- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
2.4. Persistence of R. solanacearum
2.4. Persistence of R. solanacearum in substrate and host tissue
Forty-gram samples of disinfected substrate (mixture of peat
moss and sand as used in the previous assay with tomato plants)
were placed into two sterile glass petri plates, and a 10 ml aliquot of
R. solanacearum inoculum (106 cfu ml1; produced as described
above) was added to each sample and mixed into the medium with
a sterilized spatula. The final water content was around 60% of the
water-holding capacity of the medium. A sample of 1 g was
immediately removed and serially diluted in 9 ml of physiological
water (8.5 g NaCl L1), and 100 mlwas spread onto the surface of the
selective medium (Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) and the
non-selective medium (Yeast Dextrose Agar, YDA). Five dilutions
and two replications were used for each dilution and growing
medium. Two glass petri plates were sealed with parafilm to
prevent moisture loss and were incubated in the dark at 25 C and
45 C, respectively, for six weeks. At periodic intervals of seven
days, 1 g sample was removed, serially diluted and plated as
described above. All plates were inverted and incubated at 28 C for
one week and colony forming units (cfu) of bacteria and separately
of R. solanaceraum were recorded.
Pure isolates of all R. solanaceraum colonies were analyzed using
the DAS-ELISA technique, as described above. When the result was
positive, intracellular spaces of tobacco plant leaves were infiltrated
with aqueous suspensions of bacteria (108 cfu ml1) to test their
pathogenicity after the thermal treatments.
To determine the persistence of the pathogen in soil in association
with the host tissue (artificially infected tomato plants), three
pieces of infected stem were placed into sterilized tubes containing
6 g of the disinfected growing medium. Twelve tubes with soil were
prepared, sealed with parafilm to avoid water loss, and placed in
two incubators at 25 C and 45 C, respectively. On a weekly basis
over a 6-week period, the plant debriswas removed from two tubes
of soil incubated at each temperature. The plant pieces from each
tube were washed with sterilized water, and were homogenized
with sterilized water in a mortar. To determine the presence of
pathogenic bacteria, part of this bacterial solution was directly
infiltrated into intracellular spaces of tobacco leaves (about 200 ml
in each leaf) to measure phytopathogenicity. The other part of the
suspension was stored at 6 C.
For bacterial suspensions showing negative results in tobacco,
the remaining suspension was serially diluted and plated as
described above to ensure that no R. solanacearum colonies were
obtained.
To determine the persistence of R. solanacearum in association
with the host tissue, one piece of infected stem was put into each
sterilized Eppendorf tube to be processed as described above.
A total of 12 pieces of infected stems were used in the experiment.
The different pure cultures obtained from the above experiments
were identified through sequencing the 16S rDNA gene. DNA
was extracted using the EaZy Nucleic Acid Isolation kit (E.Z.N.A.
Omega Bio-Tek Inc., USA). Oligonucleotides pA-pH (Edwards et al.,
1989) were used in the PCR and for sequencing. The thermal
profile consisted of 36 cycles including denaturation at 94 C for
1 min, primer annealing at 55 C for 2 min and an extension at 72 C
for 6 min. Amplification products were purified using the High Pure
PCR Product Purification kit (Roche). Sequencing was done at the
Instituto de Biología Molecular y Celular de Plantas de la Universidad
Politécnica de Valencia in Spain (ABI-337 Perkin Elmer)
using the Big Dye Terminator Cycle Sequencing kit (version 2.0)
(PE Biosystem) and the program CHROMAS (version 1.45).
Forty-gram samples of disinfected substrate (mixture of peat
moss and sand as used in the previous assay with tomato plants)
were placed into two sterile glass petri plates, and a 10 ml aliquot of
R. solanacearum inoculum (106 cfu ml1; produced as described
above) was added to each sample and mixed into the medium with
a sterilized spatula. The final water content was around 60% of the
water-holding capacity of the medium. A sample of 1 g was
immediately removed and serially diluted in 9 ml of physiological
water (8.5 g NaCl L1), and 100 mlwas spread onto the surface of the
selective medium (Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) and the
non-selective medium (Yeast Dextrose Agar, YDA). Five dilutions
and two replications were used for each dilution and growing
medium. Two glass petri plates were sealed with parafilm to
prevent moisture loss and were incubated in the dark at 25 C and
45 C, respectively, for six weeks. At periodic intervals of seven
days, 1 g sample was removed, serially diluted and plated as
described above. All plates were inverted and incubated at 28 C for
one week and colony forming units (cfu) of bacteria and separately
of R. solanaceraum were recorded.
Pure isolates of all R. solanaceraum colonies were analyzed using
the DAS-ELISA technique, as described above. When the result was
positive, intracellular spaces of tobacco plant leaves were infiltrated
with aqueous suspensions of bacteria (108 cfu ml1) to test their
pathogenicity after the thermal treatments.
