The shrimp shells were washed under

The shrimp shells were washed under running warm tap water to

remove soluble organics, adherent proteins and other impurities. The

shells were then collected and boiled in water for 1 h to remove the

tissue, followed by drying in an oven (Prolabo, model Volca MC18,

French) at 160 C for 2 h to make themmore brittle and to break down

the crystalline structure of chitin (Mukherjee, 2002). At the end, the

dried shells were ground into a fine powder using a standard grinder

(Model KU-2, PredomMesko, SkarzyskoKam., Poland).

2.2.1. Demineralization

Calcium carbonate constitutes the main inorganic component of

the shells. To remove the calcium carbonate, only dilute hydro-
chloric acid was used to prevent hydrolysis of chitin (No et al.,

1995). The hydrochloric acid concentrations ranged from 0.25 to

2 M and the reaction time was varied from 10 to 120 min. The ratio

of dried shells to acid solution used during the extraction of chitin

ranged from 1/10 to 1/30 (w/v). The experiments were carried out

at room temperature under constant stirring of 150 rpm. The

decalcified shells were collected on a 250 mm sieve, washed to

neutrality with tap water, rinsed with deionised water, and then

oven-dried at 80 C overnight. The rate of demineralization was

evaluated by determining ash contents in the solid.

2.2.2. Deproteinization

Similar experimental conditions were applied for the deminer-
alization of dried shells. The sodium hydroxide concentration was

varied from 0.5 to 5 M, the reaction time ranged from 10 to 400 min

and the temperature was varied from 20 to 100 C. At the end of this

process the material was filtrated, washed and dried, as previously

described in the demineralization process. In order to evaluate the

extent of deproteinization, the protein concentration in the

supernatant was determined according to Biuret’s method (Fine,

1935); It remains the most widely used method for protein

determination.

50 M.S. Benhabiles et al. / Food Hydrocolloids 29 (2012) 48e56

chitosan is hydrolyzed by 50 ml HCl 6.27 N at 56 C during 3 h

(Chang, Lee, & Fu, 2000).

2.5. Antibacterial tests

Minimum inhibitory concentrations are important to confirm

resistance of microorganisms to an antimicrobial agent and also to

monitor the activity of new antimicrobial agents. The minimal

inhibitory concentration (MIC) is generally regarded as the most

basic laboratory measurement of the activity of an antimicrobial

agent against an organism. Antibacterial activities of chitin, chito-
san, N-acetyl chito-oligosaccharides (NAc-COS) and chito-
oligosaccharides (COS) were examined as the inhibitory effects

against the growth of four Gram-positive bacteria: Staphylococcus

aureus ATCC 25923, S. aureus ATCC 43300, Bacillus subtilis and

Bacillus cereus and seven Gram-negative bacteria: Escherichia coli

ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Salmonella

typhimurium, Vibrio cholerae, Shigella dysenteriae, Prevotella mela-
ninogenica and Bacteroides fragilis. All bacteria were supplied by

Algeria Pasteur Institute. 0.1 g of sterile chitin, chitosan, N-acetyl

chito-oligosaccharides (NAc-COS) or chito-oligosaccharides (COS)

was added in 100 ml of cultured bacteria suspension in a flask and

incubated with shaking at 37 C. The inhibitory effect was esti-
mated periodically by measuring turbidity of the cultured medium

at 640 nm using a spectrophotometer UVeVisible mini 1240 SHI-
MADZU. The minimum inhibitory concentration (MIC) was defined

as the lowest concentration of chitin, chitosan, NAc-COS or COS

required to completely inhibit bacterial growth after incubation at

37 C for 72 h (No, Park, Lee, & Meyers, 2002).

The anaerobic bacteria (P. melaninogenica and B. fragilis) were

cultured in anaerobic atmosphere (Jeon & Kim, 2000). For deter-
mination of the minimum inhibitory concentration (MIC) of chitin,

chitosan, N-acetyl chito-oligosaccharides (NAc-COS) and chito-
oligosaccharides (COS), solutions (1% (w/w) in 1% (w/w) acid) of

each substances were added to Muller Hinton agar (supplemented

with blood for anaerobic bacteria) for final chitin, chitosan, NAc-
COS or COS concentrations of 0.1%, 0.08%, 0.05%, 0.03%, 0.01%,

0.006% and 0.003% (w/v).

