2.4. pH measurement and microbial analysis
The pH was measured directly from the fermentation pot containing
shredded cabbage and juice by a pH meter (WTW Inolab
IDS Multi 9420). Three fermentation pots were opened at each
time point and each pot was measured three times.
For microbial analysis, five different media were applied for
measuring growth by enumeration of colony-forming units (cfu)
per g sauerkraut (drained weight). Total mesophilic, aerobic bacteria
were determined on plate count (PC) agar, total lactic acid bacteria
(LAB) on DeMan–Rogosa–Sharp (MRS) agar (De Man et al.,
1960), peroxide-producing LAB on MRS agar supplemented with
Prussian Blue (MRS-P) (Saito, Seki, Iida, Nakayama, & Yoshida,
2007), Enterobacteriaceae on violet red bile dextrose (VRBD) agar
(Mossel, Mengerink, & Scholts, 1962), and yeasts on yeast extract
glucose chloramphenicol (YGC) agar. For each sample, 10 g of
sauerkraut were filled into sterile stomacher bags and after mixing
with 90 mL sterile Ringer’s solution homogenised for 1 min in a
stomacher (Bagmixer 400; Interscience, St Nom, France) set at level
4. Appropriate decimal dilutions in 1=4 strength Ringer’s solution
were made and 0.1 mL of the dilutions were plated onto agar plates
in duplicates. After aerobic incubation at 30 C for 72 h (PC), 25 C
for 72 h (YGC), 37 C for 24 h (VRBD), and anaerobic incubation at
30 C for 72 h (MRS and MRS-PB), respectively, cfu were counted.
For 16S rDNA sequencing, genomic DNA was extracted from cell
material of purified single colonies with the aid of the ZR
Bacterial/Fungal DNA Mini Kit (ZymoResearch, Freiburg,
Germany) following the protocol of the supplier. Using primers
16Suni_27F and 16Suni_1492R (Lane, 1991), 16S rDNA was ampli-
fied by polymerase chain reaction (PCR) as follows: (1) 98 C for
3 min; (2) 98 C for 10 s; (3) 53 C for 30 s; (4) 72 C for 90 s; (5)
72 C for 10 min. After completion of the program, samples were
stored at 4 C. PCR products were purified by Nucleospin gel
and PCR clean-up (Macherey–Nagel, Düren, Germany) following
the protocol of the supplier. DNA sequences were determined at
Eurofins Genomics (Ebersberg, Germany) using the same primers
as for PCR. DNA sequences were subjected to BlastN analyses at
the NCBI web site for species identification (Altschul, Gish,
Miller, Myers, & Lipman, 1990).
2.5. Ana
2.4 การวัดค่า pH และวิเคราะห์จุลินทรีย์PH ที่วัดได้โดยตรงจากการที่ประกอบด้วยหมักหม้อกะหล่ำปลีหั่นและน้ำ ด้วยเครื่องวัด pH (WTW Inolabรหัสหลาย 9420) เปิดที่ละสามหมักหม้อเวลาจุดและแต่ละหม้อมีวัดสามครั้งสำหรับการวิเคราะห์จุลินทรีย์ สื่อต่าง ๆ ห้าถูกนำไปใช้ในวัดเจริญเติบโต โดยการแจงนับเป็นโคโลนี (cfu) หน่วยต่อ g sauerkraut (บรรจุ) รวม mesophilic แบคทีเรียแอโรบิกถูกกำหนดบนแผ่น agar จำนวน (พีซี) แบคทีเรียกรดแลกติกทั้งหมด(LAB) ใน agar DeMan – Rogosa – คม (นาง) (เดอแมน et al.,1960), เพอร์ออกไซด์ผลิตแล็บบน MRS agar เสริมด้วยPrussian Blue (MRS-P) (Saito กิ อิอิดะ นะกะยะมะ และ Yoshida2007), Enterobacteriaceae ในน้ำดีสีแดงอมม่วง agar ขึ้น (VRBD)(มอสเซล Mengerink, & Scholts, 1962), และแยก yeasts เชื้อยีสต์agar chloramphenicol (YGC) กลูโคส สำหรับแต่ละตัวอย่าง g 10 ของsauerkraut เต็มไป เป็นถุงใส่แผงประดับหน้าอก และ หลังผสมด้วยโซลูชั่น 90 mL กอซ Ringer ของ homogenised ใน 1 นาทีในการแผงประดับหน้าอก (Bagmixer 400 ตั้งระดับ interscience เซนต์นม ฝรั่งเศส)4. สม dilutions ทศนิยมใน 1 = 