือกเป็นโฮสต์นิพจน์ CAD ตัวเลือกนี้ใช้ในการผลิตกรดซิตริกที่มีประสิทธิภาพและปลอดภัยใช้นาน รับ itaconic กรด producing ไนเจอร์ A. สายพันธุ์ ยีน CAD ที่มีสัญญาณนิพจน์ gpdA ขึ้น (เลื่อน et al., 1988) ถูกเปลี่ยนเป็นสาธารณรัฐไนเจอร์ A. ต้องใช้ AB 1.13 (Mattern et al., 1992 ตัด et al., 2008) สุ่มห้าอาณานิคมถูกเลือกสำหรับ shakeflask การปลูกพืชเพื่อวิเคราะห์การผลิตกรด itaconic และสำหรับภาคทำลายวิเคราะห์เพื่อตรวจสอบสถานะของยีน cadA ในสายพันธุ์เหล่านี้ ดังที่แสดงในตาราง 6, transformants ทั้งหมดห้าผลิตกรด itaconic แม้ว่าอยู่ในระดับต่ำ ใน Fig. 4 มันจะแสดงว่า transformants AB 1.13 CAD ห้าทั้งหมดประกอบด้วย cadA ย่อย ๆ ในขณะที่ไม่มีสัญญาณ cadA ถูกตรวจสอบกับสายพันธุ์ A. ไนเจอร์ wt AB 1.13 ระหว่าง transformants ห้าทั้งหมด สองเงียสูงสำเนาหมายเลขและ itaconic กรดผลิตในน้ำปั่น (CAD10.1 และ CAD 16.1) ถูกเลือกสำหรับการเพาะปลูกในอ. terreus itaconate ผลิตสื่อ ผู้ปกครองต้องใช้อ. 1.13 AB ไนเจอร์ถูกปลูกภายใต้เงื่อนไขเดียวกันเป็นตัวควบคุมค่าลบ สำหรับการกำหนดชีวมวล mycelium ถูกเก็บเกี่ยวสองวันทั้งเพาะปลูกทั้งหมด ตัวอย่างขนาดกลาง (supernatant) ถูกเก็บรวบรวม โดยสุ่มตัวอย่างอัตโนมัติสำหรับการกำหนดกรด itaconic มีวิเคราะห์ตัวอย่างขนาดกลางความของกรดอินทรีย์ โดยวิเคราะห์ HPLC (Fig. 5) ระดับของกรด itaconic กรดซิตริก และกรดออกซาลิกในสายพันธุ์ที่สามถูกเปรียบเทียบ แสดง itaconate พบในการเพาะปลูกของทั้งสอง transformants ในทั้งสองสายพันธุ์ เกี่ยวกับ 0.6 g/l itaconic กรดพบ ผู้แต่ง itaconate ไม่พบในผู้ปกครองต้องใช้ AB 1.13 ได้ สายพันธุ์ทั้งหมดมีคล้ายกลูโคสปริมาณและชีวมวลกำหนดโพรไฟล์ (ตาราง 7) เป็นเรื่องน่าสนใจ สายพันธุ์ที่สามยังแสดงให้เห็นความแตกต่างของกรดซิตริกและกรดออกซาลิกผลิต ซึ่งมีกรดสำคัญสองผลิตในป่าชนิดไนเจอร์อ. กรดซิตริกเป็นสารตั้งต้นของกรด itaconic ขณะออกซาเลตถือได้ว่าเป็นผลิตภัณฑ์เสียในวัฏจักร TCA ทั้งสองสายพันธุ์ transformant พบว่าระดับลดลงของกรดเหล่านี้ที่ CAD 10.1 พบมากสุดขอลดระดับในการนี้ต้องใช้ประมาณ 85% กรดผลิตส่วนประกอบของกรด itaconic