Plots were made of the optical density (OD) (i.e. Absorbance at

640 nm) versus the culture time for each of the four Gram-positive

bacteria and the seven Gram-negative bacteria tested by the

shaking flask method.

Inhibitory effects against growth due to antibacterial activities

of chitin, chitosan, N-acetyl chito-oligosaccharides (NAc-COS) and

chito-oligosaccharides (COS) would be indicated by a levelling off of

the slopes of the curves.

3. Results and discussion

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เปลือกกุ้งถูกล้างภายใต้เรียกใช้อุ่นน้ำประปาเพื่อเอาละลายอินทรีย์ นฤมลโปรตีน และสิ่งสกปรกอื่น ๆ ที่เชลล์ได้รวบรวม แล้วต้มในน้ำสำหรับ h 1 เพื่อเอาการเนื้อเยื่อ ตาม ด้วยการอบในเตาอบ (Prolabo รุ่น Volca MC18ฝรั่งเศส) ที่ 160 C สำหรับ 2 h เพื่อทำ themmore เปราะ และแบ่งโครงสร้างผลึกของไคทิน (Mukherjee, 2002) ที่สุด การเปลือกแห้งมีพื้นดินเป็นผงดีที่ใช้บดมาตรฐาน(รุ่น KU-2, PredomMesko, SkarzyskoKam. โปแลนด์)2.2.1 การ demineralizationแคลเซียมคาร์บอเนตถือเป็นองค์ประกอบอนินทรีย์หลักของเปลือกหอย การเอาแคลเซียมคาร์บอเนต เฉพาะ dilute ไฮโดร-กรดคลอริกถูกใช้เพื่อป้องกันไม่ให้ไฮโตรไลซ์ของไคทิน (No et al.,1995) การที่กรดไฮโดรคลอริกความเข้มข้นอยู่ในช่วงจาก 0.25 เพื่อ2 M และเวลาตอบสนองแตกต่างจาก 10 ไป 120 นาที อัตราส่วนเปลือกแห้งโซลูชันกรดใช้ในระหว่างการสกัดไคทินอยู่ในช่วง 1/10 ถึง 1/30 (w/v) ได้ดำเนินการทดลองที่อุณหภูมิห้องภายใต้คงกวนของ 150 รอบต่อนาที ที่หอย decalcified ถูกเก็บรวบรวมบนตะแกรงเป็น 250 มม. เครื่องซักผ้าเพื่อความเป็นกลาง มีน้ำประปา rinsed deionised น้ำ แล้วเตาอบแห้งที่ 80 C ค้างคืน มีอัตราการ demineralizationประเมิน โดยกำหนดเนื้อหาเถ้าในของแข็ง2.2.2. deproteinizationใช้เงื่อนไขการทดลองที่คล้ายกันสำหรับ deminer-alization เปลือกแห้ง มีความเข้มข้นของโซเดียมไฮดรอกไซด์แตกต่างจาก 0.5 ถึง 5 เมตร เวลาตอบสนองที่อยู่ในช่วงตั้งแต่ 10 ถึง 400 นาทีและอุณหภูมิแตกต่างกันจาก 20 ไปราว 100 ที่สุดนี้กระบวนการวัสดุ filtrated ล้าง และอบ แห้ง เป็นก่อนหน้านี้อธิบายไว้ในกระบวนการ demineralization การประเมินการขอบเขตของ deproteinization ความเข้มข้นของโปรตีนในการกำหนดตามวิธีการของ Biuret (ดี supernatant1935); มันยังคงเป็นวิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับโปรตีนกำหนดAl. et Benhabiles เด้นกวาน 50 / อาหาร Hydrocolloids 29 48e56 (2012)ไคโตซานเป็น hydrolyzed โดยมล. 