Laboratory investigations Virus det

Laboratory investigations
Virus detection was carried out on all blood samples collected upon challenge infection, and on spleen samples taken at necropsy using virus isolation techniques on PBMC derived macrophages.Viral genome was detected in blood samples collected upon challenge infection, and in samples of blood, spleen, tonsil and salivary gland collected at necropsy by real-time polymerase chain reaction(qPCR).Blood for the preparation of PBMC-derived macrophages was collected from domestic donor pigs. Cells were prepared aspreviously described [10,11] and used for virus titrations and hemadsorption tests. Both methods were carried out according to standard procedures [12]. For quantitative real-time PCR (qPCR),viral DNA was extracted using the QIAamp®DNA Mini Kit (QIAGEN)according to the manufacturer’s instructions. Subsequently, qPCRwas performed according to the protocol published by King et al.[13] using a Bio-Rad CFX Cycler (Bio-Rad Laboratories). A dilutionseries of a synthetic standard with known copy numbers was used to quantify genome copies in the respective samples. To confirmintegrity of the p73 antigen after inactivation, immunogen preparations were tested in the commercial antigen ELISA Ingezim PPADAS K2 (INGENASA) according to the manufacturer‘s instructions.Moreover, genome copy numbers were compared prior and afterinactivation.Sera were tested for the presence of ASFV p73- and p30-specific antibodies using the INGEZIM PPA COMPAC ELISA (Ingenasa)and the SVANOVIR ASFV-Ab (SVANOVA) according to the manufacturer’s instructions. To assess neutralizing capacities of sera obtained prior to challenge infection, macrophage infection inhibition assays were carried out along with neutralization tests on permanent wild boar lung cells (WSL). Hemadsorption inhibition and indirect immunofluorescence staining was used asreadout (methodological details are available from the authors upon request).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ห้องปฏิบัติการตรวจสอบ Virus detection was carried out on all blood samples collected upon challenge infection, and on spleen samples taken at necropsy using virus isolation techniques on PBMC derived macrophages.Viral genome was detected in blood samples collected upon challenge infection, and in samples of blood, spleen, tonsil and salivary gland collected at necropsy by real-time polymerase chain reaction(qPCR).Blood for the preparation of PBMC-derived macrophages was collected from domestic donor pigs. Cells were prepared aspreviously described [10,11] and used for virus titrations and hemadsorption tests. Both methods were carried out according to standard procedures [12]. For quantitative real-time PCR (qPCR),viral DNA was extracted using the QIAamp®DNA Mini Kit (QIAGEN)according to the manufacturer’s instructions. Subsequently, qPCRwas performed according to the protocol published by King et al.[13] using a Bio-Rad CFX Cycler (Bio-Rad Laboratories). A dilutionseries of a synthetic standard with known copy numbers was used to quantify genome copies in the respective samples. To confirmintegrity of the p73 antigen after inactivation, immunogen preparations were tested in the commercial antigen ELISA Ingezim PPADAS K2 (INGENASA) according to the manufacturer‘s instructions.Moreover, genome copy numbers were compared prior and afterinactivation.Sera were tested for the presence of ASFV p73- and p30-specific antibodies using the INGEZIM PPA COMPAC ELISA (Ingenasa)and the SVANOVIR ASFV-Ab (SVANOVA) according to the manufacturer’s instructions. To assess neutralizing capacities of sera obtained prior to challenge infection, macrophage infection inhibition assays were carried out along with neutralization tests on permanent wild boar lung cells (WSL). Hemadsorption inhibition and indirect immunofluorescence staining was used asreadout (methodological details are available from the authors upon request).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจสอบในห้องปฏิบัติการ
