DEPLETION OF T CELLS FROM ANTIGEN-P

DEPLETION OF T CELLS FROM ANTIGEN-PRESENTING/STIMULATOR CELL SUSPENSIONS Although normal unfractionated spleen cell populations can be used as a source of accessory cells, in certain types of experiments it may be preferable to use spleen cell populations from which the T cells have been removed. This procedure ensures that none of the observed proliferative responses of the responder population result from T cell factors derived from the accessory cell population. For example, even T cells whose cell division has been blocked (see Support Protocol 2) can produce cytokines. In the following steps, T cell–depleted spleen cell suspensions are prepared using a lytic monoclonal antibody to the T cell antigen, Thy-1. Because almost all the antigen presentation or stimulator cell activity in spleen resides in the non–T cell fraction, this procedure also leads to enrichment of functional antigen-presenting cell function. Further enrichment of antigen-presenting cells (APC) by flotation of the T cell-depleted spleen cells on Percoll gradients is also described. Other procedures leading to enrichment of APC are described elsewhere; the method described in UNIT 3.7 does not deplete T cells and therefore is not recommended here; the method described in UNIT 3.15 leads to higher levels of enrichment that are not required in the protocols presented here.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การลดลงของของ T เซลล์จากตรวจหานำเสนอ/เครื่องกระตุ้นเซลล์บริการแม้ว่าประชากรเซลล์ม้าม unfractionated ปกติสามารถใช้เป็นแหล่งของเซลล์อุปกรณ์ ในบางชนิดการทดลองมันอาจจะดีกว่าการใช้ประชากรเซลล์ม้ามซึ่งเซลล์ T หายไป ขั้นตอนนี้ให้แน่ใจว่า ไม่มีการสังเกต proliferative ต้นผลประชากรผู้ตอบสนองจากปัจจัย T เซลล์มาจากประชากรเซลล์อุปกรณ์ แม้เซลล์ T เซลล์ส่วนที่ถูตัว (ดูสนับสนุนโพรโทคอล 2) สามารถผลิต cytokines ในขั้นตอนต่อไปนี้ ม้ามพร่อง – T เซลล์เซลล์บริการเป็นอาหารโดยมีแอนติบอดี monoclonal lytic เพื่อตรวจหาเซลล์ T, Thy-1 เนื่องจากเกือบทั้งหมดตรวจหางานนำเสนอหรือเครื่องกระตุ้นเซลล์กิจกรรมในม้ามอยู่ในเศษส่วนไม่ – T เซลล์ กระบวนการนี้ยังนำไปสู่ของฟังก์ชั่นของเซลล์ที่ตรวจหาการนำเสนองาน เพิ่มเติมของนำเสนอการตรวจหาเซลล์ (APC) โดย flotation เซลล์ม้ามพร่อง T เซลล์บนไล่ระดับสี Percoll ยังได้อธิบายไว้ อธิบายขั้นตอนอื่น ๆ นำไปของเอพีซีอื่น วิธีการอธิบายไว้ในหน่วย 3.7 ทำ T เซลล์ และดังนั้นจึง ไม่แนะนำที่นี่ วิธีการอธิบายไว้ใน 3.15 