4 แรง Ringer โซลูชันได้ทำ และ 0.1 mL ของ dilutions ที่ถูกเคลือบลงบนแผ่น agarในรายการซ้ำ หลังจากบ่มแอโรบิกที่ 30 C สำหรับ h 72 (พีซี), 25 Cสำหรับ h 72 (YGC), 37 C 24 h (VRBD), และไม่ใช้บ่มที่30 C สำหรับ h 72 (นางและนาง PB), ตามลำดับ cfu นับได้สำหรับ 16S rDNA ลำดับ genomic DNA ที่สกัดจากเซลล์วัสดุของอาณานิคมเดียวบริสุทธิ์ ด้วยความช่วยเหลือของ ZRดีเอ็นเอของแบคทีเรีย/เชื้อรามินิ Kit (ZymoResearch, Freiburgเยอรมนี) ตามโพรโทคอลของผู้จำหน่าย ใช้ไพรเมอร์16Suni_27F และ 16Suni_1492R (Lane, 1991), 16S rDNA ถูก ampli -ฟอง โดยพอลิเมอเรสโซ่ (PCR) ปฏิกิริยาเป็นดังนี้: (1) 98 C สำหรับ3 นาที (2) C 98 10 s (3) C 53 สำหรับ 30 s (4) C 72 สำหรับ 90 s (5)ซี 72 สำหรับ 10 นาที งานของโปรแกรม ตัวอย่างดีเก็บที่ 4 ผลิตภัณฑ์ C. PCR ได้บริสุทธิ์ โดยเจ Nucleospinและ PCR ล้าง (Macherey – Nagel, Düren เยอรมนี) ต่อไปนี้โพรโทคอลของซัพพลายเออร์ มีกำหนดลำดับดีเอ็นเอที่Eurofins Genomics (Ebersberg เยอรมนี) โดยใช้ไพรเมอร์เหมือนกันเป็นสำหรับ PCR ลำดับดีเอ็นเอถูกต้องวิเคราะห์ BlastN ที่เว็บไซต์ NCBI สำหรับการระบุสายพันธุ์ (Altschul, Gishมิลเลอร์ ไมเออร์ และ Lipman, 1990)2.5. เอเอ็นเอ
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.4 . เครื่องวัด pH และ
การวิเคราะห์จุลินทรีย์จะถูกวัดโดยตรงจากการหมักหม้อที่มี
กะหล่ำหั่นฝอยและน้ำผลไม้ โดยเครื่องวัด ( wtw inolab
รหัสหลาย 9420 ) หมักหม้อสามถูกเปิดในแต่ละครั้งและแต่ละหม้อ
ชี้วัด 3 ครั้ง การวิเคราะห์จุลินทรีย์
5 สื่อที่แตกต่างกันที่ใช้ในการวัดการเติบโต โดยการสร้าง
( CFU ) หน่วยโคโลนีต่อกรัมกะหล่ำปลีดอง ( เนื้อน้ำหนัก ทั้งหมดมีแอโรบิค แบคทีเรีย
คำนวณนับรวมอาหารจาน ( PC ) , แบคทีเรียกรดแลคติก
( Lab ) –คมดีเมิน rogosa ) ( นาง ) ( de Man et al . ,
1960 ) , เปอร์ออกไซด์ผลิตห้องแล็บ MRS agar ที่เติม
ยาสีน้ำเงิน ( mrs-p ( เซกิ ) , ไซโต้ ไออิดะ นากายาม่าซัง &โยชิดะ
2007 ) , สีม่วงแดงเดกซ์โทรสผิดเพี้ยนในน้ำดี ( vrbd )
( มอ ซล วุ้น ,mengerink & scholts , 1962 ) , และยีสต์ยีสต์สกัด
กลูโคสคลอแรมเฟนิคอล ( ygc ) วุ้น สำหรับแต่ละตัวอย่าง 10 กรัม
กะหล่ำปลีเต็มลงในถุงแผงประดับหน้าอกที่เป็นหมันและหลังจากผสมกับ 90 ml
เป็นหมัน Ringer โซลูชั่น homogenised 1 นาทีใน
แผงประดับหน้าอก ( bagmixer 400 ; interscience เซนต์ชื่อ , ฝรั่งเศส ) ตั้งค่าระดับ
4 เจือจางในสารละลายที่เหมาะสมทศนิยม
1 = 4 แรงสั่นของเป็น 0.1 มิลลิลิตรของวิธีการคือ ลงบนแผ่นชุบวุ้น
ที่ซ้ำกัน หลังจากแอโรบิกบ่มที่ 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 72 ชั่วโมง ( PC ) , 25 C
72 H ( ygc ) 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ( vrbd ) และถังบ่มที่
30 องศาเซลเซียส นาน 72 ชั่วโมง ( นาง และ mrs-pb ) ตามลำดับ เซลล์ถูกนับ .
สำหรับ 16S rDNA sequencing จีโนมดีเอ็นเอจากเซลล์
วัสดุบริสุทธิ์ของอาณานิคมเดียวด้วยความช่วยเหลือของ ZR
เชื้อราแบคทีเรีย / ชุด mini DNA ( zymoresearch !
, , เยอรมนี ) ดังต่อไปนี้โปรโตคอลของซัพพลายเออร์ ใช้ไพรเมอร์และ
16suni_27f 16suni_1492r ( Lane , 1991 ) , 16S rDNA ถูก ampli -
fied โดย Polymerase chain reaction ( PCR ) ดังนี้ ( 1 ) 98 C
3 นาที ( 2 ) 98 C 10 s ; ( 3 ) 53 C 30 s ; ( 4 ) 72 C 90 s ; ( 5 )
0 C 10 นาทีหลังจากโปรแกรมเสร็จจำนวน
เก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกทำให้บริสุทธิ์ด้วย nucleospin เจล
และ PCR ทำความสะอาด ( macherey –นาเกล , D üเรน , เยอรมนี ) ต่อไปนี้
โปรโตคอลของซัพพลายเออร์ ลำดับดีเอ็นเอวิเคราะห์ที่
eurofins จีโนมิกส์ ( ebersberg , เยอรมนี ) โดยใช้ไพรเมอร์เหมือนกัน
สำหรับ PCR ลำดับดีเอ็นเอจะถูกวิเคราะห์ใน blastn
เว็บไซต์ ncbi สำหรับการระบุชนิด ( แอลเชิลกิช
, , มิลเลอร์ , ไมเออร์ , & Lipman 1990 ) .
2.5 อนา
การแปล กรุณารอสักครู่..