ตรวจจับไวรัสได้ดำเนินการในทุกตัวอย่างเลือดที่เก็บรวบรวมเมื่อติดเชื้อความท้าทายและตัวอย่างม้ามถ่ายที่ชันสูตรศพโดยใช้เทคนิคการแยกเชื้อไวรัสใน PBMC มาจีโนม macrophages.Viral ถูกตรวจพบในตัวอย่างเลือดที่เก็บรวบรวมเมื่อติดเชื้อความท้าทายและในตัวอย่างเลือด ม้ามต่อมทอนซิลและต่อมน้ำลายเก็บที่ชันสูตรศพโดยเรียลไทม์วิธี polymerase chain reaction (qPCR) .Blood สำหรับการเตรียมการใหญ่ PBMC ที่ได้มาจากการเก็บรวบรวมจากสุกรในประเทศผู้บริจาค เซลล์ที่ถูกเตรียมอธิบาย aspreviously [10,11] และใช้สำหรับการไทเทรตไวรัสและการทดสอบ hemadsorption ทั้งสองวิธีได้ดำเนินการตามขั้นตอนมาตรฐาน [12] สำหรับวิธี PCR เรียลไทม์เชิงปริมาณ (qPCR) ดีเอ็นเอไวรัสถูกสกัดโดยใช้QIAamp®DNA Mini Kit (QIAGEN) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ต่อมา qPCRwas ดำเนินการตามโปรโตคอลที่ตีพิมพ์โดยกษัตริย์ et al. [13] โดยใช้ Bio-Rad CFX Cycler (Bio-Rad ห้องปฏิบัติการ) dilutionseries มาตรฐานสังเคราะห์ที่มีตัวเลขที่รู้จักกันสำเนาถูกใช้ในการวัดปริมาณสำเนาจีโนมในตัวอย่างนั้น เพื่อ confirmintegrity ของแอนติเจน p73 หลังจากการใช้งาน, การเตรียมแอนติเจนได้รับการทดสอบในเชิงพาณิชย์ ELISA แอนติเจน Ingezim PPADAS K2 (INGENASA) ตาม instructions.Moreover ของผู้ผลิตตัวเลขจีโนมสำเนาถูกนำมาเปรียบเทียบก่อนและ afterinactivation.Sera ได้มีการทดสอบการปรากฏตัวของ ASFV p73 - P30 และแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงใช้ INGEZIM PPA COMPAC ELISA (Ingenasa) และ SVANOVIR ASFV-Ab (SVANOVA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต เพื่อประเมินความสามารถของ neutralizing ซีรั่มที่ได้รับก่อนที่จะท้าทายการติดเชื้อการตรวจการยับยั้งการติดเชื้อ macrophage ได้ดำเนินการพร้อมกับการทดสอบการวางตัวเป็นกลางในหมูป่าถาวรเซลล์ปอด (WSL) ยับยั้ง Hemadsorption และการย้อมสี immunofluorescence อ้อมถูกใช้ asreadout (รายละเอียดวิธีการที่มีอยู่จากผู้เขียนตามคำขอ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจทางห้องปฏิบัติการ
การตรวจจับไวรัสได้ดําเนินการในการเก็บตัวอย่างเลือดต่อการติดเชื้อที่ท้าทายและตัวอย่างการใช้เทคนิคถ่ายม้ามและไวรัสที่แยกได้บนพื้นฐาน macrophages . ไวรัสที่ตรวจพบในตัวอย่างเลือด โดยรวบรวมเมื่อการติดเชื้อที่ท้าทายและในตัวอย่างเลือด ม้ามต่อมทอนซิล และต่อมน้ำลายที่รวบรวมและเรียลไทม์โดยปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เรส ( qpcr ) เลือดเพื่อเตรียมพื้นฐานมาจากแมคโครฟาจรวบรวมจากหมูผู้บริจาคภายในประเทศ เซลล์ที่ถูกเตรียมไว้ aspreviously อธิบาย [ 10,11 ] และใช้ titrations ไวรัสและการทดสอบ hemadsorption . ทั้งสองวิธี ได้ดำเนินการตามขั้นตอนมาตรฐาน [ 12 ]สำหรับปริมาณ PCR แบบเรียลไทม์ ( qpcr ) , ไวรัสดีเอ็นเอโดยใช้ qiaamp ®ดีเอ็นเอมินิชุด ( เพิ่ม ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ต่อมา qpcrwas การปฏิบัติตามโปรโตคอลที่ตีพิมพ์โดยกษัตริย์ et al . [ 13 ] การใช้ไบโอ ราด cfx รอบ ( ห้องปฏิบัติการราดไบโอ )เป็น dilutionseries ของมาตรฐานสังเคราะห์ด้วยจักคัดลอกหมายเลขถูกใช้เพื่อหาสำเนาพันธุกรรมในตัวอย่างนั้น เพื่อ confirmintegrity ของ p73 แอนติเจนหลังจากใช้งาน การเตรียมอิมทดสอบโฆษณาแอนติเจน ELISA ingezim ppadas K2 ( ingenasa ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต นอกจากนี้หมายเลขคัดลอกพันธุกรรมเปรียบเทียบก่อนและ afterinactivation . เซรา ทดสอบสถานะของ asfv p73 - p30 แอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจงโดยใช้ ingezim PPA compac ELISA ( ingenasa ) และ svanovir asfv AB ( svanova ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต เพื่อประเมินความสามารถของเซร่าได้ว่าก่อนที่จะท้าทายการติดเชื้อแมโครฟาจยับยั้งหรือการติดเชื้อที่เกิดขึ้นพร้อมกับการทดสอบถาวรหมูป่าปอดเซลล์ ( wsl ) การยับยั้ง hemadsorption และทางอ้อมวิธีย้อมที่ใช้ asreadout ( รายละเอียดไม่สมบูรณ์จะพร้อมใช้งานจากผู้เขียนตามคำขอ )