2.5. Enzyme assaysCell-free extract

2.5. Enzyme assays
Cell-free extractswerepreparedfromwashedcellssuspended
in threevolumeof50mMphosphatebufferpH7.0bysonication
(Ultrasonicprocessor,modelXL2010)for5minandcentrifugation
at 12,000g for 45minat4 1C. Theclearsupernatantwasusedfor
further enzymaticstudies.2-Chlorobenzoate-1,2-dioxygenase
activitywasassayedspectrophotometricallyforthedetermination
of theproductcatecholat275nm.Catechol1,2-dioxygenase
activitywasassayedspectrophotometricallybymeasuringthe
increaseinabsorbanceat260nmduetotheformationof cis,cismuconic
acidaccordingto Hayaishietal.(1957). Catechol2,3-
dioxygenaseactivitywasassayedspectrophotometricallybymea-
suring theincreaseinabsorbanceat375nmduetotheformation
2-hydroxymuconicsemialdehydeaccordingto Kim etal.(1992).
Proteinwasdeterminedbythemethodof Lowry etal.(1951) using
bovineserumalbumin(BSA)asastandard.Oneunitofenzyme
activitywasdefined astheamountrequiredtocatalyzethe
formation orconsumptionof1 mmol ofproductorsubstrateper
minute.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5. เอนไซม์ assaysเซลล์ฟรี extractswerepreparedfromwashedcellssuspendedใน threevolumeof50mMphosphatebufferpH7.0bysonication(Ultrasonicprocessor, modelXL2010) for5minandcentrifugationที่ 12000 g สำหรับ 45minat4 c. 1 Theclearsupernatantwasusedforต่อ enzymaticstudies.2-Chlorobenzoate-1, 2-dioxygenaseactivitywasassayedspectrophotometricallyforthedeterminationของ theproductcatecholat275nm Catechol1, 2 dioxygenaseactivitywasassayedspectrophotometricallybymeasuringtheincreaseinabsorbanceat260nmduetotheformationof cis, cismuconicacidaccordingto Hayaishietal (1957) . Catechol2, 3 -dioxygenaseactivitywasassayedspectrophotometricallybymea-suring theincreaseinabsorbanceat375nmduetotheformation2-hydroxymuconicsemialdehydeaccordingto คิม etal (1992)Proteinwasdeterminedbythemethodof Lowry etal ใช้ (1951)bovineserumalbumin (บีเอสเอ) asastandard Oneunitofenzymeactivitywasdefined astheamountrequiredtocatalyzetheผู้แต่ง orconsumptionof1 mmol ofproductorsubstrateperนาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การตรวจเอนไซม์
extractswerepreparedfromwashedcellssuspended
มือถือฟรีใน 12,000g สำหรับ 45minat4 1C Theclearsupernatantwasusedfor ต่อไป ถูกต้อง, cismuconic acidaccordingto Hayaishietal. (1957) Catechol2,3- dioxygenaseactivitywasassayedspectrophotometricallybymea- SURING theincreaseinabsorbanceat375nmduetotheformation 2 hydroxymuconicsemialdehydeaccordingto คิม etal. (1992). Proteinwasdeterminedbythemethodof โลว์รีย์ etal. (1951) โดยใช้bovineserumalbumin (BSA) asastandard.Oneunitofenzyme activitywasdefined astheamountrequiredtocatalyzethe ก่อ orconsumptionof1 มิลลิโมล ofproductorsubstrateper นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 ตรวจเอนไซม์
มือถือฟรีใน threevolumeof50mmphosphatebufferph7.0bysonication extractswerepreparedfromwashedcellssuspended

( ultrasonicprocessor modelxl2010 , ) for5minandcentrifugation
ที่ 12000g สำหรับ 45minat4 1c theclearsupernatantwasusedfor
เพิ่มเติม enzymaticstudies . 2-chlorobenzoate-1,2-dioxygenase

ของ activitywasassayedspectrophotometricallyforthedetermination theproductcatecholat275nm .activitywasassayedspectrophotometricallybymeasuringthe catechol1,2-dioxygenase

increaseinabsorbanceat260nmduetotheformationof CIS , cismuconic
acidaccordingto hayaishietal ( 1957 ) catechol2,3 dioxygenaseactivitywasassayedspectrophotometricallybymea - -


2-hydroxymuconicsemialdehydeaccordingto คิม theincreaseinabsorbanceat375nmduetotheformation ระหว่างคณะ . ( 2535 ) .
คณะ proteinwasdeterminedbythemethodof โลว์รี ( 1951 ) ใช้
bovineserumalbumin ( BSA ) asastandard . oneunitofenzyme

activitywasdefined astheamountrequiredtocatalyzethe ก่อตัว orconsumptionof1 mmol ofproductorsubstrateper
นาที