2.3. Nucleic acids extractionDNA ex

2.3. Nucleic acids extraction
DNA extraction from 1 mL of pure cultures was carried out on
cell pellets harvested by centrifugation (8000  g for 10 min), and
washed in an equal volume of TE buffer (10 mM Tris/HCl, 1 mM
EDTA, pH 8.0). The cell pellets were resuspended in 500 mL TE buffer
containing the lytic enzymes derived from Rhizoctonia solani (1 mg/
mL), lysozyme (10 mg/mL) and lyticase from Arthrobacter luteus
(1 mg/mL) (all enzymes from SigmaeAldrich, Milan, Italy) and
incubated at 37 C for 2 h. After 30 min incubation at 37 C with
50 mg/mL ribonuclease A (SigmaeAldrich) and 5 g/L sodium
dodecyl sulphate (SDS), and a second incubation at 55 C for 30 min
with 10 mg/mL proteinase K (SigmaeAldrich), the DNAwas purified
by chloroform extraction and precipitated with two volumes of
ethanol plus 20 mg/mL glycogen (MBI Fermentas, Milan, Italy).
After centrifugation (maximum speed for 10 min at 4 C) the DNA
pellet was dried and resuspended in 50 mL Tris/HCl 10 mM, pH 8.0.
DNA extraction from the food supplement, fructose syrup and
herb water suspensions with the same final concentration as the
marketed product was carried out on 1 mL of fluid decanted to
sediment the gross material. The samples were centrifuged at
8000  g for 5 min, the pellets were resuspended in 0.1 M NaOH
and kept at room temperature for 15 min. Seventy mL of lysate were
loaded onto Micro Bio-Spin 30 desalting columns (Bio-rad Laboratories
Srl., Milan, Italy) and centrifuged as recommended. 1 mL of
the nucleic acids sample was used in the PCR reactions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การสกัดกรดนิวคลีอิกสกัดดีเอ็นเอจาก 1 mL วัฒนธรรมบริสุทธิ์ถูกดำเนินการในเซลล์ขี้เก็บเกี่ยว โดย centrifugation (8000 g สำหรับ 10 นาที), และเครื่องซักผ้าในปริมาณเท่ากับบัฟเฟอร์ TE (10 mM ตรี/HCl, 1 mMEDTA, pH 8.0) ขี้เซลล์ถูก resuspended ในบัฟเฟอร์ TE 500 mLประกอบด้วยเอนไซม์ lytic มา Rhizoctonia solani (1 มิลลิกรัม /มล.), lysozyme (10 mg/mL) และ lyticase จาก Arthrobacter luteus(1 mg/mL) (ทั้งหมดเอนไซม์จาก SigmaeAldrich มิลาน อิตาลี) และincubated ที่ 37 C สำหรับ 2 h หลังจาก 30 นาทีบ่มที่ 37 C ด้วยribonuclease 50 mg/mL (SigmaeAldrich) และโซเดียม 5 g/Ldodecyl ซัลเฟต (SDS), และฟักตัวที่สองที่ 55 C สำหรับ 30 นาทีกับ 10 mg/mL proteinase K (SigmaeAldrich), DNAwas ที่บริสุทธิ์โดยสกัดคลอโรฟอร์ม และตกตะกอนกับไดรฟ์ข้อมูลทั้งสองเอทานอลและไกลโคเจน 20 mg/mL (MBI Fermentas มิลาน อิตาลี)หลังจาก centrifugation (ความเร็วสูงสุดใน 10 นาทีที่ 4 C) ดีเอ็นเอเม็ดแห้ง และ resuspended 50 มล ตรี/HCl 10 มม. pH 8.0สกัดดีเอ็นเอจากผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร น้ำเชื่อมฟรักโทส และบริการน้ำสมุนไพร มีความเข้มข้นสุดท้ายเดียวกันเป็นการตลาดผลิตภัณฑ์ที่ดำเนินการใน 1 มล.ของเหลว decanted เพื่อตะกอนวัสดุรวม ตัวอย่างถูก centrifuged ที่8000 g สำหรับ 5 นาที ขี้ถูก resuspended ใน 0.1 M NaOHและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 15 นาทีมล.