To determine the persistence of the pathogen in soil in association
with the host tissue (artificially infected tomato plants), three
pieces of infected stem were placed into sterilized tubes containing
6 g of the disinfected growing medium. Twelve tubes with soil were
prepared, sealed with parafilm to avoid water loss, and placed in
two incubators at 25 C and 45 C, respectively. On a weekly basis
over a 6-week period, the plant debriswas removed from two tubes
of soil incubated at each temperature. The plant pieces from each
tube were washed with sterilized water, and were homogenized
with sterilized water in a mortar. To determine the presence of
pathogenic bacteria, part of this bacterial solution was directly
infiltrated into intracellular spaces of tobacco leaves (about 200 ml
in each leaf) to measure phytopathogenicity. The other part of the
suspension was stored at 6 C.
For bacterial suspensions showing negative results in tobacco,
the remaining suspension was serially diluted and plated as
described above to ensure that no R. solanacearum colonies were
obtained.
To determine the persistence of R. solanacearum in association
with the host tissue, one piece of infected stem was put into each
sterilized Eppendorf tube to be processed as described above.
A total of 12 pieces of infected stems were used in the experiment.
The different pure cultures obtained from the above experiments
were identified through sequencing the 16S rDNA gene. DNA
was extracted using the EaZy Nucleic Acid Isolation kit (E.Z.N.A.
Omega Bio-Tek Inc., USA). Oligonucleotides pA-pH (Edwards et al.,
1989) were used in the PCR and for sequencing. The thermal
profile consisted of 36 cycles including denaturation at 94 C for
1 min, primer annealing at 55 C for 2 min and an extension at 72 C
for 6 min. Amplification products were purified using the High Pure
PCR Product Purification kit (Roche). Sequencing was done at the
Instituto de Biología Molecular y Celular de Plantas de la Universidad
Politécnica de Valencia in Spain (ABI-337 Perkin Elmer)
using the Big Dye Terminator Cycle Sequencing kit (version 2.0)
(PE Biosystem) and the program CHROMAS (version 1.45).
0/5000
2.4. Persistence of R. solanacearum in substrate and host tissue
Forty-gram samples of disinfected substrate (mixture of peat
moss and sand as used in the previous assay with tomato plants)
were placed into two sterile glass petri plates, and a 10 ml aliquot of
R. solanacearum inoculum (106 cfu ml1; produced as described
above) was added to each sample and mixed into the medium with
a sterilized spatula. The final water content was around 60% of the
water-holding capacity of the medium. A sample of 1 g was
immediately removed and serially diluted in 9 ml of physiological
water (8.5 g NaCl L1), and 100 mlwas spread onto the surface of the
selective medium (Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) and the
non-selective medium (Yeast Dextrose Agar, YDA). Five dilutions
and two replications were used for each dilution and growing
medium. Two glass petri plates were sealed with parafilm to
prevent moisture loss and were incubated in the dark at 25 C and
45 C, respectively, for six weeks. At periodic intervals of seven
days, 1 g sample was removed, serially diluted and plated as
described above. All plates were inverted and incubated at 28 C for
one week and colony forming units (cfu) of bacteria and separately
of R. solanaceraum were recorded.
Pure isolates of all R. solanaceraum colonies were analyzed using
the DAS-ELISA technique, as described above. When the result was
positive, intracellular spaces of tobacco plant leaves were infiltrated
with aqueous suspensions of bacteria (108 cfu ml1) to test their
pathogenicity after the thermal treatments.
To determine the persistence of the pathogen in soil in association
with the host tissue (artificially infected tomato plants), three
pieces of infected stem were placed into sterilized tubes containing
6 g of the disinfected growing medium. Twelve tubes with soil were
prepared, sealed with parafilm to avoid water loss, and placed in
two incubators at 25 C and 45 C, respectively. On a weekly basis
over a 6-week period, the plant debriswas removed from two tubes
of soil incubated at each temperature. The plant pieces from each
tube were washed with sterilized water, and were homogenized
with sterilized water in a mortar. To determine the presence of
pathogenic bacteria, part of this bacterial solution was directly
infiltrated into intracellular spaces of tobacco leaves (about 200 ml
in each leaf) to measure phytopathogenicity. The other part of the
suspension was stored at 6 C.
For bacterial suspensions showing negative results in tobacco,
the remaining suspension was serially diluted and plated as
described above to ensure that no R. solanacearum colonies were
obtained.
To determine the persistence of R. solanacearum in association
with the host tissue, one piece of infected stem was put into each
sterilized Eppendorf tube to be processed as described above.
A total of 12 pieces of infected stems were used in the experiment.
The different pure cultures obtained from the above experiments
were identified through sequencing the 16S rDNA gene. DNA
was extracted using the EaZy Nucleic Acid Isolation kit (E.Z.N.A.
Omega Bio-Tek Inc., USA). Oligonucleotides pA-pH (Edwards et al.,
1989) were used in the PCR and for sequencing. The thermal
profile consisted of 36 cycles including denaturation at 94 C for
1 min, primer annealing at 55 C for 2 min and an extension at 72 C
for 6 min. Amplification products were purified using the High Pure
PCR Product Purification kit (Roche). Sequencing was done at the
Instituto de Biología Molecular y Celular de Plantas de la Universidad
Politécnica de Valencia in Spain (ABI-337 Perkin Elmer)
using the Big Dye Terminator Cycle Sequencing kit (version 2.0)
(PE Biosystem) and the program CHROMAS (version 1.45).
