2.3. Florida experiment
2.3.1. Reagents
All materials were purchased from Sigma-Aldrich or
Fisher Scientific (Fairlawn, NJ, USA), unless specified
otherwise. HEPES-Tyrode’s Lactate and IVF-Tyrode’s Lactate
were purchased from Caisson Laboratories Inc. (Logan, UT,
USA). These media were used to prepare HEPES-Tyrode’s
albumin lactate pyruvate (TALP) and IVF-TALP [13]. Oocyte
collection and maturation media for purchased oocytes
was proprietary. Oocyte collection medium for oocytes
collected locally was TCM-199 with Hank’s salts without
phenol red (Atlanta Biologicals, Norcross, GA, USA) and
supplemented with 2% (vol/vol) bovine steer serum (Pel-
Freez, Rogers, AR, USA), 2 U/mL heparin, 100 U/mL
penicillin-G, 0.1 mg/mL streptomycin sulfate, and 1 mM
glutamine. Oocyte maturation medium for oocytes
collected locally was TCM-199 (Invitrogen, Carlsbad, CA,
USA) with Earle’s salts supplemented with 10% (vol/vol)
bovine steer serum, 2 mg/mL estradiol 17-b, 20 mg/mL
bovine follicle stimulating hormone (Folltropin-V; Bioniche),
22 mg/mL sodium pyruvate, 50 mg/mL gentamicin
sulfate, and 1 mM glutamine. Percoll was from Amersham
Pharmacia Biotech (Uppsala, Sweden). Potassium simplex
optimized medium (KSOM) that contained 1 mg/mL BSA
was from Caisson Laboratories Inc. On the day of use, KSOM
was modified to produce KSOM-BE2 as described previously
[14]. Synthetic oviductal fluid [15] was purchased as
a custom formulation from Millipore (Billerica, MA, USA).
Lidocaine was from Pro Labs (St. Joseph, MO, USA).
2.3. ทดลองฟลอริด้า2.3.1. reagentsซื้อวัสดุทั้งหมดจาก Aldrich ซิก หรือFisher วิทยาศาสตร์ (Fairlawn, NJ สหรัฐอเมริกา), เว้นแต่จะระบุมิฉะนั้น Lactate HEPES Tyrode และ Lactate IVF-Tyrodeซื้อจาก Caisson Laboratories Inc. (โลแกน UTสหรัฐอเมริกา) สื่อเหล่านี้ถูกใช้เพื่อจัดเตรียม HEPES Tyrodealbumin lactate pyruvate (TALP) และ IVF-TALP [13] Oocyteคอลเลกชันและพ่อแม่สื่อสำหรับซื้อแช่สารละลายมีกรรมสิทธิ์ Oocyte คอลเลกชันปานกลางแช่สารละลายรวบรวมในท้องถิ่นถูก TCM 199 ด้วยเกลือของแฮงก์ไม่สีแดงวาง (Biologicals แอตแลนต้า Norcross, GA สหรัฐอเมริกา) และเสริม ด้วยเซรั่มคัดท้ายวัว 2% (vol/vol) (Pel-Freez โรเจอร์ส AR สหรัฐอเมริกา), 2 U/mL เฮพาริน 100 U/mLยาเพนนิซิลลิน G, 0.1 mg/mL streptomycin ซัลเฟต และ 1 มม.glutamine Oocyte แก่ปานกลางแช่สารละลายรวบรวมในท้องถิ่นถูก TCM-199 (Invitrogen คาร์ลส CAสหรัฐอเมริกา) กับเกลือของ Earle เสริม ด้วย 10% (vol/vol)คัดท้ายวัวซีรั่ม 2 mg/mL estradiol 17-บี 20 mg/mLวัว follicle กระตุ้นฮอร์โมน (Folltropin-V Bioniche),22 mg/mL โซเดียม pyruvate, gentamicin 50 mg/mLซัลเฟต และ glutamine 1 mM Percoll ได้จาก Amershamเทคโนโลยีชีวภาพ Pharmacia (Uppsala สวีเดน) โพแทสเซียม simplexเพิ่มประสิทธิภาพขนาดกลาง (KSOM) ที่อยู่ 1 mg/mL บีเอสเอจาก Caisson Laboratories Inc. ในวันใช้ KSOMมีการปรับเปลี่ยนการผลิต KSOM-BE2 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้[14] การสังเคราะห์น้ำมัน oviductal [15] ถูกซื้อเป็นกำหนดเองจากมาก (Billerica, MA สหรัฐอเมริกา)Lidocaine ได้จากแล็บ Pro (เซนต์โจเซฟ MO สหรัฐอเมริกา)
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.3 ฟลอริด้าทดลอง
2.3.1 รีเอเจนต์
