In order to measure seed transmissi

In order to measure seed transmission, we inoculated fifteen
tomato plants (cv. Beefsteak) growing in 25-cm diameter pots in a
restricted access growth chamber in the greenhouse at Iowa State
University (ISU), under 15 hours of light per day and the temperature
held constant at 21°C. These were inoculated at the third true leaf stage
with PSTVd (kindly provided by Robert Owens, Beltsville Agricultural
Research Center, Beltsville MD). A ~3 cm2 piece of infected leaf tissue
was ground in liquid nitrogen prior to being diluted in a phosphate
buffer (0.1 M Na2H/KH2PO4buffer) in a 1:3 ratio by volume.
Carborundum powder was dusted on the surface of the third true leaf,
and the inoculum was then applied to the leaf surface with a pestle. To
confirm infection we tested a leaf from each plant for PSTVd two weeks
after inoculation. To avoid cross contamination a new sterile disposable
forceps (Trade Winds, Inc., Pleasant Prairie, WI) was used to collect
each leaf sample, which was then stored at -80°C prior to extraction.
Ripe fruit were collected and stored at 8°C prior to seed extraction. A
total of 141 tomatoes and 8,041 seeds were collected from the fifteen
plants. In order to assess the frequency of seed infection, 350 seeds were
individually tested for PSTVd infection, and in order to determine the
frequency of transmission to seedlings, 1,620 seeds were planted in
individual pots in a restricted access growth chamber in the greenhouse
at ISU, under 15 hours of light per day and the temperature held
constant at 21°C. The seedlings were planted with a minimum distance
of three inches between seedlings to avoid mechanical transmission
of the viroid. Three hundred and fifty seedlings were harvested for
testing at the third true leaf stage. Twenty-one of the seedlings that
tested positive for PSTVd via RT-PCR were transplanted and grown
in order to assess vertical transmission to the next generation of seeds.
The plants were grown in a restricted access growth chamber under the
same conditions as described above. Only four of these plants survived
to produce fruit and from these a total 100 seeds were tested for PSTVd
infection via qPCR.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวัดส่งเมล็ด เรา inoculated fifteenมะเขือเทศพืช (พันธุ์ Beefsteak) ปลูกในกระถางเส้นผ่าศูนย์กลาง 25 ซม.