Materials and methodsAnimals. The ‘

Materials and methods
Animals. The ‘‘positive’’ serum panel included samples
from fecal culture–positive cows originating from 53 infected
dairy herds. The ‘‘negative’’ serum panel included samples
from randomly selected cows from 41 clinically nonsuspect
herds in a herd certification program for which the
first whole-herd fecal culture was negative for Mptb. These
herds were followed further in the certification program, and
19 of the 41 herds were still negative after a total of 9 wholeherd
fecal cultures 4 years later.
Fecal sampling. Fecal samples were collected from the
rectum of each animal using disposable plastic rectal examination gloves without lubrication gel. After the fecal
sample was collected, the gloves were tied up and identified
with preprinted self-adhesive labels that showed the bar code
for each cow, as recorded in the Dutch Identification and
Registration system.15 Samples were kept at 4 C during
transport and were processed for isolation of Mptb within 24
hr after arrival at the laboratory. Pooling was performed by
mixing fecal samples from 5 animals ordered by age.11
Fecal culture procedure. Fecal samples were cultured using
a modified Jørgensen method.12 A fecal sample of approximately
2 g (range, 1.8–2.2 g) was decontaminated for
30 min with 8 ml of 4% NaOH and centrifuged (1,000 3
g), and after removal of the supernatant the remaining sediment
was exposed for 30 min to 5 ml of a mixture of oxalic
acidg (5 mg/ml) and malachite green (1 mg/ml). After another
centrifugation step (1,000 3 g), the sediment was resuspended
in 4 ml of a mixture of neomycinh (0.5 mg/ml)
and amphotericin Bg (50 mg/ml) and incubated overnight at
room temperature. The separation layer between the particulate
matter and the clear antibiotic solution was inoculated
onto modified Lo¨wenstein-Jensen agar slants. Four tubes
containing mycobacting were inoculated. The tubes were inspected
at 8, 12, 16, and 26 wk of incubation for evidence
of Mptb growth. A sample was considered to be culture positive
when 1 or more colonies were recorded as Mptb, confirmed
by polymerase chain reaction, in 1 or more culture
tubes

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการสัตว์ ตัวอย่างแผงรวมเซรั่ม ''ดี ''ติดเชื้อจากอุจจาระวัววัฒนธรรม – บวกที่เกิดจาก 53ฝูงโคนม ตัวอย่างแผงรวมเซรั่ม ''ลบ ''จากวัวที่สุ่มเลือกจาก 41 nonsuspect ทางการแพทย์ฝูงในฝูงรับรองการโปรแกรมซึ่งการวัฒนธรรมอุจจาระทั้งฝูงแรกถูกลบสำหรับการ Mptb เหล่านี้ตามฝูงต่อไปในโปรแกรมการรับรอง และ19 ของฝูง 41 ได้ยังคงติดลบหลังจากทั้งหมด 9 wholeherdวัฒนธรรมอุจจาระ 4 ปีต่อมาเก็บตัวอย่างอุจจาระ ตัวอย่างอุจจาระถูกรวบรวมจากการทวารหนักสัตว์แต่ละชนิดใช้แล้วทิ้งพลาสติกทวารหนักถุงมือโดยไม่ต้องเจลหล่อลื่น หลังจากการอุจจาระเก็บตัวอย่าง ถุงมือถูกผูกขึ้น และระบุมีกาวในตัวพิมพ์ ที่แสดงให้เห็นว่าบาร์โค้ดสำหรับแต่ละวัว ตามที่บันทึกไว้ในรหัสดัตช์ และลงทะเบียน system.15 ตัวอย่างถูกเก็บไว้ที่ C 4 ระหว่างการขนส่ง และประมวลผลสำหรับแยกของ Mptb ภายใน 24ชั่วโมงหลังจากมาถึงที่ห้องปฏิบัติการ ร่วมกันทำโดยผสมตัวอย่างอุจจาระจากสัตว์ 5 สั่งซื้อ โดย age.11กระบวนการวัฒนธรรมอุจจาระ ตัวอย่างอุจจาระถูกล้างโดยใช้แก้ไข Jørgensen method.12 A อย่างอุจจาระของประมาณ2 กรัม (ช่วง 1.8-2.2 g) คือ decontaminated สำหรับ30 นาทีกับ 8 ml 4% NaOH และเหวี่ยง 1,000 3g) และหลัง จากการกำจัดของ supernatant ตะกอนที่เหลือสัมผัสถูก 30 นาทีถึง 5 ml สารออกซาลิกacidg (5 mg/ml) และมาลาไคต์กรี (1 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) หลังจากที่อื่นขั้นตอนการหมุนเหวี่ยง (1,000 3 g), ตะกอนถูก resuspendedใน 4 ml ของส่วนผสมของ neomycinh (0.5 mg/ml)และ amphotericin Bg (50 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) และค้างคืนที่ได้รับการกกอุณหภูมิห้อง การแยกชั้นระหว่างอนุภาคเรื่องและการแก้ปัญหายาปฏิชีวนะชัดเจนถูก inoculatedลงแก้ไข Lo¨wenstein-เจนเซ่น วุ้นเอียง สี่หลอดประกอบด้วย mycobacting ได้ inoculated มีการตรวจสอบหลอดที่ 8, 12, 16 และ สัปดาห์ที่ 26 ของการกกไข่เพื่อหาหลักฐานMptb เจริญเติบโต ตัวอย่างที่ถือเป็นวัฒนธรรมในเชิงบวกเมื่ออาณานิคม 1 หรือเพิ่มเติมถูกบันทึกเป็น Mptb ยืนยันโดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส ในวัฒนธรรม 1 หรือมากกว่าหลอด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
เลี้ยงสัตว์ ว่า '' บวก '' แผงซีรั่มรวมตัวอย่าง
จากวัววัฒนธรรมบวกอุจจาระที่เกิดจากการติดเชื้อ 53
ฝูงโคนม ว่า '' เชิงลบ '' แผงซีรั่มรวมตัวอย่าง
จากวัวสุ่มเลือกจาก 41 nonsuspect คลินิก
ฝูงในโปรแกรมการรับรองของฝูงซึ่ง
เป็นครั้งแรกทั้งฝูงวัฒนธรรมอุจจาระเป็นลบสำหรับ Mptb เหล่า
ฝูงตามมาต่อไปในโปรแกรมการรับรองและ
19 จาก 41 ฝูงยังคงเป็นลบหลังจากจำนวน 9 wholeherd
วัฒนธรรมอุจจาระ 4 ปีต่อมา.
การสุ่มตัวอย่างอุจจาระ อุจจาระที่ถูกเก็บรวบรวมจาก
ทวารหนักของสัตว์แต่ละตัวโดยใช้ถุงมือพลาสติกทิ้งทางทวารหนักโดยไม่ต้องเจลหล่อลื่น หลังจากที่อุจจาระ
เก็บตัวอย่าง, ถุงมือถูกผูกขึ้นและมีการระบุ
ที่มีป้ายชื่อติดด้วยตนเอง preprinted แสดงให้เห็นว่าบาร์โค้ด
สำหรับแต่ละวัวที่บันทึกไว้ในการระบุดัตช์และ
ตัวอย่าง system.15 ลงทะเบียนถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสในระหว่าง
การขนส่งและการอยู่ ประมวลผลสำหรับการแยก Mptb ภายใน 24
HR หลังจากที่มาถึงที่ห้องปฏิบัติการ ร่วมกันดำเนินการโดย
การผสมอุจจาระจาก 5 สัตว์ได้รับคำสั่งจาก age.11
ขั้นตอนวัฒนธรรมอุจจาระ อุจจาระเพาะเลี้ยงโดยใช้
แก้ไขJørgensen method.12 ตัวอย่างอุจจาระประมาณ
2 กรัม (ช่วง 1.8-2.2 กรัม) ถูก decontaminated สำหรับ
30 นาทีกับ 8 มล. 4% NaOH และหมุนเหวี่ยง (1,000 3