Forty-gram samples of disinfected substrate (mixture of peat
moss and sand as used in the previous assay with tomato plants)
were placed into two sterile glass petri plates, and a 10 ml aliquot of
R. solanacearum inoculum (106 cfu ml1; produced as described
above) was added to each sample and mixed into the medium with
a sterilized spatula. The final water content was around 60% of the
water-holding capacity of the medium. A sample of 1 g was
immediately removed and serially diluted in 9 ml of physiological
water (8.5 g NaCl L1), and 100 mlwas spread onto the surface of the
selective medium (Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) and the
non-selective medium (Yeast Dextrose Agar, YDA). Five dilutions
and two replications were used for each dilution and growing
medium. Two glass petri plates were sealed with parafilm to
prevent moisture loss and were incubated in the dark at 25 C and
45 C, respectively, for six weeks. At periodic intervals of seven
days, 1 g sample was removed, serially diluted and plated as
described above. All plates were inverted and incubated at 28 C for
one week and colony forming units (cfu) of bacteria and separately
of R. solanaceraum were recorded.
Pure isolates of all R. solanaceraum colonies were analyzed using
the DAS-ELISA technique, as described above. When the result was
positive, intracellular spaces of tobacco plant leaves were infiltrated
with aqueous suspensions of bacteria (108 cfu ml1) to test their
pathogenicity after the thermal treatments.
To determine the persistence of the pathogen in soil in association
with the host tissue (artificially infected tomato plants), three
pieces of infected stem were placed into sterilized tubes containing
6 g of the disinfected growing medium. Twelve tubes with soil were
prepared, sealed with parafilm to avoid water loss, and placed in
two incubators at 25 C and 45 C, respectively. On a weekly basis
over a 6-week period, the plant debriswas removed from two tubes
of soil incubated at each temperature. The plant pieces from each
tube were washed with sterilized water, and were homogenized
with sterilized water in a mortar. To determine the presence of
pathogenic bacteria, part of this bacterial solution was directly
infiltrated into intracellular spaces of tobacco leaves (about 200 ml
in each leaf) to measure phytopathogenicity. The other part of the
suspension was stored at 6 C.
For bacterial suspensions showing negative results in tobacco,
the remaining suspension was serially diluted and plated as
described above to ensure that no R. solanacearum colonies were
obtained.
To determine the persistence of R. solanacearum in association
with the host tissue, one piece of infected stem was put into each
sterilized Eppendorf tube to be processed as described above.
A total of 12 pieces of infected stems were used in the experiment.
The different pure cultures obtained from the above experiments
were identified through sequencing the 16S rDNA gene. DNA
was extracted using the EaZy Nucleic Acid Isolation kit (E.Z.N.A.
Omega Bio-Tek Inc., USA). Oligonucleotides pA-pH (Edwards et al.,
1989) were used in the PCR and for sequencing. The thermal
profile consisted of 36 cycles including denaturation at 94 C for
1 min, primer annealing at 55 C for 2 min and an extension at 72 C
for 6 min. Amplification products were purified using the High Pure
PCR Product Purification kit (Roche). Sequencing was done at the
Instituto de Biología Molecular y Celular de Plantas de la Universidad
Politécnica de Valencia in Spain (ABI-337 Perkin Elmer)
using the Big Dye Terminator Cycle Sequencing kit (version 2.0)
(PE Biosystem) and the program CHROMAS (version 1.45).