ในการจำกัดการเข้าถึงหอเจริญเติบโตในเรือนกระจกที่รัฐรัฐไอโอวามหาวิทยาลัย (อินน์แอมส์), ต่ำกว่า 15 ชั่วโมงแสงต่อวันและอุณหภูมิจัดขึ้นอย่างต่อเนื่องที่ 21 องศาเซลเซียส เหล่านี้ถูก inoculated ในระยะใบจริงสามกับ PSTVd (กรุณาโดยโรเบิร์ต Owens, Beltsville เกษตรวิจัย Beltsville MD ศูนย์) Cm2 ~ 3 ชิ้นส่วนของเนื้อเยื่อใบที่ติดไวรัสมีพื้นในไนโตรเจนเหลวก่อนที่จะถูกทำให้เจือจางในฟอสเฟตเป็นบัฟเฟอร์ (0.1 M Na2H/KH2PO4buffer) ในอัตรา 1:3 โดยปริมาตรผง Carborundum มี dusted บนพื้นผิวของจริงใบที่ 3และ inoculum แล้วใช้พื้นผิวของใบไม้กับ pestle ถึงยืนยันการติดเชื้อที่เราทดสอบใบจากแต่ละโรงงาน PSTVd สองสัปดาห์หลังจาก inoculation นั้น เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามทิ้งใส่ใหม่คีม (ลมค้า Inc. ทุ่งหญ้ารื่นรมย์ WI) ถูกใช้เพื่อเก็บรวบรวมแต่ละใบอย่าง ซึ่งถูกเก็บบันทึกไว้ที่-80 ° C ก่อนที่จะแยกผลไม้สุกได้รวบรวม และจัดเก็บที่ 8° C ก่อนแยกเมล็ด Aจำนวน 141 มะเขือเทศและเมล็ด 8,041 ได้รวบรวมจากสิบห้ารดน้ำต้นไม้ การประเมินความถี่ของการติดเชื้อเมล็ด เมล็ด 350 ได้ทดสอบเชื้อ PSTVd และ การตรวจสอบแต่ละความถี่ในการส่งแฟกซ์กล้าไม้ 1620 เมล็ดที่ปลูกในกระถางละในหอเจริญเติบโตที่จำกัดการเข้าถึงในเรือนกระจกที่อินน์แอมส์ ต่ำกว่า 15 ชั่วโมงแสงต่อวันและอุณหภูมิจัดขึ้นค่าคงที่ที่ 21 องศาเซลเซียส กล้าไม้ได้ปลูก ด้วยระยะห่างที่ต่ำสุดของนิ้วที่สามระหว่างกล้าไม้เพื่อหลีกเลี่ยงการส่งข้อมูลของไวรอยด์ กล้าไม้สามร้อย และสิบถูกเก็บเกี่ยวในทดสอบที่ระยะใบจริงสาม น้อยกล้าไม้ที่transplanted และปลูกทดสอบบวกสำหรับ PSTVd ผ่าน RT-PCRการประเมินส่งแนวตั้งเพื่อรุ่นต่อไปของเมล็ดพันธุ์พืชที่ปลูกในหอเจริญเติบโตที่จำกัดการเข้าถึงภายใต้การเงื่อนไขเดียวอธิบายไว้ข้างต้น 4 เท่าของพืชเหล่านี้ที่รอดชีวิตให้ผล และเข้า ทดสอบเมล็ด 100 แบบรวมสำหรับ PSTVdติดเชื้อผ่าน qPCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อที่จะวัดการส่งเมล็ดพันธุ์ที่เราเชื้อสิบห้ามะเขือเทศ (พันธุ์. สเต็กเนื้อ) การเจริญเติบโตในกระถางขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 25 ซม. ในห้องการเจริญเติบโตของการจำกัด การเข้าในเรือนเพาะชำที่ไอโอวารัฐUniversity (ISU) อายุต่ำกว่า 15 ชั่วโมงของแสงต่อวันและ อุณหภูมิคงที่ที่21 องศาเซลเซียส เชื้อเหล่านี้ได้ในขั้นตอนใบจริงที่สามกับ PSTVd ​​(ให้ความกรุณาโดยโรเบิร์ตโอเวน, เฟการเกษตรศูนย์วิจัยBeltsville MD) ~ 3 ชิ้น cm2 ของเนื้อเยื่อใบที่ติดเชื้อเป็นพื้นดินในไนโตรเจนเหลวก่อนที่จะถูกปรับลดในฟอสเฟตบัฟเฟอร์(0.1 M Na2H / KH2PO4buffer) ใน 1:. 3 อัตราส่วนโดยปริมาตรผงกากเพชรถูกปัดฝุ่นบนพื้นผิวของใบที่แท้จริงที่สาม, และเชื้อถูกนำไปใช้แล้วผิวใบสากกับ เพื่อยืนยันการติดเชื้อเราทดสอบใบจากพืชแต่ละ PSTVd ​​สองสัปดาห์หลังจากการฉีดวัคซีน เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนทิ้งใหม่ผ่านการฆ่าเชื้อคีม (ลมค้า, Inc Pleasant Prairie, WI) ถูกนำมาใช้ในการเก็บรวบรวมแต่ละตัวอย่างใบซึ่งถูกเก็บไว้ที่-80 องศาเซลเซียสก่อนที่จะมีการสกัด. ผลสุกที่ถูกเก็บรวบรวมและเก็บไว้ที่ 8 ° C ก่อนที่จะมีการสกัดเมล็ด รวม 141 มะเขือเทศและเมล็ด 8041 ถูกเก็บรวบรวมจากสิบห้าพืช เพื่อประเมินความถี่ของการติดเชื้อเมล็ด 350 เมล็ดถูกทดสอบเป็นรายบุคคลสำหรับการติดเชื้อPSTVd ​​และเพื่อที่จะกำหนดความถี่ของการส่งผ่านไปยังต้นกล้า1,620 เมล็ดปลูกในกระถางของแต่ละบุคคลในการจำกัด การเข้าถึงห้องการเจริญเติบโตในเรือนกระจกที่ISU, อายุต่ำกว่า 15 ชั่วโมงของแสงต่อวันและอุณหภูมิที่จัดขึ้นอย่างต่อเนื่องวันที่21 ° C ต้นกล้าที่ปลูกด้วยระยะทางไม่ต่ำกว่าสามนิ้วระหว่างต้นกล้าที่จะหลีกเลี่ยงการส่งเครื่องจักรกลของไวรอยด์ สามร้อยห้าสิบต้นกล้าได้รับการเก็บเกี่ยวสำหรับการทดสอบในขั้นตอนที่สามใบที่แท้จริง ยี่สิบหนึ่งของต้นกล้าที่ผ่านการทดสอบในเชิงบวกสำหรับ PSTVd ​​ผ่าน RT-PCR ได้รับการปลูกและปลูกเพื่อประเมินการส่งแนวตั้งในรุ่นต่อไปของเมล็ด. พืชที่ปลูกในการ จำกัด การเข้าถึงห้องเจริญเติบโตภายใต้เงื่อนไขเดียวกันที่อธิบายข้างต้น เพียงสี่ของพืชเหล่านี้รอดชีวิตมาได้ในการผลิตและผลไม้เหล่านี้จากทั้งหมด 100 เมล็ดได้รับการตรวจ PSTVd ​​การติดเชื้อผ่านทาง qPCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อวัดการส่งเมล็ดพันธุ์ที่เราปลูกพืชมะเขือเทศ 15
( พันธุ์ สเต็กเนื้อ ) เพิ่มขึ้น 25 ซม. หม้อในการเข้าถึงการเจริญเติบโต
ห้องในเรือนกระจกที่มหาวิทยาลัยรัฐไอโอวา
( ISU ) ภายใต้ 15 ชั่วโมงของแสงต่อวันและอุณหภูมิ
จัดขึ้นคงที่ที่ 21 องศา เหล่านี้ปลูกที่ระยะที่สามจริงใบ
กับ pstvd ( กรุณาให้โรเบิร์ต โอเว่นศูนย์วิจัยการเกษตร
Beltsville Beltsville , MD ) ~ 3 cm2 ชิ้นใบเนื้อเยื่อติดเชื้อ
คือพื้นดินในไนโตรเจนเหลวก่อนการเจือจางในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 0.1 M /
na2h kh2po4buffer ) ในอัตราส่วน 1 : 3 โดยปริมาตร
กากเพชรผงโรยบนพื้นผิวของใบจริง 3
และเชื้อก็ใช้กับผิวใบด้วย สาก

ยืนยันการติดเชื้อเราทดสอบจากใบพืชแต่ละชนิดเพื่อ pstvd สองอาทิตย์
หลังจากปลูกเชื้อ เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามใหม่เป็นหมันผ้าอ้อม
คีม ( ตะเภา , อิงค์ , รื่นรมย์ Prairie , WI ) ถูกใช้เพื่อเก็บรวบรวมตัวอย่าง
แต่ละใบซึ่งก็เก็บที่อุณหภูมิ - 80 องศา C ก่อนการสกัด
สุกคือข้อมูลที่เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 8 องศา C ก่อนการสกัดเมล็ด a
รวม 141 มะเขือเทศและ 8041 เมล็ดที่เก็บจากสิบห้า
พืช เพื่อประเมินความถี่ของการติดเชื้อเมล็ด 350 เมล็ด
แต่ละรายการทดสอบสำหรับการติดเชื้อ pstvd และเพื่อศึกษาความถี่ของการส่งต้นกล้า
, เมล็ดพันธุ์ที่ปลูกในกระถาง 1620
บุคคลในการเข้าถึงการเจริญเติบโตห้องเรือนกระจก
ที่ ISU , ภายใต้ 15 ชั่วโมงต่อวันและอุณหภูมิของแสง จัดขึ้น
ค่าคงที่ที่ 21 องศา การปลูกด้วยระยะต่ำสุด
สามนิ้วระหว่างต้นกล้าเพื่อหลีกเลี่ยง
ส่งเครื่องจักรกลของไวรอยด์ . สามร้อยห้าสิบ กล้าเก็บสำหรับ
ทดสอบที่ระยะที่ 3 ใบจริง ยี่สิบหนึ่งของต้นกล้าที่
ทดสอบบวกสำหรับ pstvd นี้มีการปลูก
และผ่านเพื่อที่จะประเมินแนวตั้งส่งผ่านไปยังรุ่นต่อไปของเมล็ด
ปลูกในเขตหวงห้ามของห้องใต้
เงื่อนไขเดียวกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้น เพียงสี่ของพืชเหล่านี้รอด
การผลิตผลไม้และจากเหล่านี้ทั้งหมด 100 เมล็ด ทดสอบการติดเชื้อ pstvd

ผ่าน qpcr .