Kim et al., 2013). Furthermore,bumb

Kim et al., 2013). Furthermore,
bumblebee venom serine protease inhibitors show antifibrinolytic
activity (Choo et al., 2012; Qiu et al., 2013).
As one of the serine protease inhibitor families, Kazaltype
serine protease inhibitors (KTSPIs) contain one or
more Kazal domains, which have three disulfide bridges
(Laskowski and Kato,1980; van de Locht et al.,1995; Schlott
et al., 2002; Morris and Carruthers, 2003; Morris et al.,
2004; Tian and Kamoun, 2005; Han et al., 2008; Li et al.,
2009; Lu et al., 2012). KTSPIs have also been identified in
insects, such as blood-sucking insects (Friedrich et al.,1993;
Mende et al.,1999, 2004), mosquitos (Watanabe et al., 2010,
2011), silkworms (Gandhe et al., 2006; Zheng et al., 2007),
Drosophila (Niimi et al., 1999), locusts (Brillard-Bourdet
et al., 2006), and beetles (Horita et al., 2010). These insect
KTSPIs inhibit chymotrypsin, trypsin, plasmin, thrombin,
elastase, proteinase K, or subtilisin A. Additionally, KTSPIs
from freshwater crayfish, frog, and shrimp exhibit
microorganism-binding activity and bacteriostatic activity
(Han et al., 2008; Li et al., 2009; Donpudsa et al., 2009).
KTSPI from Hydra inhibits subtilisin and kills Staphylococcus
aureus directly (Augustin et al., 2009). Although
KTSPIs from bees are found in database searches, the roles
of bee-derived KTSPIs remain relatively unexplored.
Moreover, no antimicrobial activity of bee-derived KTSPIs
has been demonstrated.
Here, we report the first bee (Apis cerana) venomderived
KTSPI (AcKTSPI) that acts as a microbial serine
protease inhibitor. We provide the molecular characterization
of this inhibitor and demonstrate that it exhibits
inhibitory activity against subtilisin A and proteinase K. Our
results describe the antimicrobial activity of an AcKTSPI
that exhibits both antibacterial activity against Grampositive
bacteria and antifungal activity against plantpathogenic
and entomopathogenic fungi.
Agricultural Biology, National Academy of Agricultural
Science, Republic of Korea (Kim et al., 2013). A. cerana
worker bees were dissected on ice using a stereomicroscope
(Zeiss, Jena, Germany). Tissue samples (epidermis, fat
body, gut, and venom gland) were collected and washed
with phosphate-buffered saline (PBS; 140mMNaCl, 27mM
KCl, 8mMNa2HPO4, and 1.5mMKH2PO4, pH 7.4). Total RNA
was isolated from the epidermis, fat body, gut, and venom
gland of A. cerana using a Total RNA Extraction Kit (Promega).
Total RNA (5 mg/lane) was separated using a 1.0%
formaldehyde agarose gel, transferred onto a nylon blotting
membrane (Schleicher & Schuell, Dassel, Germany) and
hybridized at 42 C with the appropriate probe diluted in
hybridization buffer containing 5 SSC (0.75 M sodium
chloride and 0.75 M sodium citrate), 5 Denhardt’s solution
(0.1% each of bovine serum albumin (BSA), Ficoll, and
polyvinylpyrrolidone), 0.5% sodium dodecyl sulfate (SDS),
and 100 mg/ml denatured salmon sperm DNA. AcKTSPI
cDNA was labeled with [a-32P] dCTP (Amersham Biosciences,
Piscataway, NJ, USA) using the Prime-It II Random
Primer Labeling kit (Stratagene, La Jolla, CA, USA), and the
labeled cDNA was used as a probe for hybridization. After
hybridization, the membrane filter was washed three times
