ELISpot assays employ the sandwich

ELISpot assays employ the sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) technique. Either a monoclonal or polyclonal antibody specific for the chosen analyte is pre-coated onto a PVDF (polyvinylidene difluoride)-backed microplate. Appropriately stimulated cells are pipetted into the wells and the microplate is placed into a humidified 37 °C CO2 incubator for a specified period of time. During this incubation period, the immobilized antibody, in the immediate vicinity of the secreting cells, binds secreted analyte. After washing away any cells and unbound substances, a biotinylated polyclonal antibody specific for the chosen analyte is added to the wells. Following a wash to remove any unbound biotinylated antibody, alkaline-phosphatase conjugated to streptavidin is added. Unbound enzyme is subsequently removed by washing and a substrate solution (BCIP/NBT) is added. A blue-black colored precipitate forms and appears as spots at the sites of cytokine localization, with each individual spot representing an individual analyte-secreting cell. The spots can be counted with an automated ELISpot reader system or manually, using a stereomicroscope.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ELISpot assays ใช้เทคนิคแซนวิเอนไซม์ลิงค์ immunosorbent assay (ELISA) ทั้งแบบโมโน หรือโพลีแอนติแอนติบอดีเฉพาะสำหรับ analyte ในถูกเคลือบลงบน PVDF (polyvinylidene difluoride) -สนับสนุน microplate เหมาะสมกระตุ้นเซลล์เป็น pipetted ลงหลุม และ microplate จะวางอยู่ในตู้อบที่ณอุณหภูมิ 37 ° C CO2 สำหรับรอบระยะเวลาที่ระบุ ในช่วงเวลาบ่ม แอนติบอดีแบบตรึง บริเวณโดยรอบของเซลล์ secreting ผูก analyte หลั่ง หลังจากล้างห่างผูกสารและเซลล์ใด ๆ การ biotinylated โพลีแอนติแอนติบอดีเฉพาะสำหรับ analyte เลือกถูกเพิ่มลงหลุม มีเพิ่มอัลคาไลน์ฟอสฟาผันไป streptavidin ไปล้างเพื่อเอาแอนติบอดีใด ๆ ผูก biotinylated ต่อมาผูกเอนไซม์จะถูกเอาออก โดยการซักผ้า และเพิ่มการแก้ไขปัญหาพื้นผิว (BCIP/NBT) สีฟ้าสีดำเป็นสี precipitate ฟอร์ม และปรากฏเป็นจุดที่ไซต์ของ cytokine แปล ด้วยแต่ละจุดแต่ละที่มีเซลล์ analyte ซ่อนแต่ละแทน จุดสามารถนับ ELISpot อ่านระบบอัตโนมัติ หรือด้วยตน เอง โดยใช้วิธีการนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตรวจ ELISPOT จ้างแซนวิชเอนไซม์ที่เชื่อมโยงการทดสอบอิมมูโน (ELISA) เทคนิค ทั้งโมโนโคลนอลแอนติบอดีหรือโพลีที่เฉพาะเจาะจงสำหรับวิเคราะห์ได้รับการแต่งตั้งเป็น pre-เคลือบลงบน PVDF (Polyvinylidene difluoride) microplate -backed กระตุ้นเซลล์ที่เหมาะสมจะเข้ามาในหลุมปิเปตและ microplate จะถูกวางลงในความชื้น 37 ° C ศูนย์บ่มเพาะ CO2 สำหรับระยะเวลาที่กำหนด ในช่วงระยะเวลาการบ่มนี้แอนติบอดีตรึงในบริเวณใกล้เคียงของเซลล์หลั่งผูกวิเคราะห์หลั่ง หลังจากล้างเซลล์ใด ๆ และสารหลุดแอนติบอดีโพลี biotinylated ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับวิเคราะห์ได้รับการคัดเลือกจะถูกเพิ่มลงหลุม ต่อไปล้างเพื่อเอา​​แอนติบอดี biotinylated ใด ๆ หลุดด่าง phosphatase ผันที่จะมีการเพิ่มสเต เอนไซม์หลุดจะถูกลบออกภายหลังจากการซักผ้าและวิธีการแก้ปัญหาสารตั้งต้น (BCIP / NBT) จะมีการเพิ่ม รูปแบบตะกอนสีฟ้าสีดำและปรากฏเป็นจุดที่เว็บไซต์ของไซโตไคน์แปลด้วยแสงแต่ละจุดคิดเป็นเซลล์วิเคราะห์-หลั่งของแต่ละบุคคล จุดที่สามารถนับด้วยระบบอัตโนมัติอ่าน ELISPOT หรือด้วยตนเองโดยใช้สเตอริโอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อีไลสปอท ) จ้างแซนด์วิช enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA ) เทคนิค โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงอย่างใดอย่างหนึ่งหรือใช้สําหรับครูเลือกก่อนเคลือบบนแผ่นฟิล์ม PVDF ( ีนไดฟลูออไรด์ ) -- การสนับสนุนพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย . กระตุ้นเซลล์ให้เหมาะสม pipetted ในเวลส์ และพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยตั้งอยู่ใน 37 ° C CO2 Incubator humidified สำหรับรอบระยะเวลาที่ระบุ ในช่วงระยะเวลานี้ ตรึงแอนติบอดี ในบริเวณใกล้เคียงของ secreting เซลล์ ก็ถูกครู . หลังจากล้างออกใด ๆและสารจับกับเซลล์ , ไลใช้แอนติบอดีที่เฉพาะสำหรับครูที่เลือกจะถูกเพิ่มในเวลส์ ต่อไปนี้ล้างเพื่อลบใด ๆที่หลุดไลแอนติบอดี , อัลคาไลน์ ฟอสฟาเตสและเพื่อ streptavidin คือเพิ่ม เอนไซม์ คือ ภายหลังถูกล้างหลุด และสารละลายตั้งต้น ( bcip / NBT ) คือเพิ่ม สีฟ้าดำสีและรูปแบบ และปรากฏเป็นจุดที่เว็บไซต์ของไซโตไคน์จำกัด กับแต่ละจุดแทนบุคคลครู secreting เซลล์ จุดที่สามารถนับที่มีระบบอ่านอัตโนมัติอีไลสปอท หรือ ด้วยตนเอง โดยใช้ stereomicroscope .