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขึ้นอยู่กับบัตรประจำตัวของ A. terreus ถูกต้อง-aconitate decarboxylase ในขั้นตอนต่อไปในการปรับปรุงการผลิตกรด itaconic ในเชื้อรา A. ไนเจอร์ได้รับเลือกให้เป็นเจ้าภาพการแสดงออกถ่อย ทางเลือกนี้ขึ้นอยู่กับการผลิตกรดซิตริกที่มีประสิทธิภาพและเป็นประเพณีอันยาวนานของการใช้งานที่ปลอดภัย (. ถ่อ, et al, 1988) ที่จะได้รับการผลิตกรด itaconic สายพันธุ์เอไนเจอร์ยีน CAD ให้กับสัญญาณส่วนประกอบแสดงออก GPDA ก็กลายเป็นสายพันธุ์เอไนเจอร์ AB 1.13 (Mattern et al, 1992;.. ถ่อ, et al, 2008) ห้าอาณานิคมถูกสุ่มเลือกสำหรับการเพาะปลูก shakeflask ในการวิเคราะห์การผลิตกรด itaconic และสำหรับการวิเคราะห์ blot ภาคใต้เพื่อตรวจสอบการปรากฏตัวของยีน Cada ในสายพันธุ์เหล่านี้ แสดงให้เห็นในตารางที่ 6 ทั้งห้า transformants ผลิตกรด itaconic แม้ว่าในระดับที่ต่ำ ในรูป 4 ก็จะแสดงให้เห็นว่าทั้งห้า AB 1.13 transformants CAD มียีน Cada ในขณะที่สัญญาณ Cada ไม่พบว่ามีน้ำหนัก A. ไนเจอร์ความเครียด AB 1.13 ในทุกห้า transformants สองสายพันธุ์ที่มีจำนวนสำเนาสูงสุดและการผลิตกรด itaconic ในขวดสั่น (CAD10.1 และ CAD 16.1) ได้รับเลือกสำหรับการเพาะปลูกใน A. terreus กลางผลิต itaconate ผู้ปกครองสายพันธุ์เอไนเจอร์ AB 1.13
ได้รับการปลูกฝังภายใต้เงื่อนไขเดียวกันเป็นตัวควบคุมเชิงลบ สำหรับการกำหนดชีวมวลเส้นใยเก็บเกี่ยววันละสองครั้งตลอดทั้งการเพาะปลูก ตัวอย่างปานกลาง (ใส) เป็นที่เก็บรวบรวมโดยอัตโนมัติสุ่มตัวอย่างสำหรับการกำหนดกรด itaconic กลุ่มตัวอย่างขนาดกลางที่ได้มาวิเคราะห์สำหรับการปรากฏตัวของกรดอินทรีย์โดยการวิเคราะห์ HPLC (รูปที่. 5) ระดับของกรด itaconic, กรดซิตริกและกรดออกซาลิกในสามสายพันธุ์ที่ถูกนำมาเปรียบเทียบ ตามที่ปรากฏ itaconate ถูกตรวจพบในการเพาะปลูกของกลาง transformants ทั้ง ในทั้งสองสายพันธุ์ประมาณ 0.6 g / l กรด itaconic ที่ตรวจพบ ไม่มีการก่อ itaconate ตรวจพบในสายพันธุ์ของพ่อแม่ AB คือ 1.13 ทุกสายพันธุ์มีการบริโภคน้ำตาลในค่อนข้างคล้ายกันและรูปแบบสูตรชีวมวล (ตารางที่ 7) ที่น่าสนใจทั้งสามสายพันธุ์ที่ยังแสดงให้เห็นความแตกต่างในกรดซิตริกและการผลิตกรดออกซาลิซึ่งเป็นกรดที่สำคัญที่เกิดขึ้นในป่าประเภทเอไนเจอร์ กรดซิตริกเป็นสารตั้งต้นของกรด itaconic ในขณะที่ออกซาเลตถือได้ว่าเป็นของเสียในวงจร TCA ที่ ทั้งสองสายพันธุ์ที่พบ transformant ลดระดับของกรดเหล่านี้ที่ CAD 10.1 แสดงให้เห็นว่าระดับลดลงอย่างมากที่สุด.
