For mRT-PCR assays using more than

For mRT-PCR assays using more than one primer set, there aremany factors affecting a multiplex RT-PCR efficiency (Henegariuet al., 1997; Shigemori et al., 2005). One problem frequently metis the unbalanced amplification of certain virus/viruses over oth-ers due to the presence of multiple targets in one reaction andprimers differing in their compatibilities to their targets, whichmay result in competition for enzymes and nucleotides (Wei et al.,2008). Previously, Menzel et al. (2002) described two multiplex RT-PCR assays for the detection of four apple viruses ACLSV, ASPV,ASGV and ApMV. They found that the simultaneous amplificationof ACLSV, ASPV and ApMV by using mixtures of equal amount ofprimer pairs specific for those three viruses resulted in strong dif-ferences in band intensities of the specific fragments on the agarosegel, and in some cases, single bands could not be observed. Inour study, strong amplification of the ASGV fragment of 500 bpwas obtained in all mRT-PCR assays. To balance the amplificationefficiency of three viruses, plasmids containing CP genes of thosethree viruses were used for the optimization of primer concentra-tions, which ensured similar band intensities resulted from almostequal amount of templates. Eventually, the relatively higher primerconcentrations (0.16–0.24 M) for ACLSV and ASPV were used forthe production of the similar intensities of the amplicons in thesame reaction. The lower concentration of agarose gel (

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับรถไฟ PCR assays มากกว่ารองพื้นหนึ่งชุด aremany มีการใช้ปัจจัยกระทบการ multiplex RT-PCR อย่างมีประสิทธิภาพ (Henegariuet al., 1997 Shigemori et al., 2005) ปัญหาหนึ่งมัก metis ขยายจำนวนของไวรัส/ไวรัสบางผ่านสกู๊ปอื่น ๆ เนื่องจากเป้าหมายหลายใน andprimers ปฏิกิริยาหนึ่งที่แตกต่างกันในการ compatibilities เพื่อเป้าหมายของพวกเขา whichmay ผลแข่งขันการเอนไซม์นิวคลีโอไทด์ (Wei et al., 2008) ก่อนหน้านี้ Menzel et al. (2002) อธิบาย assays สอง multiplex RT-PCR สำหรับตรวจไวรัสแอปเปิ้ลสี่ ACLSV, ASPV, ASGV และ ApMV พวกเขาพบว่า amplificationof พร้อมกัน ACLSV, ASPV และ ApMV โดยผสมยอดเท่า ofprimer คู่เฉพาะสำหรับไวรัสที่สามผลใน dif ferences แข็งแกร่งในวงการปลดปล่อยก๊าซของชิ้นส่วนเฉพาะบน agarosegel และในบางกรณี วงเดียวอาจไม่สามารถสังเกต Inour ศึกษา ขยายแข็งแกร่งของส่วน ASGV ของ bpwas 500 รับใน assays PCR รถไฟทั้งหมด ดุล amplificationefficiency ไวรัสสาม plasmids ประกอบด้วยยีน CP ของไวรัส thosethree ถูกใช้สำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพของรองพื้น concentra-tions ซึ่งมั่นใจคล้ายวงปลดปล่อยก๊าซที่เป็นผลมาจากจำนวน almostequal ต้นแบบ ในที่สุด primerconcentrations ค่อนข้างสูง (0.16 – 0.24 M) สำหรับ ACLSV และ ASPV ใช้สำหรับการผลิตของการปลดปล่อยก๊าซที่คล้ายกันของ amplicons ในปฏิกิริยาเดียวกัน ต่ำกว่าความเข้มข้นของ agarose เจล (< 1.5%) alsoreduces ความไวของการทดสอบรถไฟ PCR โดยการทำให้ความเข้ม ofband ขาดทุนของ amplicons เจ agarose ที่ concentrationof 2% ที่ใช้ในการศึกษาสามารถแยกชัดเจนของ threeamplicons ลดความไวในการ developmentof multiplex PCR assays เกิดขึ้นบางครั้ง detectionsensitivity และ specificity วิเคราะห์ RT-PCR multiplex เป็นขัดขวางขุดโดย diluting serially cDNA ที่สร้างจาก extractfrom อาร์เอ็นเอรวมตัวอย่างการติดเชื้อ และ โดย diluting serially plasmids containingCP ยีนของไวรัสสามก็เทียบได้กับที่ของแต่ละ PCRin uRT ศึกษานี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับการตรวจ MRT-PCR ใช้ชุดไพรเมอร์มากกว่าหนึ่งปัจจัยที่มีผลต่อ aremany ประสิทธิภาพ multiplex RT-PCR (Henegariuet อัล, 1997;.. Shigemori et al, 2005) ปัญหาหนึ่งที่พบบ่อย Metis