Functional expression of a thermost

Functional expression of a thermostable phytase from A. niger was achieved in Kluyveromyces lactis GG799 cells. Effective secretion of recombinant enzyme (198 U ml−1) in the fermentation broth at 72 h incubation at 22 °C was obtained. Purified enzyme showed a specific activity of 72 U mg−1) and was detected on SDS-PAGE as a heavily glycosylated protein with a molecular weight of ≥140 kDa. Optimum temperature of the enzyme was at 55 °C and it showed a characteristic bi-hump pH profile with two pH optima (at pH 2.5 and 5.5). Enzyme showed considerable pepsin resistance with 60% activity retention after incubation with pepsin at the ratio of 1:1000. Enzyme was thermostable retaining 69 and 37% activity at 90 and 100 °C for 10 min respectively and remained active at these temperatures till 1 h. Deglycosylation studies demonstrated negligible effect of N-linked glycans on thermal properties. Multiple sequence alignment data revealed a conserved Asn at position 345 of this phytase which might contribute to its thermal properties. This thermostable phytase coupled with its noticeable protease resistance could be a better alternative to current commercial phytases.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีโอสเตบิล thermostable จากไนเจอร์ A. แสดงทำงานสำเร็จใน Kluyveromyces lactis เซลล์ GG799 มีประสิทธิภาพหลั่งของ recombinant เอนไซม์ (198 U ml−1) ในน้ำซุปหมักบ่ม 72 h 22 ° c ที่ได้รับ เอนไซม์บริสุทธิ์พบกิจกรรมเฉพาะของ 72 U mg−1) และพบใน SDS-หน้าเป็นการหนัก glycosylated โปรตีน มีน้ำหนักโมเลกุลของ ≥140 kDa อุณหภูมิที่เหมาะสมของเอนไซม์นี้ถูกที่ 55 ° C และแสดงให้เห็นรูปลักษณะหลังเต่า bi pH ด้วยสองค่า pH optima (ที่ pH 2.5 และ 5.5) เอนไซม์พบว่าความต้านทานธาตุเพพซินมากกับการเก็บข้อมูลกิจกรรม 60% หลังจากบ่มด้วยธาตุเพพซินในอัตราส่วน 1: 1000 เอนไซม์คือ thermostable รักษา 69 และ 37% กิจกรรมที่ 90 และ 100 ° C 10 นาทีตามลำดับ และยังคงใช้งานอยู่ที่อุณหภูมินี้จนถึง 1 h. Deglycosylation ศึกษาแสดงให้เห็นคุณสมบัติทางความร้อนน้อยมากผลของลิงค์ N เร่งผิวใหม ข้อมูลตำแหน่งลำดับหลายเปิดเผยการ Asn ภัตที่ตำแหน่งที่ 345 ของโอสเตบิลนี้ซึ่งอาจทำให้คุณสมบัติของความร้อน โอสเตบิล thermostable นี้ควบคู่ไปกับความต้านทานของน้ำย่อยที่เห็นได้ชัดอาจจะยัง phytases พาณิชย์ปัจจุบัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแสดงออกของไฟเตสต่ออุณหภูมิสูงจากประเทศไนเจอร์ A. ก็ประสบความสำเร็จใน Kluyveromyces เซลล์ lactis GG799 การหลั่งที่มีประสิทธิภาพของเอนไซม์ recombinant (198 มล. U-1) ในน้ำหมักที่ 72 H บ่มที่ 22 ° C ที่ได้รับ เอนไซม์แสดงให้เห็นว่าเป็นกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของ 72 U MG-1) และได้รับการตรวจพบในระบบ SDS-PAGE เป็นโปรตีน glycosylated อย่างมากที่มีน้ำหนักโมเลกุล≥140 kDa อุณหภูมิที่เหมาะสมของเอนไซม์อยู่ที่ 55 องศาเซลเซียสและมันแสดงให้เห็นว่าสองโคกรายละเอียดพีเอชที่มีสอง Optima พีเอช (ที่ pH 2.5 และ 5.5) เอนไซม์เปปซินแสดงความต้านทานมากกับการเก็บรักษากิจกรรม 60% หลังจากการบ่มกับน้ำย่อยในอัตราส่วน 1: 1000 เอนไซม์ที่ทนความร้อนรักษากิจกรรม 69 และ 37% ที่ 90 และ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีตามลำดับและยังคงทำงานอยู่ที่อุณหภูมิเหล่านี้จนถึง 1 ชั่วโมง การศึกษาแสดงให้เห็น deglycosylation ผลเล็กน้อยของ glycans N-เชื่อมโยงเกี่ยวกับสมบัติทางความร้อน ลำดับการจัดเรียงข้อมูลหลายเปิดเผยอนุรักษ์ Asn ที่ตำแหน่ง 345 ของ phytase นี้ซึ่งอาจนำไปสู่​​สมบัติทางความร้อนของมัน นี้ phytase ที่ทนความร้อนควบคู่ไปกับการต้านทานที่เห็นได้ชัดน้ำย่อยของมันอาจจะเป็นทางเลือกที่ดีกว่าที่จะ phytases เชิงพาณิชย์ในปัจจุบัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แสดงการทำงานของเอนไซม์ไฟเตสในจาก A . niger สําเร็จใน kluyveromyces lactis gg799 เซลล์ ประสิทธิภาพของการใช้เอนไซม์ ( 198 คุณมล − 1 ) ในน้ำหมักที่เวลา 72 ชั่วโมง บ่มที่ 22 ° C ) เอนไซม์มีกิจกรรมจำเพาะของ 72 u มก. − 1 ) และถูกตรวจพบในเอนไซม์เป็นโปรตีนมากอื่นมีน้ำหนักโมเลกุล≥ 140 กิโลดาลตัน อุณหภูมิของเอนไซม์ที่ 55 ° C และมีลักษณะบิหนอกอ 2 อโปรไฟล์ Optima ( pH 2.5 และ 3.0 ) เอนไซม์เพ็บซินพบความต้านทานมากร้อยละ 60 กิจกรรมการเก็บรักษาหลังจากบ่มด้วยเปปซินในอัตราส่วน 000 . เอนไซม์ในการรักษาและ 37% กิจกรรมที่ 90 และ 100 องศา C นาน 10 นาที และยังคงใช้งานอยู่ที่อุณหภูมินี้ จนถึง 1 ชั่วโมง ผลการศึกษาพบ deglycosylation กระจอก n-linked glycans ต่อสมบัติทางความร้อน หลายตำแหน่งลำดับข้อมูลศึกษาขึ้นที่ตำแหน่ง 345 นี้ซึ่งอาจส่งผลให้ระดับของความร้อน คุณสมบัติ ในกลุ่มนี้คู่กับความต้านทานของโปรติเอสชัดเจนอาจเป็นทางเลือกที่ดีกว่าปัจจุบัน phytases เชิงพาณิชย์