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.4 ความคงทนของอาร์ solanacearum ในพื้นผิวและเนื้อเยื่อโฮสต์
ตัวอย่างสี่สิบกรัมของพื้นผิวฆ่าเชื้อ (ซึ่งมีส่วนผสมของพีท
มอสและทรายที่ใช้ในการทดสอบก่อนหน้านี้ด้วยมะเขือเทศ)
ถูกวางลงในหมันสองจาน Petri แก้วและ 10 มล aliquot ของ
R . เชื้อ solanacearum (106 cfu มล 1;? ผลิตตามที่อธิบายไว้
ด้านบน) ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละตัวอย่างและผสมลงในสื่อที่มี
ไม้พายผ่านการฆ่าเชื้อ ปริมาณน้ำสุดท้ายคือประมาณ 60% ของ
กำลังการผลิตน้ำถือของกลาง ตัวอย่าง 1 กรัมถูก
ลบออกทันทีและปรับลดลำดับใน 9 มิลลิลิตรสรีรวิทยา
น้ำ (8.5 กรัมโซเดียมคลอไรด์ L 1?) และ 100 mlwas แพร่กระจายบนพื้นผิวของ
สื่อที่เลือก (tetrazolium ไตรเฟนิลคลอไรด์, TTC) และ
ขนาดกลางไม่ได้รับเลือก (ยีสต์ Dextrose วุ้น, YDA) ห้าเจือจาง
และทั้งสองถูกนำมาใช้ซ้ำสำหรับแต่ละเจือจางและการเติบโต
ปานกลาง สองแก้วจาน Petri ถูกปิดผนึกด้วย parafilm เพื่อ
ป้องกันการสูญเสียความชื้นและถูกบ่มในที่มืดที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสและ
45 องศาเซลเซียสตามลำดับเป็นเวลาหกสัปดาห์ ในช่วงระยะเจ็ด
วัน, 1 กรัมตัวอย่างจะถูกลบออกเจือจางลำดับและชุบที่
อธิบายไว้ข้างต้น แผ่นทั้งหมดถูกคว่ำและบ่มที่อุณหภูมิ 28? C เป็นเวลา
หนึ่งสัปดาห์และอาณานิคมสร้างหน่วย (CFU) ของเชื้อแบคทีเรียและแยก
ของอาร์ solanaceraum ถูกบันทึก
แยกบริสุทธิ์ของอาร์ solanaceraum อาณานิคมถูกวิเคราะห์โดยใช้
เทคนิค DAS-ELISA ตามที่กล่าวไว้ เหนือ เมื่อผลที่ได้
บวกช่องว่างภายในเซลล์ของใบพืชยาสูบได้แทรกซึมเข้าไปอยู่ใน
ที่มีสารแขวนลอยในน้ำของเชื้อแบคทีเรีย (108 cfu มล? 1) ในการทดสอบของพวกเขา
ทำให้เกิดโรคหลังจากการรักษาความร้อน
เพื่อตรวจสอบความคงทนของเชื้อโรคในดินในการคบหาสมาคม
กับเนื้อเยื่อโฮสต์ (การติดเชื้อเทียมมะเขือเทศ) สาม
ชิ้นส่วนของลำต้นที่ติดเชื้อถูกวางลงในหลอดฆ่าเชื้อที่มี
6 กรัมของสื่อที่เติบโตฆ่าเชื้อ สิบสองหลอดกับดินได้
เตรียมปิดผนึกด้วย parafilm เพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียน้ำและวางไว้ใน
สองตู้อบที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสและ 45 องศาเซลเซียสตามลำดับ เป็นรายสัปดาห์
ในช่วงระยะเวลา 6 สัปดาห์อาคาร debriswas ออกจากสองหลอด
ของดินบ่มที่อุณหภูมิแต่ละ ชิ้นพืชจากแต่ละ
หลอดถูกล้างด้วยน้ำผ่านการฆ่าเชื้อและได้หดหาย
ไปด้วยน้ำฆ่าเชื้อในครก การตรวจสอบการปรากฏตัวของ
เชื้อแบคทีเรียก่อโรคซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของการแก้ปัญหานี้ได้รับการติดเชื้อแบคทีเรียโดยตรง
แทรกซึมเข้าไปในพื้นที่ภายในเซลล์ของใบยาสูบ (ประมาณ 200 มิลลิลิตร
ในแต่ละใบ) เพื่อวัด phytopathogenicity ส่วนอื่น ๆ ของ
ระบบกันสะเทือนได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ 6 องศาเซลเซียส
สำหรับสารแขวนลอยแบคทีเรียแสดงผลเป็นลบในยาสูบ
ระงับเหลือถูกเจือจางลำดับและชุบที่
อธิบายไว้ข้างต้นเพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีอาร์ solanacearum อาณานิคมได้
รับ
การตรวจสอบความคงทนของการวิจัย . solanacearum ในการคบหาสมาคม
กับเนื้อเยื่อโฮสต์หนึ่งชิ้นส่วนของลำต้นที่ติดเชื้อถูกใส่ลงไปในแต่ละ
หลอด Eppendorf ฆ่าเชื้อที่ต้องดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น
