On the other hand, it was observed an inefficient phase separation evidenced by on small volume of the surfactant rich phase (95%), except for NFV (ca. 70%), and remained invariant only for EFV at higher pH values. These results could be due to the tradeoff between the effect of affinity of the analyte by the micelles and their efficiency in forming, resulting in an improvement of the analytical signal. NFV analytical responses reached the highest values (>95%) at pH 9 and remained invariant at pH 11.5. The analytical responses of 3 TC and ABC decreased from pH 7 and pH 9, respectively. Phases separation was efficient from pH 7 ahead, obtaining a coacervate-phase volume of ca. 350 μL. Coacervate phase showed the highest dehydration and the smaller volume (ca. 300 μL) at pH of 11.5; resulting in a better phases separation performance and reducing of the loss of coacervate phase when the supernatant was discharged. The decrease in the analytical signal of ABC and 3 TC at pH 11.5 could be due to a signal suppression effect in the mass spectrometer because of a high matrix load in the solvent front. Considering the short retention time of ABC and 3 TC (1.30 and 1.34 min−1, respectively) it was expected that their analytical signal were more affected by this phenomenon than for NFV and EFV, whose retention time were higher (1.61 and 2.06 min−1, respectively).
Based on these results, pH 7.5 was adopted as working condition considering it as the best compromise pH that lead to successful analytical response for the studied ARV. Considering that human plasma pH is 7.4 [27], the extraction pH was not adjusted for CPE of ARV from plasma. This fact is relevant for the development of an analytical methodology for a multi-component analysis since it simplify the procedure.
3.4. Optimization of extraction temperature and time
Reported cloud point temperatures for TritonX-114 are within the range of 15–20 °C [19]. It refers to the temperature at which the surfactant coacervation results notorious in the extraction system, because of its turbid aspect. As it is well known, extraction temperatures above the cloud point, and/or the extended extraction time (>2 min), diminishes the water content of the resulting surfactant reach phase, and thus, its final volume [25]. This argument is based on the fact that as the extraction temperature increases, the hydrogen bonds are disrupted leading, thus, to dehydration of micelles [25]. On the other hand, it is important to take into account that the use of excessive high extraction temperature can reduce the CPE efficiency, because of the thermal stability of surfactant aggregates [30] as well as the analytes lability. Therefore, it was of interest to study the effect of the extraction temperature on the extraction system performance, as well as on the analytes analytical response along with the extraction time within the range 45–75 °C and 10–30 min, respectively. The extraction temperature assays were carried out considering a 20 min extraction time; while the time assays, were carried out at the optimum temperature resulting from the former. As the temperature increased from 45 to 65 °C a better surfactant-rich phase separation as well as an increased response of the analytes was observed. The results showed no significant change neither on the CPE performance nor on the analytical response of the studied ARV at extraction temperatures above 65 °C. Therefore, 65 °C were chosen for further assays. For the extraction time, it was observed that by increasing it, the relative response is subsequently increased, reaching the maximum analytical responses of the studied ARV at 20 min; after which, and remained invariant. Thus, in the following experiments, an extraction time of 20 min was selected for the extraction.
3.5. Analytical performance and method validation
The proposed analytical multi-component method was evaluated in terms of linearity, recovery, accuracy and precision intra- and inter-day, selectivity and sensitivity. Blank plasma was assessed in six different batches of plasma samples by analyzing blanks and spiked samples at LOQ levels. The calibration curves were made under optimized conditions following the proposed methodology, which was described above. Blank plasma were spiked with ARV standards achieving different concentration levels [31