for 30 min each in 0.1% SDS and 0.2 SSC at 65 C and then
exposed to autoradiography film.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Kim et al. 2013) นอกจากนี้ภมรพิษรอบเส้นใยประสาทรตีแสดง antifibrinolyticกิจกรรม (Choo et al. 2012 คู et al. 2013)เป็นหนึ่งในครอบครัวยับยั้งน้ำย่อยรอบเส้นใยประสาท Kazaltypeรตีรอบเส้นใยประสาท (KTSPIs) ประกอบด้วยหนึ่ง หรือโดเมน Kazal เพิ่มเติม ซึ่งมีสะพานเชื่อมซัลไฟด์ 3(Laskowski และคา 1980; van de Locht et al. 1995 Schlottet al. 2002 มอร์ริสและ Carruthers, 2003 มอร์ริส et al.,2004 เทียนและ Kamoun, 2005 Han et al. 2008 Li et al.,2009 Lu et al. 2012) KTSPIs ยังได้ระบุในแมลง แมลงดูดเลือด (Friedrich et al. 1993Mende et al. 1999, 2004), ยิ้ม (วาตานาเบะ et al. 20102011), ปอก (Gandhe et al. 2006 เจิ้ง et al. 2007),แมลง (นิ et al. 1999), ฝูงตั๊กแตน (Brillard-Bourdetet al. 2006), และแมลงปีกแข็ง (Horita et al. 2010) แมลงเหล่านี้KTSPIs ยับยั้ง plasmin ทริปซิน chymotrypsin, thrombinโครง proteinase K, subtilisin A. นอกจากนี้ หรือ KTSPIsจากกุ้งปลาน้ำจืด กบ และกุ้งจัดแสดงจุลินทรีย์รวมกิจกรรมและกิจกรรม bacteriostatic(Han et al. 2008 Li et al. 2009 Donpudsa et al. 2009)จาก Hydra KTSPI subtilisin ยับยั้ง และฆ่า Staphylococcusหมอเทศข้างลายตรง (Augustin et al. 2009) ถึงแม้ว่าKTSPIs จากผึ้งที่พบในการค้นหาฐานข้อมูล บทบาทของผึ้งที่ได้มา KTSPIs ยังคงค่อนข้างคุ้นนอกจากนี้ ไม่มีกิจกรรมการต้านจุลชีพของผึ้งที่ได้มา KTSPIsได้ถูกแสดงให้เห็นที่นี่ เรารายงาน venomderived ผึ้ง (Apis cerana) แรกKTSPI (AcKTSPI) ที่ทำหน้าที่เป็นรอบเส้นใยประสาทจุลินทรีย์โปรติเอสยับยั้ง เราให้สมบัติระดับโมเลกุลยับยั้งนี้ และแสดงให้เห็นว่า มันแสดงยับยั้งกิจกรรม subtilisin A และ proteinase เคของเราผลอธิบายกิจกรรมการต้านจุลชีพของ AcKTSPI มีที่จัดแสดงนิทรรศการทั้งแบคทีเรียกับ Grampositiveแบคทีเรียและเชื้อรากิจกรรมกับ plantpathogenicและเชื้อรา entomopathogenicชีววิทยาเกษตร สถาบันแห่งชาติเกษตรวิทยาศาสตร์ สาธารณรัฐเกาหลี (Kim et al. 2013) A. ceranaผึ้งงานมี dissected บนน้ำแข็งโดยใช้วิธีการ(Zeiss, Jena เยอรมนี) ตัวอย่างเนื้อเยื่อ (หนังกำพร้า ไขมันร่างกาย ลำไส้ ต่อมพิษ) รวบรวม และถูกล้างกับน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS; 140mMNaCl, 27 มม.KCl, 8mMNa2HPO4 และ 1.5mMKH2PO4, pH 7.4) อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกแยกจากชั้นหนังกำพร้า ไขมันร่างกาย ลำไส้ และพิษต่อมของ A. cerana โดยใช้ชุดสกัด RNA รวม (Promega)รวม RNA (5 มิลลิกรัมเลน) เป็นแยกโดยใช้ 1.0%ฟอร์มาลดีไฮด์ agarose เจล โอนย้ายลงการ blotting วิธีไนล่อนเมมเบรน (Schleicher & Schuell, Dassel เยอรมนี) และไฮบริดที่ 42 C ด้วยโพรบที่เหมาะสมที่เจือจางในบัฟเฟอร์การ hybridization ที่ประกอบด้วย 5 SSC (โซเดียม 0.75 ม.คลอไรด์และ 0.75 M โซเดียมซิเตรต), 5 Denhardt โซลูชัน(ร้อยละ 0.1 แต่ละวัว serum albumin (บีเอสเอ), Ficoll และpolyvinylpyrrolidone), 0.5% โซเดียมซัลเฟต dodecyl (SDS),และเอทิลแอลกอฮอล์ 100 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรอสุจิปลาแซลมอนดีเอ็นเอ AcKTSPIcDNA ถูกกำกับ ด้วย a - 32P dCTP (ออก Amershamปิสกาตาเวย์ นิวเจอร์ซีย์ สหรัฐอเมริกา) ใช้นายกมัน II สุ่มชุด Labeling ไพรเมอร์ (Stratagene, La Jolla, CA, USA), และป้าย cDNA ถูกใช้เป็นโพรบสำหรับ hybridization หลังจากล้างตัวกรองเมมเบรน hybridization สามครั้งราคาชิ้นละ 30 นาทีใน 0.1% SDS และ 0.2 SSC ที่ 65 C แล้วสัมผัสกับฟิล์ม autoradiography

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

คิม et al., 2013) นอกจากนี้
ภมรพิษซีรีนน้ำย่อยแสดง antifibrinolytic
กิจกรรม (Choo et al, 2012;.. Qiu, et al, 2013).