ทั้งหมด 12 ชิ้นส่วนของลำต้นที่ติดเชื้อถูกนำมาใช้ในการทดลองวัฒนธรรมบริสุทธิ์ที่แตกต่างกันได้รับจากการดังกล่าวข้างต้น การทดลองได้รับการระบุถึงลำดับของยีน 16S rDNA ดีเอ็นเอถูกสกัดโดยใช้ชุดแยก Eazy นิวคลีอิกกรด (EZNA? โอเมก้าไบโอเต็อิงค์สหรัฐอเมริกา) oligonucleotides PA-พีเอช (เอ็ดเวิร์ด et al., 1989) ถูกนำมาใช้ในวิธี PCR และการเรียงลำดับ ความร้อนรายละเอียดประกอบด้วย 36 รอบรวมทั้งการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่ 94? C เป็นเวลา1 นาที, หลอมไพรที่ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีและการขยายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 นาที ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการขยายให้บริสุทธิ์โดยใช้บริสุทธิ์สูงPCR ชุดกรองสินค้า (Roche) ลำดับที่ทำที่Instituto de Biologíaโมเลกุลและมือถือเด Plantas เดอลา Universidad Politécnicaเดอบาเลนเซียในสเปน (ABI-337 Perkin Elmer) โดยใช้ชุดใหญ่ย้อม Terminator ลำดับวงจร (รุ่น 2.0) (PE Biosystem) และโปรแกรมการ chromas (รุ่น 1.45)
ตัวอย่างสี่สิบกรัมของพื้นผิวฆ่าเชื้อ (ซึ่งมีส่วนผสมของพีท
มอสและทรายที่ใช้ในการทดสอบก่อนหน้านี้ด้วยมะเขือเทศ)
ถูกวางลงในหมันสองจาน Petri แก้วและ 10 มล aliquot ของ
R . เชื้อ solanacearum (106 cfu มล 1;? ผลิตตามที่อธิบายไว้
ด้านบน) ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละตัวอย่างและผสมลงในสื่อที่มี
ไม้พายผ่านการฆ่าเชื้อ ปริมาณน้ำสุดท้ายคือประมาณ 60% ของ
กำลังการผลิตน้ำถือของกลาง ตัวอย่าง 1 กรัมถูก
ลบออกทันทีและปรับลดลำดับใน 9 มิลลิลิตรสรีรวิทยา
น้ำ (8.5 กรัมโซเดียมคลอไรด์ L 1?) และ 100 mlwas แพร่กระจายบนพื้นผิวของ
สื่อที่เลือก (tetrazolium ไตรเฟนิลคลอไรด์, TTC) และ
ขนาดกลางไม่ได้รับเลือก (ยีสต์ Dextrose วุ้น, YDA) ห้าเจือจาง
และทั้งสองถูกนำมาใช้ซ้ำสำหรับแต่ละเจือจางและการเติบโต
ปานกลาง สองแก้วจาน Petri ถูกปิดผนึกด้วย parafilm เพื่อ
ป้องกันการสูญเสียความชื้นและถูกบ่มในที่มืดที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสและ
45 องศาเซลเซียสตามลำดับเป็นเวลาหกสัปดาห์ ในช่วงระยะเจ็ด
วัน, 1 กรัมตัวอย่างจะถูกลบออกเจือจางลำดับและชุบที่
อธิบายไว้ข้างต้น แผ่นทั้งหมดถูกคว่ำและบ่มที่อุณหภูมิ 28? C เป็นเวลา
หนึ่งสัปดาห์และอาณานิคมสร้างหน่วย (CFU) ของเชื้อแบคทีเรียและแยก
ของอาร์ solanaceraum ถูกบันทึก
แยกบริสุทธิ์ของอาร์ solanaceraum อาณานิคมถูกวิเคราะห์โดยใช้
เทคนิค DAS-ELISA ตามที่กล่าวไว้ เหนือ เมื่อผลที่ได้
บวกช่องว่างภายในเซลล์ของใบพืชยาสูบได้แทรกซึมเข้าไปอยู่ใน
ที่มีสารแขวนลอยในน้ำของเชื้อแบคทีเรีย (108 cfu มล? 1) ในการทดสอบของพวกเขา
ทำให้เกิดโรคหลังจากการรักษาความร้อน
เพื่อตรวจสอบความคงทนของเชื้อโรคในดินในการคบหาสมาคม
กับเนื้อเยื่อโฮสต์ (การติดเชื้อเทียมมะเขือเทศ) สาม
ชิ้นส่วนของลำต้นที่ติดเชื้อถูกวางลงในหลอดฆ่าเชื้อที่มี
6 กรัมของสื่อที่เติบโตฆ่าเชื้อ สิบสองหลอดกับดินได้
เตรียมปิดผนึกด้วย parafilm เพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียน้ำและวางไว้ใน
สองตู้อบที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสและ 45 องศาเซลเซียสตามลำดับ เป็นรายสัปดาห์
ในช่วงระยะเวลา 6 สัปดาห์อาคาร debriswas ออกจากสองหลอด
ของดินบ่มที่อุณหภูมิแต่ละ ชิ้นพืชจากแต่ละ
หลอดถูกล้างด้วยน้ำผ่านการฆ่าเชื้อและได้หดหาย
ไปด้วยน้ำฆ่าเชื้อในครก การตรวจสอบการปรากฏตัวของ
เชื้อแบคทีเรียก่อโรคซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของการแก้ปัญหานี้ได้รับการติดเชื้อแบคทีเรียโดยตรง