ขยายไม่สมดุลของเชื้อไวรัสบาง / ไวรัสมากกว่า OTH-ERS เนื่องจากการมีเป้าหมายหลายใน andprimers ปฏิกิริยาหนึ่งที่แตกต่างกันในความสามารถของพวกเขาเพื่อเป้าหมายของพวกเขา whichmay ส่งผลให้เกิดการแข่งขันสำหรับเอนไซม์และนิวคลีโอ (Wei et al., 2008 ) ก่อนหน้านี้ Menzel et al, (2002) อธิบายไว้สองชุดตรวจ multiplex RT-PCR ในการตรวจหาไวรัสในสี่ของแอปเปิ้ล ACLSV, ASPV, ASGV และ ApMV พวกเขาพบว่าการพร้อมกัน amplificationof ACLSV, ASPV และ ApMV โดยใช้ผสมในปริมาณเท่ากัน ofprimer คู่ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับทั้งสามไวรัสส่งผลให้ ferences แตกแข็งแกร่งในความเข้มของกลุ่มชิ้นส่วนที่เฉพาะเจาะจงเกี่ยวกับ agarosegel และในบางกรณีวงดนตรีที่เดียวไม่ได้ จะสังเกตเห็น inour การศึกษาที่แข็งแกร่งของการขยายส่วน ASGV 500 bpwas ได้ในทุกการตรวจ MRT-PCR เพื่อความสมดุล amplificationefficiency สามไวรัส, พลาสมิดที่มียีนของไวรัส CP thosethree ถูกนำมาใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพของไพรเมอร์เข้มข้น-tions ซึ่งมั่นใจความเข้มวงดนตรีที่คล้ายกันเป็นผลมาจากจำนวน almostequal ของแม่แบบ ในที่สุด primerconcentrations ค่อนข้างสูง (0.16-0.24? M) สำหรับ ACLSV ASPV และถูกนำมาใช้วงการผลิตของความเข้มที่คล้ายกันของ amplicons ในปฏิกิริยา thesame ความเข้มข้นที่ต่ำกว่าของเจล agarose (<1.5%) alsoreduces ความไวของการทดสอบ MRT-PCR โดยก่อให้เกิดการสูญเสีย ofband ความเข้มของ amplicons เจล agarose ที่ concentrationof 2% ใช้ในการศึกษาที่ได้รับอนุญาตการแยกชัดเจนของ threeamplicons แม้ว่าการลดลงของความไวในการตรวจ PCR multiplex developmentof จะเกิดขึ้นเป็นครั้งคราวที่ detectionsensitivity และความจำเพาะของหลายทดสอบ RT-PCR เป็นอุปสรรค-ขุดโดยเจือจางลำดับยีนที่สร้างขึ้นจาก extractfrom RNA รวมตัวอย่างเชื้อและเจือจางลำดับพลาสมิดยีน containingCP สาม ไวรัสได้เทียบเท่ากับที่ของแต่ละ URT-PCRin การศึกษาครั้งนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับรถไฟใต้ดิน PCR โดยใช้ไพรเมอร์หรือมากกว่าหนึ่งชุด มีหลายปัจจัยที่มีผลต่อประสิทธิภาพ multiplex RT-PCR ( henegariuet al . , 1997 ; ชิเงโมริ et al . , 2005 ) ปัญหาหนึ่งที่มักมีการขาดดุลเพิ่มปริมาณไวรัส ไวรัสบางกว่า oth ERS เนื่องจากการแสดงตนของเป้าหมายหลายในปฏิกิริยาหนึ่ง andprimers ที่มี compatibilities ของพวกเขาไปยังเป้าหมายของพวกเขาwhichmay ผลการแข่งขันสำหรับเอนไซม์และนิวคลีโอไทด์ ( Wei et al . , 2008 ) ก่อนหน้านี้ , Menzel et al . ( 2002 ) อธิบายวิธี multiplex RT-PCR สองสำหรับการตรวจหาไวรัส aclsv aspv สี่แอปเปิ้ล , และ , asgv apmv . พวกเขาพบว่า aclsv amplificationof พร้อมกันได้ ,และ aspv apmv โดยใช้ส่วนผสมของปริมาณ ofprimer เท่ากับคู่ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับสามไวรัสทำให้แข็งแรง ดิฟ ferences วงเข้มของชิ้นส่วนที่เฉพาะเจาะจงในกาโร จล และในบางกรณี วงเดียว ไม่สามารถสังเกตได้ inour การศึกษาการสื่อสารที่แข็งแกร่งของ asgv ชิ้น 500 bpwas สามารถตรวจได้ในรถไฟใต้ดินเพื่อความสมดุล amplificationefficiency สามไวรัส , พลาสมิดที่มียีนของไวรัส thosethree CP ที่ใช้สำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพของรองพื้นครุ่นคิด tions ซึ่งมั่นใจเข้มวงดนตรีที่คล้ายกันเป็นผลมาจากปริมาณ almostequal ของแม่แบบ ในที่สุด primerconcentrations ค่อนข้างสูง ( 0.16 - 024  ) และ aclsv aspv ใช้สำหรับการผลิตของความเข้มที่คล้ายกันของ amplicons ในปฏิกิริยาเดียวกัน . การลดความเข้มข้นของเจล ( น้อยกว่า 1.5 % ) alsoreduces ไวของ MRT PCR assay โดยก่อให้เกิดการสูญเสีย ofband ความเข้มของ amplicons . มีเจลที่ความเข้มข้น 2 % ที่ใช้ในการศึกษาที่ได้รับอนุญาตให้แยกชัดเจนของ threeamplicons .แม้ว่าการลดความไวในการ multiplex PCR สามารถจะเกิดขึ้นบางครั้ง detectionsensitivity multiplex RT-PCR และความจำเพาะ ( เช่นยับยั้ง โดยจะขุดเป็นยีนที่สร้างขึ้นจากทั้งหมด extractfrom ติดเชื้อและเจือจางตัวอย่าง RNA โดยเป็นพลาส containingcp ยีนสามไวรัสที่เทียบเท่ากับที่ของแต่ละ pcrin 73 การศึกษานี้