ในฐานะที่เป็นหนึ่งในซีรีนน้ำย่อยครอบครัวยับยั้ง Kazaltype
ยับยั้งซีรีนโปรติเอส (KTSPIs) ประกอบด้วยหนึ่งหรือ
โดเมนที่ Kazal ซึ่ง มีสามสะพานซัลไฟด์
(Laskowski และ Kato 1980; แวนเดอ LOCHT, et al, 1995;. Schlott
, et al., 2002; มอร์ริสและคาร์รูเธอ, 2003 มอร์ริส, et al.,
2004; เทียนและ Kamoun 2005; et al, ฮัน 2008; Li et al,.
2009. Lu et al, 2012) KTSPIs ยังได้รับการระบุไว้ใน
แมลงเช่นแมลงดูดเลือด (ฟรีดริช et al, 1993;.
. Mende et al, 1999, 2004) (. Watanabe et al, 2010, ยุง
2011), ดักแด้ (Gandhe et al, 2006. เจิ้งเหอ, et al, 2007)
. แมลงหวี่ (Niimi, et al, 1999), ตั๊กแตน (Brillard-BOURDET
.. et al, 2006) และด้วง (Horita et al, 2010) เหล่าแมลง
KTSPIs ยับยั้ง chymotrypsin, trypsin, plasmin, thrombin,
elastase, โปร K หรือ subtilisin A. นอกจากนี้ KTSPIs
จากกุ้งน้ำจืดกบและงานนิทรรศการกุ้ง
จุลินทรีย์ที่มีผลผูกพันกิจกรรมและกิจกรรม bacteriostatic
(Han et al, 2008;. Li et อัล 2009;... Donpudsa et al, 2009)
KTSPI จากไฮดรายับยั้ง subtilisin และฆ่าเชื้อ Staphylococcus
aureus โดยตรง (Augustin et al, 2009). แม้ว่า
KTSPIs มาจากผึ้งที่พบในการค้นหาฐานข้อมูลบทบาท
ของ KTSPIs ผึ้งมายังคงค่อนข้างสำรวจ.
นอกจากนี้ไม่มีฤทธิ์ต้านจุลชีพของ KTSPIs ผึ้งมา
ได้แสดงให้เห็น.
ที่นี่เรารายงานผึ้งครั้งแรก (ผึ้งโพรง) venomderived
KTSPI (AcKTSPI ) ที่ทำหน้าที่เป็นจุลินทรีย์ซีรีน
น้ำย่อยยับยั้ง เรามีลักษณะโมเลกุล
ของสารยับยั้งนี้และแสดงให้เห็นว่ามันจัดแสดงนิทรรศการ
ยับยั้ง subtilisin A และโปรเคของเรา
ผลการอธิบายฤทธิ์ต้านจุลชีพของ AcKTSPI
ที่แสดงฤทธิ์ต้านแบคทีเรียแกรมบวกกับทั้ง
เชื้อแบคทีเรียและเชื้อรากิจกรรมกับ plantpathogenic
เชื้อราและแมลง.