แทรกซึมเข้าไปในพื้นที่ภายในเซลล์ของใบยาสูบ (ประมาณ 200 มิลลิลิตร
ในแต่ละใบ) เพื่อวัด phytopathogenicity ส่วนอื่น ๆ ของ
ระบบกันสะเทือนได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ 6 องศาเซลเซียส
สำหรับสารแขวนลอยแบคทีเรียแสดงผลเป็นลบในยาสูบ
ระงับเหลือถูกเจือจางลำดับและชุบที่
อธิบายไว้ข้างต้นเพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีอาร์ solanacearum อาณานิคมได้
รับ
การตรวจสอบความคงทนของการวิจัย . solanacearum ในการคบหาสมาคม
กับเนื้อเยื่อโฮสต์หนึ่งชิ้นส่วนของลำต้นที่ติดเชื้อถูกใส่ลงไปในแต่ละ
หลอด Eppendorf ฆ่าเชื้อที่ต้องดำเนินการตามที่อธิบายไว้ข้างต้น
ทั้งหมด 12 ชิ้นส่วนของลำต้นที่ติดเชื้อถูกนำมาใช้ในการทดลองวัฒนธรรมบริสุทธิ์ที่แตกต่างกันได้รับจากการดังกล่าวข้างต้น การทดลองได้รับการระบุถึงลำดับของยีน 16S rDNA ดีเอ็นเอถูกสกัดโดยใช้ชุดแยก Eazy นิวคลีอิกกรด (EZNA? โอเมก้าไบโอเต็อิงค์สหรัฐอเมริกา) oligonucleotides PA-พีเอช (เอ็ดเวิร์ด et al., 1989) ถูกนำมาใช้ในวิธี PCR และการเรียงลำดับ ความร้อนรายละเอียดประกอบด้วย 36 รอบรวมทั้งการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่ 94? C เป็นเวลา1 นาที, หลอมไพรที่ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีและการขยายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 นาที ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการขยายให้บริสุทธิ์โดยใช้บริสุทธิ์สูงPCR ชุดกรองสินค้า (Roche) ลำดับที่ทำที่Instituto de Biologíaโมเลกุลและมือถือเด Plantas เดอลา Universidad Politécnicaเดอบาเลนเซียในสเปน (ABI-337 Perkin Elmer) โดยใช้ชุดใหญ่ย้อม Terminator ลำดับวงจร (รุ่น 2.0) (PE Biosystem) และโปรแกรมการ chromas (รุ่น 1.45)
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.4 . การคงอยู่ของ R . solanacearum ในพื้นผิวและโฮสต์เนื้อเยื่อ
40 กรัมตัวอย่างฆ่าเชื้อพื้นผิว ( ผสมพีทมอสและทราย
ที่ใช้ในการทดสอบก่อนหน้านี้กับพืชมะเขือเทศ )
2 หมันแก้วถูกวางลงในจาน Petri และ 10 ml ส่วนลงตัวของ
R . solanacearum สายพันธุ์ ( 106 cfu ml 1 ; ผลิตตามที่อธิบายไว้
ข้างบน ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละตัวอย่างและผสมลงในอาหาร
ฆ่าเชื้อไม้พาย . ปริมาณน้ำสุดท้ายประมาณ 60% ของ
น้ำถือความจุของสื่อ ตัวอย่าง 1 g
ทันทีลบออกและอนุกรม 9 มล. เจือจางในน้ำทางสรีรวิทยา
( 8.5 กรัม เกลือ 1 / ) และ 100 mlwas กระจายลงบนพื้นผิวของ
กลางเลือก ( ไตรฟีนิล tetrazolium ( TTC ) และไม่เลือกขนาดกลาง
( ยีสต์ dextrose agar yda , ) ห้าวิธีการ
และสองซ้ำถูกใช้สำหรับแต่ละการเจือจางและเติบโต
) สองจาน Petri แก้วถูกผนึกด้วยพาราฟิล์มป้องกันการสูญเสียความชื้นและ
) ในที่มืดที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส และ
45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 สัปดาห์ ในช่วงเจ็ดวัน )
1 G ตัวอย่างออกเป็นเจือจาง และชุบ
ที่อธิบายข้างต้น ทุกจานถูกคว่ำ และ บ่มที่ 28 C
หนึ่งสัปดาห์และอาณานิคมสร้างหน่วย ( CFU ) ของแบคทีเรีย และแยก
R . solanaceraum ถูกบันทึกไว้ .
บริสุทธิ์จำนวนโคโลนี อาร์ solanaceraum ทั้งหมดถูกนำมาวิเคราะห์โดยใช้เทคนิค das-elisa
ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น เมื่อผล
บวก เป็นเซลล์ของพืชใบยาสูบแทรกซึมอยู่
กับสารละลายแขวนลอยของแบคทีเรีย ( 108 CFU / ml 1 ) การทดสอบ
หลังจากการรักษาความร้อน .
