DNA cloning and protein engineering

DNA cloning and protein engineering are basic methodologies employed for various applications in all
life-science disciplines. Manipulations of DNA however, could be a lengthy process that slows down subsequent
experiments. To facilitate both DNA cloning and protein engineering, we present Transfer-PCR
(TPCR), a novel approach that integrates in a single tube, PCR amplification of the target DNA from an origin
vector and its subsequent integration into the destination vector. TPCR can be applied for incorporation
of DNA fragments into any desired position within a circular plasmid without the need for
purification of the intermediate PCR product and without the use of any commercial kit. Using several
examples, we demonstrate the applicability of the TPCR platform for both DNA cloning and for multiple-
site targeted mutagenesis. In both cases, we show that the TPCR reaction is most efficient within a
narrow range of primer concentrations. In mutagenesis, TPCR is primarily advantageous for generation
of combinatorial libraries of targeted mutants but could be also applied to generation of variants with
specific multiple mutations throughout the target gene. Adaptation of the TPCR platform should facilitate,
simplify and significantly reduce time and costs for diverse protein structure and functional studies.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การโคลนดีเอ็นเอและโปรตีนวิศวกรรมเป็นวิธีพื้นฐานที่ทำงานสำหรับโปรแกรมประยุกต์ต่าง ๆ ในสาขาวิชาวิทยาศาสตร์การ Manipulations ภาพของดีเอ็นเออย่างไรก็ตาม อาจจะใช้เวลานานที่ช้าลงตามมาการทดลอง เพื่ออำนวยความสะดวกทั้งการโคลนดีเอ็นเอและโปรตีนวิศวกรรม เสนอโอนย้าย PCR(TPCR), วิธีนวนิยายที่รวมในหลอดเดียว PCR ขยายเป้าหมายดีเอ็นเอจากแหล่งกำเนิดเวกเตอร์และการบูรณาการภายหลังเข้าสู่ปลายทางเวกเตอร์ TPCR ที่สามารถใช้สำหรับการจดทะเบียนของชิ้นส่วนดีเอ็นเอในตำแหน่งใด ๆ ต้องอยู่ภายใน plasmid เป็นวงกลมโดยไม่ต้องฟอกผลิตภัณฑ์ PCR กลาง และ ไม่ใช้ชุดเชิงพาณิชย์ใด ๆ ใช้หลายตัวอย่าง เราแสดงให้เห็นถึงความเกี่ยวข้องของของแพ TPCR การโคลนดีเอ็นเอทั้งสอง และ สำหรับหลายไซต์เป้าหมาย mutagenesis ในทั้งสองกรณี เราแสดงว่าปฏิกิริยา TPCR มีประสิทธิภาพสูงสุดในการจำกัดช่วงของความเข้มข้นของสีรองพื้น Mutagenesis, TPCR เป็นประโยชน์หลักสำหรับรุ่นของปัญหาไลบรารีของเป้าหมายของสายพันธุ์ แต่สามารถยังใช้กับรุ่นย่อยด้วยการกลายพันธุ์หลายตลอดทั้งยีนเป้าหมาย ปรับตัวของแพลตฟอร์ม TPCR ควรอำนวยความสะดวกทำให้ง่ายขึ้น และลดเวลาและค่าใช้จ่ายสำหรับโครงสร้างโปรตีนที่หลากหลายและทำการศึกษา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การโคลนดีเอ็นเอและวิศวกรรมโปรตีนมีวิธีการขั้นพื้นฐานที่ใช้ในการใช้งานต่างๆในทุก