ในสายพันธุ์นี้ประมาณ 85% ของการผลิตกรดประกอบด้วยกรด itaconic

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขึ้นอยู่กับรหัสของ A . terreus ที่ CIS อะโคนิเตตใช้ในขั้นตอนต่อไปเพื่อปรับปรุงการผลิตกรด itaconic ในเชื้อรา A . niger ถูกเลือกเป็น CAD แสดงโฮสต์ ตัวเลือกนี้ขึ้นอยู่กับประสิทธิภาพของกรดซิตริก การผลิตและประเพณีอันยาวนานของการใช้งานที่ปลอดภัย เพื่อให้ได้ itaconic ผลิตกรด A . niger สายพันธุ์CAD และการแสดงออกยีนให้กับ gpda สัญญาณ ( ถ่อ et al . , 1988 ) กลายเป็น A . niger สายพันธุ์ AB 1.13 ( แม็ตเทิร์น et al . , 1992 ; ถ่อ et al . , 2008 ) ห้าอาณานิคมสุ่มสำหรับ shakeflask การเพาะปลูกเพื่อวิเคราะห์การผลิตกรด itaconic สำหรับ Southern blot การวิเคราะห์เพื่อตรวจสอบสถานะของยีนคาด้าในสายพันธุ์เหล่านี้ ดังที่แสดงใน ตารางที่ 6ทั้งหมดห้า transformants ผลิตกรด itaconic แม้ว่าในระดับต่ำ ในรูปที่ 4 จะแสดงทั้งหมดของห้า AB 1.13 CAD transformants มีคาด้ายีนชุดในขณะที่ไม่พบสัญญาณคาด้ากับ WT A . niger สายพันธุ์ AB 1.13 . ในบรรดาห้า transformants ทั้งสองสายพันธุ์มีสูงสุดสำเนาจำนวนและการผลิตกรด itaconic ในขวดเขย่า ( cad10.1 และ CAD 161 ) สุ่มสำหรับการเพาะปลูกใน A . terreus ที่ itaconate การผลิตปานกลาง พ่อแม่สายพันธุ์ A . niger AB 1.13 ก็ปลูก
ภายใต้เงื่อนไขเดียวกันเป็นชุดควบคุมลบ มวลชีวภาพความมุ่งมั่น โดยเก็บเกี่ยววันละสองครั้งตลอดการเพาะปลูกทั้งหมด ตัวอย่างขนาดกลาง ( น่าน ) เก็บข้อมูลโดยอัตโนมัติเพื่อให้ itaconic กรดความมุ่งมั่นสื่อวิเคราะห์สำหรับการปรากฏตัวของกรดอินทรีย์โดยการวิเคราะห์ HPLC ( ภาพที่ 5 ) ระดับของ itaconic กรดซิตริกและกรดออกซาลิใน 3 สายพันธุ์ เปรียบเทียบ ที่แสดง itaconate ที่ตรวจพบในสูตรอาหารของพลาสมิด . ในทั้งสองสายพันธุ์ ประมาณ 0.6 กรัม / ลิตร itaconic กรดถูกตรวจพบ ไม่มีการพบผู้ปกครอง itaconate สายพันธุ์ AB 1.13 .ทุกสายพันธุ์มีปริมาณกลูโคสที่คล้ายกันมากและชีวมวลโปรไฟล์กำหนด ( ตารางที่ 7 ) น่าสนใจ , 3 สายพันธุ์ นอกจากนี้ยังพบความแตกต่างในการผลิตกรดซิตริกและกรดอ๊อกซาลิค ซึ่งเป็นหลักสองชนิดที่ผลิตในป่าชนิด A . niger . กรดซิตริก แอซิด เป็นสารตั้งต้นของ itaconic ในขณะที่ออกซาเลตเป็นของเสียในวัฏจักร TCA .ทั้งสองสายพันธุ์เหล่านี้ / แสดงระดับการลดลงของกรดที่ CAD 10.1 แสดงอย่างมากที่สุด การลดระดับ .
ในสายพันธุ์นี้ประมาณ 85% ของการผลิตกรดประกอบด้วย itaconic กรด