2.11. DAPI staining and fluorescent

2.11. DAPI staining and fluorescent microscopy
All treated/untreated cells were cultured on sterile cover slip
sets at the bottom of each 96-well cell culture plate. At the end of
each time point (12, 24, and 48 h), the cells were fixed with 4%
paraformaldehyde for 5 min. The fixed cells were permeabilized
with 0.1% Triton X-100 for 5 min. Then, 50 mL of diluted 40,6-
diamidino-2-phenylindole (DAPI; 1:2000) and its buffer (FOXP3
Perm Buffer, BioLegend, San Diego, USA) were added to each well.
After 5 min incubation at room temperature, the cells werewashed
with PBS. The stained cells on cover slips were reversely placed on
the slides and then were analyzed using a fluorescent microscope
(Olympus BX64, Olympus, Japan) equipped with a U-MWU2 fluorescence
filter (excitation filter BP 330e385, dichromatic mirror
DM 400, and emission filter LP 420).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.11 การย้อมสีและ DAPI
กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงทั้งหมดได้รับการรักษา/
เซลล์ได้รับการรักษาที่ถูกเพาะเลี้ยงบนใบปกหมันชุดที่ด้านล่างของแต่ละ96 หลุมจานวัฒนธรรมเซลล์ ในตอนท้ายของจุดแต่ละครั้ง (12, 24, และ 48 ชั่วโมง) เซลล์ได้รับการแก้ไขด้วย 4% paraformaldehyde เป็นเวลา 5 นาที เซลล์คงถูก permeabilized กับ 0.1% Triton X-100 เป็นเวลา 5 นาที จากนั้น 50 มิลลิลิตรเจือจาง 40,6- diamidino-2-phenylindole (DAPI; 1: 2000) และบัฟเฟอร์ (FOXP3 ดัดบัฟเฟอร์, BioLegend, San Diego, USA) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละกัน. หลังจาก 5 นาทีบ่มที่อุณหภูมิห้อง เซลล์ werewashed กับพีบีเอส เซลล์สีบนสลิปปกถูกวางสลับบนสไลด์แล้วนำมาวิเคราะห์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง(โอลิมปั BX64, Olympus, ญี่ปุ่น) พร้อมกับ U-MWU2 เรืองแสงกรอง(กระตุ้นกรอง BP 330e385, กระจก dichromatic DM 400, และตัวกรองการปล่อยก๊าซ LP 420)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.11 . dapi staining และกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงทั้งหมดปฏิบัติ /
และเซลล์เพาะเลี้ยงบนปกลื่น
ชุดปลอดเชื้อที่ด้านล่างของแต่ละ 96 ดีเซลล์เพลท ในตอนท้ายของ
แต่ละจุดเวลา ( 12 , 24 และ 48 ชั่วโมง ) , เซลล์ที่ถูกกำหนดด้วยพาราฟอร์มาลดิไฮด์ 4 %
5 นาที ซ่อมเซลล์มี permeabilized
0.1 % Triton X-100 เป็นเวลา 5 นาที จากนั้น 40,6 -
เจือจาง 50 มิลลิลิตรdiamidino-2-phenylindole ( dapi ; 1:2000 ) และบัฟเฟอร์ ( foxp3
ดัดผม บัฟเฟอร์ biolegend ซานดิเอโก สหรัฐอเมริกา ) เพิ่มกัน .
หลังจาก 5 นาทีบ่มที่อุณหภูมิห้อง , เซลล์ werewashed
กับ PBS การย้อมเซลล์บนหน้าปกก็เป็น reversely วางไว้บน
สไลด์แล้ววิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้
กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ( Olympus bx64 , Olympus , ญี่ปุ่น ) พร้อมกับ u-mwu2
เรืองกรอง ( แผ่นกรอง 330e385 BP , กระจก dichromatic
DM 400 , และการปล่อยกรอง LP 420 )