หน่วยนำไปสู่ระดับสูงของบ่อที่ไม่จำเป็นต้องใช้ในโปรโตคอลที่นำเสนอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พร่องของ T เซลล์จากแอนติเจนนำเสนอ / กระตุ้นเซลล์แขวนลอยแม้ว่าปกติประชากรเซลล์ม้าม unfractionated สามารถใช้เป็นแหล่งที่มาของเซลล์อุปกรณ์เสริมในบางประเภทของการทดลองมันอาจจะดีกว่าที่จะใช้ประชากรเซลล์ม้ามจากการที่ทีเซลล์ได้ถูกลบออก . ขั้นตอนนี้เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการตั้งข้อสังเกตการตอบสนองการเจริญของประชากรผลตอบกลับจากปัจจัยทีเซลล์ที่ได้มาจากประชากรที่มือถืออุปกรณ์เสริม ยกตัวอย่างเช่นแม้ทีเซลล์ที่มีการแบ่งเซลล์ถูกบล็อก (ดูที่การสนับสนุนพิธีสาร 2) สามารถผลิต cytokines ในขั้นตอนต่อไปเซลล์หมด T แขวนลอยเซลล์ม้ามนี้จัดทำขึ้นโดยใช้แอนติบอดี lytic กับแอนติเจนเซลล์ T, เจ้า-1 เพราะเกือบทั้งหมดนำเสนอแอนติเจนหรือกระตุ้นการทำงานของเซลล์ในม้ามอาศัยอยู่ในส่วนที่ไม่ใช่เซลล์ T, ขั้นตอนนี้ยังนำไปสู่​​การเพิ่มคุณค่าของแอนติเจนนำเสนอฟังก์ชั่นการทำงานของเซลล์ การตกแต่งเพิ่มเติมของเซลล์แอนติเจนนำเสนอ (APC) โดยลอยอยู่ในน้ำของเซลล์หมด T เซลล์ม้ามในการไล่ระดับสี Percoll ยังอธิบายไว้ วิธีการอื่น ๆ ที่นำไปสู่​​การเพิ่มคุณค่าของ APC จะมีคำอธิบายอื่น ๆ ; วิธีการอธิบายในหน่วย 3.7 ไม่ได้หมดสิ้นลงทีเซลล์และดังนั้นจึงไม่แนะนำที่นี่ วิธีการที่อธิบายไว้ในหน่วย 3.15 นำไปสู่​​ระดับที่สูงขึ้นของการตกแต่งที่ไม่จำเป็นในโปรโตคอลที่นำเสนอนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การกระตุ้นเซลล์ T จาก antigen-presenting / แขวนลอยเซลล์แม้ว่าปกติ unfractionated เซลล์ม้ามของประชากรสามารถใช้เป็นแหล่งเสริมเซลล์ ในบางประเภทของการทดลองมันอาจจะดีกว่าที่จะใช้ประชากรเซลล์ม้ามซึ่งเซลล์ทีได้ถูกลบออกขั้นตอนนี้เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีใครสังเกตการตอบสนองของผลตอบกลับ proliferative ประชากรจากทีเซลล์ ปัจจัยที่ได้มาจากประชากรมือถืออุปกรณ์เสริม ตัวอย่างเช่น แม้แต่ T เซลล์ที่มีการแบ่งเซลล์ได้ปิด ( ดูที่สนับสนุนโปรโตคอล 2 ) สามารถผลิตสาร . ในขั้นตอนต่อไปนี้ทีเซลล์และเซลล์ม้ามพร่อง ช่วงล่างพร้อมใช้เอนไซม์โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแอนติเจนเซลล์ T thy-1 . เพราะเกือบทุกการนำเสนอแอนติเจนหรือกิจกรรมที่กระตุ้นในเซลล์ม้ามอยู่ในโนน– T เซลล์ส่วนขั้นตอนนี้ยังนำไปสู่การหน้าที่ของเซลล์ antigen-presenting การทํางานเสริมเพิ่มเติม antigen-presenting เซลล์ ( APC ) โดยการลอยของทีเซลล์ซึ่งเซลล์ม้ามใน percoll ไล่สียังอธิบาย วิธีการอื่น ๆที่นำไปสู่การ APC จะอธิบายที่อื่น ; วิธีการที่อธิบายไว้ในหน่วย 3.7 ไม่ได้ทำให้หมดสิ้น T เซลล์และดังนั้นจึงไม่แนะนำที่นี่ วิธีการอธิบายไว้ในหน่วยที่ 315 ไปสู่ระดับที่สูงขึ้นของการเสริมที่ไม่ต้องใช้ในโพรโทคอลที่นำเสนอที่นี่