Discovery and Major Milestones.Gree

Discovery and Major Milestones.
Green Fluorescent Protein was discovered by Shimomura et al (1) as a companion protein to aequorin, the famous chemiluminescent protein from Aequorea jellyfish. In a footnote to their account of aequorin purification, they noted that “a protein giving solutions that look slightly greenish in sunlight through only yellowish under tungsten lights, and exhibiting a very bright, greenish fluorescence in the ultraviolet of a Mineralite, has also been isolated from squeezates.” This description of the appearance of GFP solutions is still accurate. The same group (2) soon published the emission spectrum of GFP, which peaked at 508 nm. They noted that the green bioluminescence of living Aequorea tissue also peaked near this wavelength, whereas the chemiluminescence of pure aequorin was blue and peaked near 470 nm, which was close to one of the excitation peaks of GFP. Therefore the GFP converted the blue emission of aequorin to the green glow of the intact cells and animals. Morin & Hastings (3) found the same color shift in the related coelenterates Obelia (a hydroid) and Renilla (a sea pansy) and were the first to suggest radiationless energy transfer as the mechanism for exciting coelenterate GFPs in vivo. Moriseetal(4)purifiedandcrystallizedGFP,measureditsabsorbancespectrum and fluorescence quantum yield, and showed that aequorin could efficiently transfer its luminescence energy to GFP when the two were coadsorbed onto a cationicsupport. Prendergast&Mann(5)obtained the first clear estimate for the

GREEN FLUORESCENT PROTEIN 511
monomer molecular weight. Shimomura (6) proteolyzed denatured GFP, analyzed the peptide that retained visible absorbance, and correctly proposed that the chromophore is a 4-(p-hydroxybenzylidene)imidazolidin-5-one attached to the peptide backbone through the 1- and 2-positions of the ring. Aequorea and Renilla GFPs were later shown to have the same chromophore (7); and the pH sensitivity, aggregation tendency (8), and renaturation (9) of Aequorea GFP were characterized. But the crucial breakthroughs came with the cloning of the gene by Prasher et al (10) and the demonstrations by Chalfie et al (11) and Inouye & Tsuji (12) that expression of the gene in other organisms creates fluorescence. Therefore the gene contains all the information necessary for the posttranslational synthesis of the chromophore, and no jellyfish-specific enzymes are needed.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ค้นพบและความสำเร็จวิชาโปรตีนเรืองแสงสีเขียวถูกค้นพบโดย Shimomura et al (1) เป็นโปรตีนตัวช่วยเพื่อ aequorin โปรตีน chemiluminescent มีชื่อเสียงจาก Aequorea jellyfish ในเชิงอรรถการบัญชี aequorin purification พวกเขากล่าวว่า "โปรตีนให้โซลูชั่นที่ดูเล็กน้อยจนแสงแดดโดยเฉพาะเหลืองภายใต้แสงไฟทังสเตน และ fluorescence ที่สดใสมาก ลูกในรังสีอัลตราไวโอเลตของการ Mineralite อย่างมีระดับนอกจากนี้ยังได้แยกจาก squeezates" คำอธิบายของลักษณะที่ปรากฏของโซลูชั่น GFP ถูกยัง กลุ่มเดียวกัน (2) เร็ว ๆ นี้เผยแพร่จำนวนมากเล็ดรอด GFP ซึ่ง peaked ที่ 508 nm พวกเขาตั้งข้อสังเกตที่ bioluminescence เขียวพัก Aequorea ที่เนื้อเยื่อยัง peaked ใกล้ความยาวคลื่นนี้ ขณะ chemiluminescence ของ aequorin บริสุทธิ์มีสีน้ำเงิน และ peaked ใกล้ 470 nm ที่อยู่ใกล้แห่งในการกระตุ้น GFP อย่างใดอย่างหนึ่ง ดังนั้น GFP แปลงปล่อยก๊าซสีน้ำเงินของ aequorin จะเรืองแสงสีเขียวเหมือนเดิมเซลล์และสัตว์ โมรินเฮสติ้งส์ (3) พบกะสีเดียวกันใน coelenterates เกี่ยวข้อง Obelia (เป็น hydroid) และ Renilla (pansy ทะเล) และมี first แนะนำโอน radiationless พลังงานเป็นกลไกสำหรับตื่นเต้น coelenterate GFPs ในสัตว์ทดลอง Moriseetal (4) purifiedandcrystallizedGFP, measureditsabsorbancespectrum และ fluorescence ควอนตัมผลตอบแทน และแสดงให้เห็นว่า aequorin ที่สามารถ efficiently โอนพลังงาน luminescence การ GFP เมื่อทั้งสองถูก coadsorbed ไปเป็น cationicsupport Prendergast และมานน์ (5) ได้รับการประเมินชัดเจน first สำหรับการ โปรตีนเรืองแสงสีเขียว 511น้ำหนักโมเลกุลของน้ำยา Proteolyzed Shimomura (6) denatured GFP วิเคราะห์เพปไทด์ที่สะสม absorbance ที่มองเห็นได้ และถูกเสนอว่า เป็น chromophore ที่ 4 แบบ (p-hydroxybenzylidene) imidazolidin-5-1 กับแกนหลักของเพปไทด์โดยที่ 1 - 2-ตำแหน่ง และแหวน Aequorea และ Renilla GFPs ได้ในภายหลังแสดงมี chromophore เดียวกัน (7); และความไว ต่อค่า pH แนวโน้มรวม (8), และ renaturation (9) ของ Aequorea GFP มีลักษณะ แต่นวัตกรรมใหม่ที่สำคัญมาพร้อมกับโคลนยีนโดย Prasher et al (10) และสาธิตโดย Chalfie et al (11) และนิพจน์ที่ของยีนในสิ่งมีชีวิตอื่นสร้าง fluorescence Inouye & Tsuji (12) ดังนั้น ยีนประกอบด้วยข้อมูลทั้งหมดที่จำเป็นสำหรับการสังเคราะห์ posttranslational ของ chromophore และเอนไซม์ jellyfish specific ไม่มีความจำเป็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การค้นพบและเมเจอร์ความคืบหน้า.
กรีนโปรตีนเรืองแสงถูกค้นพบโดย Shimomura et al, (1) เป็นโปรตีนสหาย aequorin โปรตีน chemiluminescent ที่มีชื่อเสียงจากการดวลจุดโทษ Aequorea สายวุ้น ในเชิงอรรถไปยังบัญชีของพวกเขา aequorin Puri ไอออนไฟที่พวกเขาตั้งข้อสังเกตว่า "โปรตีนที่ให้การแก้ปัญหาที่มีลักษณะสีเขียวเล็กน้อยในแสงแดดผ่านสีเหลืองเพียงภายใต้แสงไฟทังสเตนและแสดงสดใสมาก uorescence ชั้นสีเขียวในอัลตราไวโอเลตของ Mineralite ที่ยังได้รับการแยก จาก squeezates. "รายละเอียดของลักษณะของการแก้ปัญหา GFP นี้ยังคงมีความถูกต้อง กลุ่มเดียวกัน (2) การเผยแพร่ในเร็ว ๆ นี้การปล่อยคลื่นความถี่ของ GFP ซึ่งเป็นยอดที่ 508 นาโนเมตร พวกเขาตั้งข้อสังเกตว่าชีวิตเรืองแสงสีเขียวของเนื้อเยื่อ Aequorea ที่อาศัยอยู่ใกล้กับแหลมความยาวคลื่นนี้ขณะที่ chemiluminescence ของ aequorin บริสุทธิ์เป็นสีฟ้าและแหลมที่อยู่ใกล้ 470 นาโนเมตรซึ่งใกล้เคียงกับหนึ่งในการกระตุ้นยอดของ GFP ดังนั้น GFP แปลงการปล่อยสีฟ้าของ aequorin จะเรืองแสงสีเขียวของเซลล์เหมือนเดิมและสัตว์ โมและเฮสติ้งส์ (3) พบว่าการเปลี่ยนแปลงของสีเดียวกันใน coelenterates เกี่ยวข้อง Obelia (ก hydroid) และ Renilla (ทะเลกะเทย) และสายแรกที่จะแนะนำการถ่ายโอนพลังงาน radiationless เป็นกลไกสำหรับ GFPs coelenterate ที่น่าตื่นเต้นในร่างกาย Moriseetal (4) ปูรีไฟ edandcrystallizedGFP, measureditsabsorbancespectrum และชั้น uorescence ผลผลิตควอนตัมและแสดงให้เห็นว่าสามารถ aequorin EF ไฟอย่างมีประสิทธิภาพในการถ่ายโอนพลังงานแสงเรืองที่จะ GFP เมื่อทั้งสองถูก coadsorbed บน cationicsupport Prendergast และแมนน์ (5) ได้รับสายแรกประมาณการที่ชัดเจนสำหรับสีเขียวเรืองโปรตีน511 โมโนเมอร์ที่มีน้ำหนักโมเลกุล Shimomura (6) proteolyzed เอทิลแอลกอฮอล์ GFP วิเคราะห์เปปไทด์ที่ดูดกลืนแสงที่มองเห็นได้เก็บไว้และนำเสนอได้อย่างถูกต้องว่าเป็น chromophore 4 (P-hydroxybenzylidene) imidazolidin-5-หนึ่งที่ติดอยู่กับกระดูกสันหลังเปปไทด์ที่ผ่านการ 1 และ 2 ตำแหน่ง แหวน. Aequorea และ GFPs Renilla ภายหลังที่มีการแสดงที่จะมี chromophore เดียวกัน (7); และความไวค่า pH แนวโน้มการรวมตัว (8) และกลับคืนสู่สภาพธรรมชาติ (9) ของ Aequorea GFP มีลักษณะ แต่ความก้าวหน้าที่สำคัญมาพร้อมกับโคลนของยีนโดย Prasher et al, (10) และการสาธิตโดย Chal -Fi และ et al, (11) และอินูเอะและซูจิ (ที่ 12) ว่าการแสดงออกของยีนในสิ่งมีชีวิตอื่น ๆ สร้างชั้น uorescence ดังนั้นยีนนี้มีข้อมูลทั้งหมดที่จำเป็นสำหรับการสังเคราะห์ posttranslational ของ chromophore และไม่มีสายไฟวุ้น SH-speci คเอนไซม์ที่มีความจำเป็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การค้นพบและเหตุการณ์ .