50 N 6.27 HCl ที่ 56 C ระหว่าง 3 h(ช้าง Lee, & ฟู 2000)2.5 ทดสอบยาปฏิชีวนะความเข้มข้นต่ำสุดที่ลิปกลอสไขสำคัญเพื่อยืนยันต้านทานจุลินทรีย์ จะมีจุลินทรีย์ และยังไปตรวจสอบกิจกรรมของจุลินทรีย์ใหม่ น้อยที่สุดลิปกลอสไขความเข้มข้น (MIC) โดยทั่วไปถือเป็นที่สุดห้องปฏิบัติการพื้นฐานการวัดกิจกรรมของจุลินทรีย์ตัวแทนจากองค์กร ไคทิน ไร chito - กิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียสัน ไร chito N-acetyl-oligosaccharides (เอ็นเอซี-COS) และไร chito -oligosaccharides (COS) ถูกตรวจสอบเป็นผลลิปกลอสไขต่อการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย 4: Staphylococcusหมอเทศข้างลาย ATCC 25923 หมอเทศข้างลาย S. ATCC 43300, subtilis คัด และคัด cereus และแบคทีเรียแบคทีเรียแกรมลบเจ็ด: Escherichia coliATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 ซัลtyphimurium, cholerae ผล Shigella dysenteriae, Prevotella เมลา-ninogenica และ Bacteroides fragilis แบคทีเรียทั้งหมดถูกจัดทำโดยสาธารณรัฐประชาธิปไตยประชาชนแอลจีเรีย ติวด์ g-0.1 ของกอซ chitin ไคโตซาน N-acetylไร chito oligosaccharides (เอ็นเอซี-COS) หรือไร chito-oligosaccharides (COS)เพิ่มใน 100 ml ของระงับแบคทีเรียอ่างในความหนาว และincubated กับการสั่นที่ 37 เซลเซียส ลิปกลอสไขผลถูก esti-mated เป็นระยะ ๆ โดยการวัดความขุ่นของกลางอ่างที่ 640 nm โดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่าง UVeVisible 1240 มินิชิ -MADZU มีกำหนดความเข้มข้นลิปกลอสไขต่ำสุด (MIC)เป็นความเข้มข้นต่ำสุดของ chitin ไคโตซาน เอ็นเอซี-COS หรือ COSต้องยับยั้งแบคทีเรียเจริญเติบโตหลังจากบ่มที่สมบูรณ์C 37 สำหรับ 72 h (ไม่ สวน Lee, & Meyers, 2002)มีแบคทีเรียไม่ใช้ออกซิเจน (P. melaninogenica และ fragilis เกิด)อ่างในบรรยากาศที่ไม่ใช้ออกซิเจน (เจินและคิม 2000) สำหรับ deter-mination ขั้นต่ำลิปกลอสไขความเข้มข้น (MIC) ของไคทินไคโตซาน N-acetyl ไร chito oligosaccharides (เอ็นเอซี-COS) และไร chito -oligosaccharides (COS), โซลูชั่น (1% (w/w) ในกรด 1% (w/w))สารแต่ละถูกเพิ่มมูลเลอร์ Hinton agar (เสริมด้วยเลือดสำหรับแบคทีเรียไม่ใช้ออกซิเจน) สำหรับไคทินสุดท้าย ไคโตซาน เอ็นเอซี -COS หรือ COS ความเข้มข้น 0.1%, 0.08%, 0.05%, 0.03%, 0.01%0.006% และ 0.003% (w/v)ความหนาแน่นออปติคอล (OD) (เช่น Absorbance ที่ทำผืน640 nm) เทียบกับเวลาวัฒนธรรมแต่ละสี่แบคทีเรียแกรมบวกแบคทีเรียและแบคทีเรียแบคทีเรียแกรมลบเจ็ดทดสอบโดยการสั่นหนาววิธีลิปกลอสไขผลกระทบกับการเจริญเติบโตเนื่องจากกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของ N-acetyl ไร chito oligosaccharides