ในทางกลับกัน มันถูกตรวจสอบการแยกระยะต่ำที่เป็นหลักฐานโดยบนไดรฟ์ข้อมูลขนาดเล็กของ surfactant ระยะรวย (< 50 μL), ซึ่งได้รับผลกระทบประสิทธิภาพการแยก และจากนั้นวิเคราะห์ตอบสนองที่ pH 5 เสียงระยะ coacervate ได้ถูก ca 450 μL และพบ turbid ที่ล้างหลังจากขั้นตอนฝนโปรตีน ที่นี้ pH, 3 TC และ ABC แผ่ขยายไปในฟอร์ม ionic ขณะ NFV และ EFV แผ่ขยายไปในฟอร์มของ nonionic ตาม pKa ของ ในนี้ มันถูกคาดว่าจะดูตอบสนองญาติล่างสำหรับ ionic analytes เนื่องจากจะมีความเกี่ยวข้องด้านล่างสำหรับ nonionic micelle และลดประสิทธิภาพในการสกัดสำหรับ ARV เหล่านี้ดังนั้น อย่างไรก็ตาม การตอบสนองของ ARV วิเคราะห์ถึงค่าสูงสุดที่ pH 5 (> 95%), ยก เว้น NFV (ca 70%), และก่อนหน้าบล็อกสำหรับ EFV ที่ค่า pH สูงขึ้น ผลลัพธ์เหล่านี้อาจเป็น เพราะข้อดีข้อเสียระหว่างผลของความสัมพันธ์ของ analyte โดย micelles การและประสิทธิภาพของพวกเขาในการขึ้นรูป ผลของการวิเคราะห์สัญญาณ ตอบวิเคราะห์ NFV ถึงค่าสูงสุด (> 95%) ที่ pH 9 และก่อนหน้าบล็อกที่ pH 11.5 ตอบวิเคราะห์ 3 TC และ ABC ลดลงจากค่า pH 7 และ pH 9 ตามลำดับ ระยะแยกมากจาก pH 7 หน้า ได้รับปริมาณ coacervate เฟสของ ca 350 μL แสดงให้เห็นว่าปริมาณขนาดเล็ก (ca. 300 μL) และคายน้ำสูงสุดที่ pH 11.5 ระยะ coacervate ในการระยะแยกประสิทธิภาพ และลดการสูญเสียของระยะ coacervate เมื่อ supernatant ที่ออก สัญญาณวิเคราะห์ ABC และ 3 TC ที่ pH 11.5 ที่ลดลงนี้อาจเป็น เพราะผลการปราบปรามสัญญาณในสเปกโตรมิเตอร์โดยรวมเนื่องจากโหลดเมทริกซ์สูงในด้านหน้าเป็นตัวทำละลาย พิจารณาเวลาเก็บรักษาสั้นของ ABC และ 3 TC (1.30 และ 1.34 min−1 ตามลำดับ) จึงคาดว่าว่า สัญญาณการวิเคราะห์มากถูกกระทบ โดยปรากฏการณ์นี้มากกว่า NFV และ EFV เวลาเก็บข้อมูลได้สูงขึ้น (1.61 และ 2.06 min−1 ตามลำดับ)ขึ้นอยู่กับผลลัพธ์เหล่านี้ pH 7.5 ถูกนำเป็นเงื่อนไขการทำงานที่พิจารณาเป็น pH ประนีประนอมสุดที่นำไปสู่คำตอบวิเคราะห์ประสบความสำเร็จสำหรับ studied ARV พิจารณา pH ที่พลาสม่ามนุษย์เป็น 7.4 [27], pH สกัดถูกปรับสำหรับ CPE ARV จากพลาสม่าครั้ง ความจริงนี้จะเกี่ยวข้องกับการพัฒนาวิธีการวิเคราะห์สำหรับการวิเคราะห์ส่วนประกอบหลายเนื่องจากมันง่ายขั้นตอน3.4 การปรับแยกอุณหภูมิและเวลาReported cloud point temperatures for TritonX-114 are within the range of 15–20 °C [19]. It refers to the temperature at which the surfactant coacervation results notorious in the extraction system, because of its turbid aspect. As it is well known, extraction temperatures above the cloud point, and/or the extended extraction time (>2 min), diminishes the water content of the resulting surfactant reach phase, and thus, its final volume [25]. This argument is based on the fact that as the extraction temperature increases, the hydrogen bonds are disrupted leading, thus, to dehydration of micelles [25]. On the other hand, it is important to take into account that the use of excessive high extraction temperature can reduce the CPE efficiency, because of the thermal stability of surfactant aggregates [30] as well as the analytes lability. Therefore, it was of interest to study the effect of the extraction temperature on the extraction system performance, as well as on the analytes analytical response along with the extraction time within the range 45–75 °C and 10–30 min, respectively. The extraction temperature assays were carried out considering a 20 min extraction time; while the time assays, were carried out at the optimum temperature resulting from the former. As the temperature increased from 45 to 65 °C a better surfactant-rich phase separation as well as an increased response of the analytes was observed. The results showed no significant change neither on the CPE performance nor on the analytical response of the studied ARV at extraction temperatures above 65 °C. Therefore, 65 °C were chosen for further assays. For the extraction time, it was observed that by increasing it, the relative response is subsequently increased, reaching the maximum analytical responses of the studied ARV at 20 min; after which, and remained invariant. Thus, in the following experiments, an extraction time of 20 min was selected for the extraction.3.5 การวิเคราะห์ประสิทธิภาพและวิธีการตรวจสอบมีประเมินวิธีวิเคราะห์ส่วนประกอบหลายเสนอแบบดอกไม้ กู้คืน ความถูกต้อง และแม่นยำภายใน - และระหว่างวัน ใว และความไว พลาสม่าว่างประเมินในหกชุดอื่นอย่างพลาสม่า โดยการวิเคราะห์ช่องว่าง และ spiked ตัวอย่างระดับ LOQ เทียบเส้นโค้งตั้งขึ้นภายใต้เงื่อนไขให้เหมาะต่อการเสนอวิธีการ ที่ได้อธิบายไว้ข้างต้น พลาสม่าเปล่ามี spiked ARV มาตรฐานบรรลุระดับความเข้มข้นแตกต่างกัน [31
การแปล กรุณารอสักครู่..