สาขาวิชาชีวิตวิทยาศาสตร์ กิจวัตรของดีเอ็นเอ แต่อาจจะเป็นกระบวนการที่ยาวที่ช้าลงภายหลัง
การทดลอง เพื่ออำนวยความสะดวกทั้งการโคลนดีเอ็นเอและวิศวกรรมโปรตีนเรานำเสนอ Transfer-PCR
(TPCR) แนวทางใหม่ที่รวมในหลอดเดียวขยาย PCR ดีเอ็นเอเป้าหมายจากจุดกำเนิด
เวกเตอร์และบูรณาการต่อมาเป็นเวกเตอร์ปลายทาง TPCR สามารถนำมาใช้สำหรับการรวมตัวกัน
ของชิ้นส่วนดีเอ็นเอในตำแหน่งที่ต้องการใด ๆ ในพลาสมิดวงกลมโดยไม่ต้องใช้
การทำให้บริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์ PCR กลางและโดยไม่ต้องใช้ชุดการค้าใด ๆ ใช้หลาย
ตัวอย่างที่เราแสดงให้เห็นถึงการบังคับใช้ของแพลตฟอร์ม TPCR ทั้งโคลนดีเอ็นเอและการซ้อน
เว็บไซต์ที่กำหนดเป้าหมายการกลายพันธุ์ ในทั้งสองกรณีเราแสดงให้เห็นว่าปฏิกิริยา TPCR มีประสิทธิภาพที่สุดใน
ช่วงแคบ ๆ ของความเข้มข้นของสีรองพื้น ในการกลายพันธุ์, TPCR เป็นหลักประโยชน์สำหรับรุ่น
ของห้องสมุด combinatorial ของการกลายพันธุ์ที่กำหนดเป้าหมาย แต่ไม่สามารถนำมาใช้เพื่อการผลิตของสายพันธุ์ที่มี
การกลายพันธุ์เฉพาะตลอดหลายยีนเป้าหมาย การปรับตัวของแพลตฟอร์ม TPCR ควรอำนวยความสะดวก
ง่ายและอย่างมีนัยสำคัญช่วยลดเวลาและค่าใช้จ่ายสำหรับโครงสร้างโปรตีนที่หลากหลายและการศึกษาการทำงาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การโคลนดีเอ็นเอและโปรตีนวิศวกรรมขั้นพื้นฐานวิธีการที่ใช้สำหรับการใช้งานต่างๆใน
สาขาวิทยาศาสตร์ชีวภาพ การตกแต่งของดีเอ็นเอซึ่งอาจจะยาวช้าลงกระบวนการที่การทดลองภายหลัง

เพื่อความสะดวกทั้งดีเอ็นเอการโคลนและวิศวกรรมโปรตีน เราเสนอโอน PCR
( tpcr ) , แนวทางใหม่ที่บูรณาการในหลอดเดียวเทคนิคการสื่อสารเป้าหมายดีเอ็นเอจากเวกเตอร์กำเนิด
และบูรณาการที่ตามมาของมันเป็นปลายทางของเวกเตอร์ สามารถใช้สำหรับการ tpcr
ของชิ้นส่วนดีเอ็นเอเข้าสู่ตำแหน่งที่ต้องการใด ๆภายในวงกลมอยู่ โดยไม่ต้องทำให้บริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์ PCR
ขั้นโดยไม่ต้องใช้เครื่องมือเชิงพาณิชย์ใด ๆ การใช้ตัวอย่างหลาย
,เราแสดงให้เห็นถึงการประยุกต์ใช้ tpcr แพลตฟอร์มทั้งดีเอ็นเอการโคลนและหลาย -
ไซต์เป้าหมายของ . ในทั้งสองกรณี เราแสดงให้เห็นว่า tpcr ปฏิกิริยาคือมีประสิทธิภาพมากที่สุดภายใน
ช่วงแคบของ primer ความเข้มข้น ในการ tpcr เป็นหลักที่มีประโยชน์สำหรับการผลิต , การกำหนดเป้าหมายของห้องสมุด
กลายพันธุ์ แต่สามารถใช้เพื่อสร้างสายพันธุ์
การกลายพันธุ์เฉพาะหลายตลอดยีนเป้าหมาย การปรับตัวของ tpcr แพลตฟอร์มควรอํานวยความสะดวก ลดความยุ่งยากและลด
เวลาและค่าใช้จ่ายสำหรับโครงสร้างโปรตีนที่หลากหลายและศึกษาการทํางาน