ไคโตซาน ไคทิน (เอ็นเอซี-COS) และไร chito-oligosaccharides (COS) จะสามารถตามการงานปรับระดับปิดของลาดของเส้นโค้ง3. ผลลัพธ์ และสนทนา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เปลือกกุ้งถูกล้างภายใต้น้ำประปาที่อบอุ่นการทำงานที่จะเอาสารอินทรีย์ที่ละลายน้ำได้โปรตีนสานุศิษย์และสิ่งสกปรกอื่น ๆ เปลือกหอยที่ถูกเก็บรวบรวมแล้วนำมาต้มในน้ำเป็นเวลา 1 ชั่วโมงเพื่อเอาเนื้อเยื่อตามด้วยการอบแห้งในเตาอบ(Prolabo รุ่น Volca MC18, ฝรั่งเศส) ที่ 160 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงเพื่อให้ themmore เปราะและจะทำลายลงโครงสร้างผลึกของไคติน (เคอ, 2002) ในตอนท้ายของเปลือกแห้งมาบดเป็นผงละเอียดใช้เครื่องบดมาตรฐาน(รุ่น KU-2 PredomMesko, SkarzyskoKam. โปแลนด์). 2.2.1 demineralization แคลเซียมคาร์บอเนตถือเป็นองค์ประกอบหลักของอนินทรีเปลือกหอย ในการลบแคลเซียมคาร์บอเนตเพียงเจือจาง hydro- กรดคลอรีนถูกใช้ในการป้องกันไม่ให้เกิดการย่อยสลายของสารไคติน (ไม่มี et al., 1995) ความเข้มข้นของกรดไฮโดรคลออยู่ในช่วง 0.25 ที่จะจาก2 เมตรและเวลาการเกิดปฏิกิริยาที่แตกต่างกันได้ 10-120 นาที อัตราส่วนของเปลือกหอยแห้งสารละลายกรดที่ใช้ในระหว่างการสกัดไคตินตั้งแต่1/10 ไป 1/30 (w / v) การทดลองดำเนินการที่อุณหภูมิห้องภายใต้การกวนคงที่ 150 รอบต่อนาที เปลือกหอยที่กำจัดเถ้าถูกรวบรวมไว้ในตะแกรง 250 มมล้างเพื่อความเป็นกลางกับน้ำประปาล้างด้วยน้ำdeionised แล้วอบแห้งที่80 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน อัตรา demineralization ที่ได้รับการประเมินโดยการกำหนดเนื้อหาในเถ้าของแข็ง. 2.2.2 ลดปริมาณโปรตีนในเงื่อนไขการทดลองที่คล้ายกันถูกนำไปใช้สำหรับ deminer- alization ของเปลือกหอยแห้ง ความเข้มข้นของโซเดียมไฮดรอกไซได้รับแตกต่างกัน 0.5-5 มเวลาปฏิกิริยาตั้งแต่ 10-400 นาทีและอุณหภูมิที่แตกต่างกันได้20-100 องศาเซลเซียสในตอนท้ายของนี้กระบวนการวัสดุที่ได้รับการกรองล้างและแห้งในขณะที่ก่อนหน้านี้ได้อธิบายไว้ในกระบวนการ demineralization เพื่อที่จะประเมินขอบเขตของการย่อยความเข้มข้นของโปรตีนในสารละลายถูกกำหนดตามวิธีการของBiuret (วิจิตร, 1935); มันยังคงเป็นวิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายมากที่สุดสำหรับโปรตีนมุ่งมั่น. 50 MS Benhabiles et al, / อาหาร Hydrocolloids 29 (2012) 48e56 ไคโตซานมีการไฮโดรไลซ์ 50 มล. HCl 6.27 ไม่มีข้อความที่ 56 องศาเซลเซียสในช่วง 3 ชั่วโมง(ช้างลีและ Fu, 2000). 