ตรวจสอบความคงอยู่ของเชื้อโรคในดินในสมาคม
กับโฮสต์ ( พืชมะเขือเทศติดเนื้อเยื่อเทียม ) 3
ชิ้นก้านติดอยู่ในท่อที่มีการฆ่าเชื้อ
6 กรัมของการฆ่าเชื้อ ) 12 หลอดกับดิน
เตรียมผนึกกับพาราฟิล์มเพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียน้ำและวางไว้ใน
สองตู้ที่ 25 องศาเซลเซียส และ 45 องศาเซลเซียส ตามลำดับ ในรายสัปดาห์
กว่า 6 สัปดาห์ระยะเวลาพืช debriswas เอาออกจากท่อสองท่อ
ของดินที่บ่มที่อุณหภูมิแต่ละ . พืชชิ้น
หลอดถูกล้างด้วยน้ำและฆ่าเชื้อ , ฆ่าเชื้อในน้ำที่เป็นโฮโม
กับครก เพื่อตรวจสอบสถานะของ
แบคทีเรียก่อโรคเป็นส่วนหนึ่งของการแก้ปัญหานี้คือตรง
แบคทีเรียแทรกซึมเข้าไปในช่องว่างภายในเซลล์ของใบยาสูบ ( 200 ml
ในแต่ละใบ ) วัด phytopathogenicity . ส่วนอื่น ๆของ
ถูกระงับไว้ที่ 6 C .
สำหรับแบคทีเรียถูกพักงานแสดงผลเชิงลบในยาสูบ
ช่วงล่างที่เหลือก็เป็นเจือจาง และชุบ
อธิบายไว้ข้างต้นเพื่อให้มั่นใจว่าไม่มีเชื้อ R .
เป็นอาณานิคมได้ เพื่อตรวจสอบการคงอยู่ของ อาร์เชื้อในสมาคม
กับโฮสเนื้อเยื่อ ชิ้นส่วนหนึ่งของก้านที่ติดเชื้อถูกใส่ลงในแต่ละหลอดจะถูกประมวลผลโดยเพนดอร์ฟ
ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น รวม 12 ชิ้นของลำต้นที่ติดเชื้อที่ใช้ในการทดลอง
ต่างเชื้อบริสุทธิ์ที่ได้จากการทดลองข้างต้นได้ระบุถึงลำดับ
ช่วง 16S rDNA ยีน . ดีเอ็นเอ
สกัดโดยใช้อีซีกรดนิวคลีอิกแยกชุด ( e.z.n.a.
โอเมก้าไบโอเต็กอิงค์ สหรัฐอเมริกา ) โอลิโกนิวคลีโอไทด์ PA pH ( Edwards et al . ,
1989 ) ถูกใช้ในการตรวจและติดตาม . ความร้อน
โปรไฟล์ประกอบด้วย 36 รอบ ( รวมทั้งที่ 94 C
1 นาทีที่ 55 รองพื้นอ่อน C 2 นาทีและส่วนขยายที่ 72 C
6 นาที ขยายผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ใช้
บริสุทธิ์สูงชุดฟอกผลิตภัณฑ์ PCR ( โรช ) การกระทำที่ Instituto de biolog í a
( Y celular de plantas de la Universidad
polit é cnica Valencia สเปน ( abi-337 เพอร์กินเอลเมอร์ )
ใช้ย้อม Terminator รอบใหญ่ลำดับชุด ( เวอร์ชั่น 2.0 )
( PE biosystem ) และโปรแกรม Chromas ( รุ่นที่ 10 )
40 กรัมตัวอย่างฆ่าเชื้อพื้นผิว ( ผสมพีทมอสและทราย
ที่ใช้ในการทดสอบก่อนหน้านี้กับพืชมะเขือเทศ )
2 หมันแก้วถูกวางลงในจาน Petri และ 10 ml ส่วนลงตัวของ
R . solanacearum สายพันธุ์ ( 106 cfu ml 1 ; ผลิตตามที่อธิบายไว้
ข้างบน ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละตัวอย่างและผสมลงในอาหาร
ฆ่าเชื้อไม้พาย . ปริมาณน้ำสุดท้ายประมาณ 60% ของ
น้ำถือความจุของสื่อ ตัวอย่าง 1 g
ทันทีลบออกและอนุกรม 9 มล. เจือจางในน้ำทางสรีรวิทยา
( 8.5 กรัม เกลือ 1 / ) และ 100 mlwas กระจายลงบนพื้นผิวของ
กลางเลือก ( ไตรฟีนิล tetrazolium ( TTC ) และไม่เลือกขนาดกลาง
( ยีสต์ dextrose agar yda , ) ห้าวิธีการ
และสองซ้ำถูกใช้สำหรับแต่ละการเจือจางและเติบโต
) สองจาน Petri แก้วถูกผนึกด้วยพาราฟิล์มป้องกันการสูญเสียความชื้นและ
) ในที่มืดที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส และ
45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 สัปดาห์ ในช่วงเจ็ดวัน )
1 G ตัวอย่างออกเป็นเจือจาง และชุบ
ที่อธิบายข้างต้น ทุกจานถูกคว่ำ และ บ่มที่ 28 C
หนึ่งสัปดาห์และอาณานิคมสร้างหน่วย ( CFU ) ของแบคทีเรีย และแยก
R . solanaceraum ถูกบันทึกไว้ .
บริสุทธิ์จำนวนโคโลนี อาร์ solanaceraum ทั้งหมดถูกนำมาวิเคราะห์โดยใช้เทคนิค das-elisa
ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น เมื่อผล
บวก เป็นเซลล์ของพืชใบยาสูบแทรกซึมอยู่
กับสารละลายแขวนลอยของแบคทีเรีย ( 108 CFU / ml 1 ) การทดสอบ
หลังจากการรักษาความร้อน .