โปรตีนเรืองแสงสีเขียวถูกค้นพบโดย ชิโมมุระ et al ( 1 ) เป็นสหายกับการคลิกเมาส์ที่มีโปรตีน , โปรตีนจาก aequorea chemiluminescent เยลลี่จึงชุในหมายเหตุบัญชีของการคลิกเมาส์ ภูริจึงบวก พวกเขากล่าวว่า " โปรตีนที่ให้โซลูชั่นที่ดูเล็กน้อยสีเขียวในแสงแดดผ่านแค่เหลืองภายใต้ ไฟทังสเตนและจัดแสดงสว่างมาก uorescence flสีเขียวในรังสีอัลตราไวโอเลตของ mineralite ยังได้ถูกแยกจาก squeezates " นี้อธิบายลักษณะของ GFP โซลูชั่นยังถูกต้องอยู่ กลุ่มเดียวกัน ( 2 ) แล้วเผยแพร่การปล่อยสเปกตรัมของ GFP ซึ่งมี 508 นาโนเมตร พวกเขาตั้งข้อสังเกตว่าไบโอลูมิเนสเซนสีเขียวของชีวิต aequorea เนื้อเยื่อยังแหลมใกล้ความยาวคลื่นนี้ส่วนนโยบายแรงงานของบริสุทธิ์และการคลิกเมาส์เป็นสีฟ้าแหลมใกล้ 470 nm ซึ่งอยู่ใกล้หนึ่งของการกระตุ้นยอดของ GFP . ดังนั้นการปล่อย GFP แปลงสีฟ้าของการคลิกเมาส์การเรืองแสงสีเขียวของเซลล์เหมือนเดิมและสัตว์โมริน&เฮสติงส์ ( 3 ) เจอกะ สีเดียวกันในที่เกี่ยวข้องซีเลนเตอเรตโอบิเลีย ( เพิ่มขึ้น คือ ไฮดรอยด์ ) และ renilla ( ทะเลกะเทย ) และเป็น RST จึงแนะนำการถ่ายโอนพลังงาน radiationless เป็นกลไกที่น่าตื่นเต้น gfps น่าชมเชยในสิ่งมีชีวิต moriseetal ( 4 ) จึง edandcrystallizedgfp measureditsabsorbancespectrum ปูรี , fl uorescence ควอนตัมและผลผลิตพบว่า สามารถถ่ายทอดและการคลิกเมาส์ EF ciently ถ่ายโอนพลังงานเรืองแสงของ GFP เมื่อสอง coadsorbed บน cationicsupport . ณ&แมนน์ ( 5 ) ได้จึงตัดสินใจเดินทางไปประเมินให้ชัดเจน

โมโนเมอร์โมเลกุลโปรตีนเรืองแสงสีเขียวมันหนัก ชิโมมูระ ( 6 ) proteolyzed ใช้ GFP วิเคราะห์เปปไทด์ที่ยังคงมองเห็นการดูดกลืนแสงและถูกต้องเสนอว่าที่มีสีเป็น 4 - ( p-hydroxybenzylidene ) imidazolidin-5-one แนบกับเปปไทด์หลักผ่าน 1 - 2-positions ของแหวน และ aequorea renilla gfps ก็แสดงได้ที่มีสีเดียวกัน ( 7 ) และ pH ความไวของแนวโน้ม ( 8 ) และ ( 9 ) ของ renaturation aequorea GFP มีลักษณะ .แต่นวัตกรรมที่สำคัญมาพร้อมกับการโคลนยีนโดยพราเชอร์ et al ( 10 ) และการสาธิตโดยชัลจึง e et al ( 11 ) และ โน เย&ซึจิ ( 12 ) การแสดงออกของยีนในสิ่งมีชีวิตอื่นๆ สร้างfl uorescence . ดังนั้นยีนมีข้อมูลทั้งหมดที่จำเป็นสำหรับการสังเคราะห์ posttranslational ของที่มีสี และไม่มีเจลลี่จึง SH speci จึง C เอนไซม์
ที่จําเป็น