2.5 ต้านเชื้อแบคทีเรียทดสอบความเข้มข้นของการยับยั้งขั้นต่ำที่มีความสำคัญที่จะยืนยันความต้านทานของจุลินทรีย์ที่จะเป็นตัวแทนต้านจุลชีพและยังตรวจสอบกิจกรรมของยาต้านจุลชีพใหม่ น้อยที่สุดความเข้มข้นยับยั้ง (MIC) โดยทั่วไปถือว่าเป็นที่สุดวัดในห้องปฏิบัติการพื้นฐานของกิจกรรมของยาต้านจุลชีพตัวแทนกับสิ่งมีชีวิต กิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของไคติน, chito- ซัง N-acetyl-Chito oligosaccharides (NAC-COS) และ chito- oligosaccharides (COS) มีการตรวจสอบผลกระทบยับยั้งต่อการเจริญเติบโตของสี่แบคทีเรียแกรมบวก: Staphylococcus aureus ATCC 25923 เอส aureus ATCC 43300, Bacillus subtilis และเชื้อBacillus cereus และเจ็ดแบคทีเรียแกรมลบ: อีโคATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Salmonella typhimurium, Vibrio cholerae, Shigella dysenteriae, Prevotella mela- ninogenica Bacteroides fragilis และ แบคทีเรียทั้งหมดถูกจัดทำโดยประเทศแอลจีเรียสถาบันปาสเตอร์ 0.1 กรัมของไคตินหมันไคโตซาน, N-acetyl Chito-oligosaccharides (NAC-COS) หรือ Chito-oligosaccharides (COS) ถูกบันทึกอยู่ใน 100 มล. ของการระงับเชื้อแบคทีเรียที่เพาะเลี้ยงในขวดและบ่มกับสั่นที่37 องศาเซลเซียสเป็นผลยับยั้ง esti- แต่งงานแล้วเป็นระยะ ๆ โดยการวัดความขุ่นของกลางเพาะเลี้ยงที่640 นาโนเมตรโดยใช้ spectrophotometer UVeVisible มินิ 1240 SHI- MADZU ความเข้มข้นต่ำสุดที่ยับยั้ง (MIC) ถูกกำหนดให้เป็นความเข้มข้นต่ำสุดของไคตินไคโตซาน, NAC-COS หรือ COS ที่จำเป็นในการยับยั้งการเจริญเติบโตอย่างสมบูรณ์แบคทีเรียหลังจากบ่มที่37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมง (ไม่มี Park, ลีและเมเยอร์ส, 2002) แบคทีเรีย (พี melaninogenica และ B fragilis) เป็นที่เลี้ยงในบรรยากาศแบบไม่ใช้ออกซิเจน(Jeon และคิม, 2000) สำหรับยับยั้งmination ของความเข้มข้นต่ำสุด (MIC) ของไคติน, ไคโตซาน, N-acetyl-Chito oligosaccharides (NAC-COS) และ chito- oligosaccharides (COS) โซลูชั่น (1% (w / w) ใน 1% (w / w) กรด) ของสารแต่ละถูกเพิ่มเข้าไปในมุลเลอร์ฮินตันวุ้น(เสริมด้วยเลือดสำหรับแบคทีเรีย) สำหรับไคตินสุดท้ายไคโตซาน NAc- COS หรือความเข้มข้นของ COS 0.1%, 0.08%, 0.05%, 0.03%, 0.01% 0.006% และ 0.003% (w / v). แปลงที่ทำจากความหนาแน่นของแสง (OD) (เช่นการดูดกลืนแสงที่640 นาโนเมตร) เมื่อเทียบกับช่วงเวลาที่วัฒนธรรมของแต่ละสี่แกรมบวกเชื้อแบคทีเรียและเจ็ดแบคทีเรียแกรมลบทดสอบโดยวิธีการเขย่าขวด. ผลกระทบยับยั้งการเจริญเติบโตต่อเนื่องจากกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของไคตินไคโตซาน, N-acetyl-Chito oligosaccharides (NAC-COS) และ Chito-oligosaccharides (COS) จะถูกแสดงโดยการปรับระดับออกจากลาดของเส้นโค้งที่3 ผลและการอภิปราย