ตรวจสอบความคงอยู่ของเชื้อโรคในดินในสมาคม
กับโฮสต์ ( พืชมะเขือเทศติดเนื้อเยื่อเทียม ) 3
ชิ้นก้านติดอยู่ในท่อที่มีการฆ่าเชื้อ
6 กรัมของการฆ่าเชื้อ ) 12 หลอดกับดิน
เตรียมผนึกกับพาราฟิล์มเพื่อหลีกเลี่ยงการสูญเสียน้ำและวางไว้ใน
สองตู้ที่ 25 องศาเซลเซียส และ 45 องศาเซลเซียส ตามลำดับ ในรายสัปดาห์
กว่า 6 สัปดาห์ระยะเวลาพืช debriswas เอาออกจากท่อสองท่อ
ของดินที่บ่มที่อุณหภูมิแต่ละ . พืชชิ้น
หลอดถูกล้างด้วยน้ำและฆ่าเชื้อ , ฆ่าเชื้อในน้ำที่เป็นโฮโม
กับครก เพื่อตรวจสอบสถานะของ
แบคทีเรียก่อโรคเป็นส่วนหนึ่งของการแก้ปัญหานี้คือตรง
แบคทีเรียแทรกซึมเข้าไปในช่องว่างภายในเซลล์ของใบยาสูบ ( 200 ml
ในแต่ละใบ ) วัด phytopathogenicity . ส่วนอื่น ๆของ
ถูกระงับไว้ที่ 6 C .
สำหรับแบคทีเรียถูกพักงานแสดงผลเชิงลบในยาสูบ
ช่วงล่างที่เหลือก็เป็นเจือจาง และชุบ
อธิบายไว้ข้างต้นเพื่อให้มั่นใจว่าไม่มีเชื้อ R .
เป็นอาณานิคมได้ เพื่อตรวจสอบการคงอยู่ของ อาร์เชื้อในสมาคม
กับโฮสเนื้อเยื่อ ชิ้นส่วนหนึ่งของก้านที่ติดเชื้อถูกใส่ลงในแต่ละหลอดจะถูกประมวลผลโดยเพนดอร์ฟ
ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น รวม 12 ชิ้นของลำต้นที่ติดเชื้อที่ใช้ในการทดลอง
ต่างเชื้อบริสุทธิ์ที่ได้จากการทดลองข้างต้นได้ระบุถึงลำดับ
ช่วง 16S rDNA ยีน . ดีเอ็นเอ
สกัดโดยใช้อีซีกรดนิวคลีอิกแยกชุด ( e.z.n.a.
โอเมก้าไบโอเต็กอิงค์ สหรัฐอเมริกา ) โอลิโกนิวคลีโอไทด์ PA pH ( Edwards et al . ,
1989 ) ถูกใช้ในการตรวจและติดตาม . ความร้อน
โปรไฟล์ประกอบด้วย 36 รอบ ( รวมทั้งที่ 94 C
1 นาทีที่ 55 รองพื้นอ่อน C 2 นาทีและส่วนขยายที่ 72 C
6 นาที ขยายผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ใช้
บริสุทธิ์สูงชุดฟอกผลิตภัณฑ์ PCR ( โรช ) การกระทำที่ Instituto de biolog í a
( Y celular de plantas de la Universidad
polit é cnica Valencia สเปน ( abi-337 เพอร์กินเอลเมอร์ )
ใช้ย้อม Terminator รอบใหญ่ลำดับชุด ( เวอร์ชั่น 2.0 )
( PE biosystem ) และโปรแกรม Chromas ( รุ่นที่ 10 )
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- The CTR and EIN gene are involved direct
- Genetic analysisGenomic DNA was extracte
- Structure modelingThe structures of wild
- คุณมาที่นี่บ่อยไหม
- จุดเด่น
- ปิดเทอมในครั้งนี้ฉันแทบจะไม่มีโอกาสได้ไป
- ขอบคุณสำหรับคำอวยพรวันเกิด คุณคือพี่ชายท
- intentionally lying on the hightway
- reasonable
- ส่งผลให้ติดเกม
- ตกลงฉันจะไช้แอปนั้นแต่ตอนนี้ฉันต้องนอนแล
- Peru is a country where the cost of livi
- This study has attempted to illuminate t
- Significant uses of diatomite are, there
- At จ.บุรีรัมย์ทุกคนกำลังหลงทางแคท : มีอะ
- 看不懂...
- U look really pretty
- คุณไปเที่ยวใช่ไหม
- Morphology of the cells was examined und
- Genetic analysisGenomic DNA was extracte
- How many siblings do u have
- ปักเทียน
- ไม่ต้องเรียกชื่อจริงก็ได
- At จ.บุรีรัมย์ทุกคนกำลังหลงทางแคท : มีอะ