วัสดุทั้งหมดที่ซื้อมาจาก บริษัท Sigma-Aldrich หรือ
Fisher Scientific (Fairlawn, นิวเจอร์ซีย์สหรัฐอเมริกา) นอกจากที่ระบุไว้
เป็นอย่างอื่น HEPES-Tyrode ของนมและผสมเทียม-Tyrode ของนม
ที่ซื้อมาจากกระสุน Laboratories Inc. (โลแกน, ยูทาห์,
ประเทศสหรัฐอเมริกา) สื่อเหล่านี้ถูกนำมาใช้เพื่อเตรียมความพร้อม HEPES-Tyrode ของ
ไพรูนมอัลบูมิ (TALP) และผสมเทียม-TALP [13] เซลล์
คอลเลกชันและสื่อสำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์ไข่ที่ซื้อ
เป็นกรรมสิทธิ์ ไข่ขนาดกลางคอลเลกชันสำหรับการพัฒนาของไข่
ที่เก็บรวบรวมได้ในท้องถิ่นเป็น TCM-199 กับเกลือของแฮงค์โดยไม่ต้อง
สีแดงฟีนอล (แอตแลนตา Biologicals, แอตแลนตา, GA, USA) และ
เสริมด้วย 2% (ปริมาตร / ปริมาตร) แขนซีรั่มวัว (Pel-
Freez, โรเจอร์ส, AR, สหรัฐอเมริกา ) 2 เฮ U / ml 100 U / มิลลิลิตร
penicillin-G 0.1 mg / ml ซัลเฟต streptomycin และ 1 มิลลิ
glutamine ไข่สุกสื่อกลางในการพัฒนาของไข่
ที่เก็บรวบรวมเป็นท้องถิ่น TCM-199 (Invitrogen, Carlsbad, CA,
USA) กับเกลือของเอิร์ลเสริมด้วย 10% (ปริมาตร / ปริมาตร)
ซีรั่มวัวยืด, 2 mg / ml estradiol 17-B, 20 mg / ml
วัว รูขุมขนฮอร์โมนกระตุ้น (Folltropin-V; Bioniche)
22 mg / ml ไพรูโซเดียม 50 mg / ml GENTAMICIN
ซัลเฟตและ glutamine มิลลิ 1 Percoll จาก Amersham
Pharmacia ไบโอเทค (สวีเดน) เริมโพแทสเซียม
กลางที่ดีที่สุด (KSOM) ที่มี 1 mg / ml บีเอสเอ
เป็นจากกระสุน Laboratories Inc. ในวันที่ใช้งาน KSOM
มีการปรับเปลี่ยนการผลิต KSOM-Be2 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[14] ของเหลวสังเคราะห์ท่อนำไข่ [15] ถูกซื้อเป็น
สูตรที่กำหนดเองจากค (บิลเลริกา, MA, USA).
Lidocaine เป็นจาก Pro Labs (เซนต์โจเซฟ, MO, USA)
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.3 ฟลอริด้าทดลอง
2.3.1 . สารเคมี
วัสดุทั้งหมดซื้อมาจากซิกม่า Aldrich หรือ
ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ( นิวยอร์ก , NJ , USA ) ,
ยกเว้นที่ระบุเป็นอย่างอื่น คือฮีเปส tyrode และลักษณะของ tyrode แลคแลค
ซื้อมาจากบ่อห้องปฏิบัติการ Inc . ( โลแกน , ยูทาห์
สหรัฐอเมริกา ) สื่อเหล่านี้ถูกใช้เพื่อเตรียมความพร้อมของ lactate pyruvate ฮีเปส tyrode
อัลบูมิน ( talp ) และ ivf-talp [ 13 ] โอพี
คอลเลกชันและการสื่อเพื่อซื้อไข่
ถูกเป็นเจ้าของ คอลเลกชันที่มีไข่ไข่
เก็บภายในเป็น tcm-199 กับแฮงค์ เกลือโดยไม่
ฟีนอลแดง ( Atlanta Norcross , GA , ทุกอย่าง , USA ) และเสริมด้วย
2 % ( ปริมาตร / ปริมาตร ) วัวขุน เซรั่ม ( เพล -
ฟรีซ โรเจอร์ , AR , USA ) , 2 U / ml ยา 100 U / มล
penicillin-g 0.1 มก. / มล. สเตรปโตมัยซินซัลเฟต , กรด 1 มม
อาหารสำหรับเซลล์ไข่ปกติ
เก็บภายในเป็น tcm-199 ( Invitrogen Carlsbad , CA , USA ,
) กับเอิร์ลเป็นเกลือผสม 10 % ( ปริมาตร / ปริมาตร )
วัวขุน เซรั่ม 2 มก. / มล. เอสตราดิออล 17-b 20 มก. / มล.
วัวรูขุมขนฮอร์โมนกระตุ้น ( folltropin-v ; ซี่ ) ,
22 มิลลิกรัม มล โซเดียมไพรูเวท 50 mg / ml ยา
ซัลเฟต , กรด 1 มิลลิเมตร จากที่ percoll
มุ่งมั่นเทคโนโลยีชีวภาพ ( อุปซอลาสวีเดน ) โพแทสเซียมคลอ
อาหารที่เหมาะสม ( ksom ) ที่มีขนาด 1 มก. / มล.
จากหีบห้องปฏิบัติการ Inc . ในวันที่ใช้ ksom
ดัดแปลงผลิต ksom-be2 ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
[ 14 ] สังเคราะห์ oviductal ของไหล [ 15 ] ถูกซื้อโดย
สูตรเองจาก MILLIPORE ( โตเกียว , MA , USA ) .
lidocaine คือจาก Pro Labs ( เซนต์ โจเซฟ โม สหรัฐอเมริกา )
การแปล กรุณารอสักครู่..