กรัม) และหลังจากการกำจัดของ ใสตะกอนที่เหลือ
ได้สัมผัสเป็นเวลา 30 นาทีถึง 5 มล. ส่วนผสมของออกซาลิก
acidg (5 mg / ml) และสีเขียวมรกต (1 mg / ml) หลังจากนั้นอีก
ขั้นตอนการหมุนเหวี่ยง (1,000 3 กรัม) ตะกอนที่ถูก resuspended
ใน 4 มิลลิลิตรส่วนผสมของ neomycinh (0.5 mg / ml)
และ amphotericin Bg (50 mg / ml) และบ่มค้างคืนที่
อุณหภูมิห้อง ชั้นห่างระหว่างอนุภาค
สสารและวิธีการแก้ปัญหายาปฏิชีวนะที่ชัดเจนได้รับเชื้อ
เข้าสู่การปรับเปลี่ยน Lowenstein เซ่น slants วุ้น สี่หลอด
มี mycobacting ถูกเชื้อ หลอดถูกตรวจสอบ
ที่ 8, 12, 16, และ 26 สัปดาห์ของการบ่มหาหลักฐาน
ของการเจริญเติบโต Mptb ตัวอย่างถูกพิจารณาว่าเป็นวัฒนธรรมในเชิงบวก
เมื่อ 1 หรือมากกว่าอาณานิคมถูกบันทึกไว้เป็น Mptb ได้รับการยืนยัน
โดยวิธี Polymerase chain reaction ใน 1 หรือมากกว่าวัฒนธรรม
หลอด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการสัตว์ " " " "positive แผงรวมตัวอย่างซีรั่มจากอุจจาระ–วัฒนธรรมบวกวัวที่มาจาก 53 ที่ติดเชื้อผลิตภัณฑ์นมวัว . " " " "negative แผงรวมตัวอย่างซีรั่มจากการสุ่มเลือกจาก 41 ใน nonsuspect วัวฝูงวัวฝูงโปรแกรมการรับรองที่ทั้งฝูงแรกอุจจาระวัฒนธรรมเป็นลบสำหรับ mptb . เหล่านี้ฝูงถูกตาเพิ่มเติมในการรับรองหลักสูตรและ19 จาก 41 วัวยังลบหลังจากทั้งหมด 9 wholeherdนอกจากนี้วัฒนธรรม 4 ปีต่อมาอุจจาระคน ตัวอย่างจากทวารหนักทวารหนักของสัตว์แต่ละตัวใช้ผ้าอ้อมพลาสติกถุงมือสอบโดยไม่ต้องเจลหล่อลื่น หลังจากฟีการเก็บตัวอย่าง , ถุงมือถูกมัด และระบุด้วยฟอร์มที่แสดงบาร์โค้ดฉลากติดด้วยตนเองสำหรับวัวแต่ละตัวและเป็นบันทึกไว้ในดัตช์ตัวอย่างการลงทะเบียนไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส ในช่วง system.15การขนส่งและการประมวลผลสำหรับการแยก mptb ภายใน 24ชั่วโมงหลังจากที่มาถึงที่ห้องปฏิบัติการ การกระทำโดยผสมตัวอย่างอุจจาระจากสัตว์ 5 age.11 สั่งโดยกระบวนการวัฒนธรรมอุจจาระ . ตัวอย่างอุจจาระไปเพาะเชื้อโดยใช้โดยเจขึ้น rgensen method.12 เป็นอุจจาระตัวอย่างประมาณ2 กรัม ( ช่วง 1.8 - 2.2 g ) decontaminated สำหรับ30 นาทีกับ 8 ml 4 % NaOH และไฟฟ้า ( 1000 3กรัม ) และหลังจากการกำจัดของนำตะกอนที่เหลือถูกสำหรับ 30 นาที 5 ml ส่วนผสมของซาลิกacidg ( 5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) สีเขียวมรกต ( 1 mg / ml ) หลังจากที่อื่นขั้นตอนที่ 3 ( 1 , 000 3 G ) ตะกอนถูก resuspendedใน 4 มิลลิลิตร ผสม neomycinh ( 0.5 mg / ml )และ ระหว่าง BG ( 50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) และบ่มค้างคืนที่อุณหภูมิของห้อง การแยกชั้นระหว่างอนุภาคเรื่องการล้างเป็นเชื้อและ โซลูชั่นบนโล ตั้ง wenstein เจนเซ่นวุ้น slants แก้ไข สี่ท่อที่มี mycobacting ปลูกเชื้อ . ท่อที่ถูกตรวจสอบที่ 8 , 12 , 16 , และ 26 สัปดาห์พบหลักฐานการเจริญเติบโตของ mptb . ตัวอย่างก็ถือว่าเป็นวัฒนธรรมที่เป็นบวกตอนที่ 1 หรือมากกว่าอาณานิคมได้ถูกบันทึกไว้เป็น mptb ยืนยันโดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสใน 1 หรือมากกว่าวัฒนธรรมท่อ