เซเว่นตี้ของ lysateโหลดลงไมโครชีวภาพหมุน 30 desalting คอลัมน์ (Bio rad ห้องปฏิบัติSrl. มิลาน อิตาลี) และ centrifuged แนะนำ 1 mL ของตัวอย่างกรดนิวคลีอิกถูกใช้ในปฏิกิริยา PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 กรดนิวคลีอิกสกัดการสกัดดีเอ็นเอจาก 1 มิลลิลิตรของวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับเม็ดเซลล์เก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยง(8000? กรัมเป็นเวลา 10 นาที) และล้างในปริมาณที่เท่ากันของบัฟเฟอร์TE (10 มิลลิทริส / HCl 1 มิลลิEDTA, พีเอช 8.0) เซลล์เม็ดถูก resuspended ใน 500 บัฟเฟอร์มิลลิลิตร TE มีเอนไซม์ lytic มาจาก Rhizoctonia solani (1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร), ไลโซไซม์ (10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) และ lyticase จาก Arthrobacter luteus (1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) (เอนไซม์จาก SigmaeAldrich, มิลาน , อิตาลี) และบ่มที่อุณหภูมิ37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง หลังจาก 30 นาทีบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสกับ50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ribonuclease A (SigmaeAldrich) และ 5 กรัม / ลิตรโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS) และการบ่มที่สองที่ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีกับ10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรโปร K (SigmaeAldrich ) DNAwas บริสุทธิ์สกัดคลอโรฟอร์มและตกตะกอนที่มีสองเล่มของเอทานอลรวมทั้ง20 mg / ไกลโคเจนมิลลิลิตร (MBI Fermentas, มิลาน, อิตาลี). หลังจากการหมุนเหวี่ยง (ความเร็วสูงสุดเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส) ดีเอ็นเอเม็ดแห้งและresuspended ใน 50 มลทริส / HCl 10 มิลลิพีเอช 8.0. การสกัดดีเอ็นเอจากผลิตภัณฑ์เสริมอาหาร, น้ำเชื่อมฟรุกโตสและสารแขวนลอยน้ำสมุนไพรที่มีความเข้มข้นสุดท้ายเช่นเดียวกับสินค้าที่วางตลาดได้ดำเนินการในวันที่1 มิลลิลิตรของของเหลว decanted เพื่อตะกอนวัสดุขั้นต้น กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่8000? กรัมเป็นเวลา 5 นาทีเม็ดที่ถูก resuspended ใน 0.1 M NaOH และเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที เจ็ดสิบมล lysate ถูกโหลดไปยังไมโครไบโอสปิน30 คอลัมน์ desalting (Bio-ล้อห้องปฏิบัติการSrl., มิลาน, อิตาลี) และปั่นตามคำแนะนำ 1 มิลลิลิตรตัวอย่างกรดนิวคลีอิกที่ใช้ในปฏิกิริยาPCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การสกัดกรดนิวคลีอิก
1 มิลลิลิตรการสกัดดีเอ็นเอจากเชื้อบริสุทธิ์ถูกหามออก
เซลล์เม็ดเก็บเกี่ยวโดยการเหวี่ยงแยก ( 8000  กรัมต่อ 10 นาที ) , และ
ล้างในขนาดเท่ากัน TE บัฟเฟอร์ ( 10 มม. นอกจากนี้ / HCl 1 mm
EDTA pH 8.0 ) เซลล์ในอัตรา resuspended 500 มิลลิลิตร TE บัฟเฟอร์
ที่มีเอนไซม์ไลติคได้มาจากเชื้อรา (
1 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตรไลโซไซม์ ( 10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) และ lyticase จากยา luteus
( 1 mg / ml ) ( เอนไซม์จาก sigmaealdrich , มิลาน , อิตาลี ) และ
บ่มที่ 37  C เป็นเวลา 2 ชั่วโมง หลังจาก 30 นาทีบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส 
50 มก. / มล. ไรโบนิวคลีเ ( sigmaealdrich ) และ 5 กรัมต่อลิตรโซเดียม
โดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) และบ่มที่ 55  ที่สองเป็นเวลา 30 นาที
10 mg / ml โปร K ( sigmaealdrich ) ,
dnawas บริสุทธิ์โดยการสกัดคลอโรฟอร์มและตกตะกอนกับสองเล่ม
เอทานอล พลัส 20 มก. / มล. และไกลโคเจน ( 2 fermentas , มิลาน , อิตาลี )
หลังการปั่นเหวี่ยง ( ความเร็วสูงสุด 10 นาทีที่ 4  C ) เม็ดดีเอ็นเอ
แห้ง resuspended 50 มิลลิลิตร และในบริษัท / HCl 10 มม. , pH 8.0
การสกัดดีเอ็นเอจาก เสริมอาหารฟรุกโตสน้ำเชื่อม
สมุนไพรน้ำแขวนลอยด้วยเหมือนกันสุดท้ายของ
วางตลาดผลิตภัณฑ์ออกเป็น 1 มล. ของของเหลวริน

ตะกอนวัสดุรวม จำนวนระดับที่
8000  กรัมเป็นเวลา 5 นาที , อัตรา 0.1 M NaOH resuspended
และเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที lysate เจ็ดสิบมิลลิลิตร )
โหลดไปยังไมโครไบโอ ปั่น 30 desalting คอลัมน์ ( ไบโอ ราดห้องปฏิบัติการ
Srl , มิลาน , อิตาลี ) และระดับที่แนะนำ
1 มิลลิลิตรกรดนิวคลีอิกตัวอย่างที่ใช้ในการตรวจปฏิกิริยา