ชีววิทยาการเกษตร , National Academy of การเกษตร
วิทยาศาสตร์สาธารณรัฐเกาหลี (Kim et al., 2013) รังผึ้งโพรง
ผึ้งงานที่ถูกชำแหละบนน้ำแข็งใช้สเตอริโอ
(Zeiss, เจเยอรมนี) ตัวอย่างเนื้อเยื่อ (หนังกำพร้าไขมัน
ร่างกายลำไส้และต่อมพิษ) ที่ถูกเก็บรวบรวมและล้าง
ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (พีบีเอส; 140mMNaCl, 27mm
KCl, 8mMNa2HPO4 และ 1.5mMKH2PO4 ค่า pH 7.4) อาร์เอ็นเอทั้งหมด
ถูกแยกออกจากผิวหนังชั้นนอกร่างกายไขมันลำไส้และพิษ
ต่อมของรังผึ้งโพรงโดยใช้ชุดรวม RNA สกัด (Promega).
RNA รวม (5 mg / เลน) ถูกแยกออกโดยใช้ 1.0%
เจลดีไฮด์ agarose, โอนไปยัง ไนลอนซับ
เมมเบรน (Schleicher & Schuell, Dassel, เยอรมนี) และ
ไฮบริดที่ 42 องศาเซลเซียสมีการสอบสวนที่เหมาะสมเจือจางใน
บัฟเฟอร์ที่มีการผสมข้ามพันธุ์ 5? เอสเอส (0.75 M โซเดียม
คลอไรด์และ 0.75 M โซเดียมซิเตรต) 5? วิธีการแก้ปัญหาของ Denhardt
(0.1% แต่ละวัวซีรั่มอัลบูมิ (BSA) Ficoll และ
polyvinylpyrrolidone), 0.5% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS)
และ 100 mg / ml เอทิลแอลกอฮอล์ดีเอ็นเอปลาแซลมอนสเปิร์ม AcKTSPI
cDNA ถูกกำกับด้วย [a-32P] dCTP (Amersham ชีววิทยาศาสตร์,
พิสแคต, นิวเจอร์ซีย์, สหรัฐอเมริกา) โดยใช้นายกรัฐมนตรี-It II สุ่ม
ชุดรองพื้นติดฉลาก (Stratagene, La Jolla, CA, USA) และ
ยีนที่มีข้อความที่ใช้เป็น สอบสวนสำหรับการผสมพันธุ์ หลังจาก
ผสมพันธุ์กรองเมมเบรนถูกล้างสามครั้ง
เป็นเวลา 30 นาทีในแต่ละ SDS 0.1% และ 0.2? SSC ที่ 65 องศาเซลเซียสและจากนั้น
สัมผัสกับ autoradiography ภาพยนตร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Kim et al . , 2013 ) นอกจากนี้เป็นตัวยับยั้งเอนไซม์โปรติเอสแสดง antifibrinolytic พิษผึ้งกิจกรรม ( ชู et al . , 2012 ; ชิว et al . , 2013 )เป็นหนึ่งในครอบครัว kazaltype เซอรีนโปรติเอสเอส ,เอนไซม์ protease inhibitors ( ktspis ) ประกอบด้วย หนึ่ง หรือkazal มากกว่าโดเมนซึ่งมีไดสะพานสาม( laskowski และ คาโต้ , 1980 ; ฟาน เดอ locht et al . , 1995 ; schlottet al . , 2002 ; Morris และ คาร์รัทเธอร์ , 2003 ; มอร์ริส et al . ,2004 ; เทียนและ kamoun , 2005 ; Han et al . , 2008 ; Li et al . ,2009 ; Lu et al . , 2012 ) ktspis ยังได้รับการระบุในแมลง เช่น แมลงดูดเลือด ( Friedrich et al . , 1993 ;อักษรเมนเด et al . , 1999 , 2004 ) ยุง ( วาตานาเบะ et al . , 2010 ,2011 ) ไหม ( gandhe et al . , 2006 ; เจิ้ง et al . , 2007 )แมลงหวี่ ( นีมิ et al . , 1999 ) ตั๊กแตน ( brillard bourdetet al . , 2006 ) และด้วง ( โฮริตะ et al . , 2010 ) แมลงเหล่านี้ktspis ยับยั้งเอนไซม์ไคโมทริปซินธรอมบินพลาสมิน , , , ,อีลาสเตสโปร , K , หรือ ktspis ซับทีลิซิน . นอกจากนี้จากน้ำจืด กุ้ง กบ กุ้ง จัดแสดงจุลินทรีย์และกิจกรรมกิจกรรม bacteriostatic ผูกพัน( Han et al . , 2008 ; Li et al . , 2009 ; donpudsa et al . , 2009 )ktspi จากไฮดรา และฆ่าแบคทีเรีย ยับยั้งซับทีลิซิน( โดยตรง ( Augustin et al . , 2009 ) ถึงแม้ว่าktspis จากผึ้งที่พบในการค้นหาฐานข้อมูล , บทบาทของผึ้งได้ ktspis ยังคงค่อนข้าง unexplored .นอกจากนี้ ไม่มีฤทธิ์ต้านจุลชีพของผึ้งได้ ktspisได้แสดงให้เห็นถึงที่นี่เรารายงานผึ้ง ( ผึ้งโพรง ) venomderivedktspi ( acktspi ) ที่ทำหน้าที่เป็นเอนไซม์จากจุลินทรีย์โปรตีเ นฮิบิเตอร์ . เรามีลักษณะโมเลกุลของตัวยับยั้งและแสดงให้เห็นว่ามันมากิจกรรมต่อต้านการยับยั้งซับทีลิซินและโปรตีนเคของเราผลลัพธ์อธิบายฤทธิ์ต้านจุลชีพของ acktspiที่แสดงทั้งกิจกรรมต่อต้านแบคทีเรียแกรมบวกแบคทีเรียและเชื้อรา plantpathogenic กับกิจกรรมแมลงที่ตายและเชื้อราชีววิทยาการเกษตร การเกษตร สถาบันการศึกษาแห่งชาติวิทยาศาสตร์ สาธารณรัฐเกาหลี ( Kim et al . , 2013 ) ผึ้งโพรงผึ้งงานเคยผ่าบนน้ำแข็งที่ใช้ stereomicroscope( Zeiss Jena , เยอรมนี ) ตัวอย่างเนื้อเยื่อ ( ผิวหนัง , ไขมันร่างกาย , ควักไส้ และล้างพิษต่อม ) ศึกษากับเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS 140mmnacl 27mm ; ,8mmna2hpo4 KCl และ 1.5mmkh2po4 pH 7.4 ) อาร์เอ็นเอทั้งหมดที่แยกได้จากผิวหนัง , ไขมันในร่างกาย , ดี , และพิษต่อมของ A . cerana โดยใช้ผลรวม RNA แยกชุด ( promega )อาร์เอ็นเอทั้งหมด ( 5 มก. / ช่อง ) ก็แยกใช้ 1.0 %ฟอร์มาลดีไฮด์เจลโอนไปยังไนลอน blottingเมมเบรน ( ไชลเคอร์ & schuell dassel , เยอรมัน , และ42 องศาเซลเซียส ) ที่เหมาะสมในตัวเจือจางสารบัฟเฟอร์ที่มี 5 SSC ( 0.75 เมตร โซเดียมคลอไรด์และโซเดียมซิเตรต ) 0.75 เมตร , 5 denhardt โซลูชั่น( 0.1% ของแต่ละอัลบูมิน ( BSA ) ficoll , และพอลิวินิลไพร์โรลิโดน ) , 0.5 % โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS )และ 100 มก. / มล. ใช้สเปิร์มของแซลมอน DNA acktspiยีนถูก a-32p ] กับ [ dctp ( ชาม ชีววิทยาปิสกาตาเวย์ , NJ , USA ) ใช้เฉพาะมันที่ 2 แบบสุ่มชุดฉลาก ไพรเมอร์ ( stratagene , La Jolla , CA , USA ) และป้าย cDNA ถูกใช้เป็นโพรบสำหรับลูกผสม หลังจากเบส , ไส้กรองเมมเบรน ซัก 3 ครั้ง30 นาทีในแต่ละ 0.1% SDS และ 0.2 SSC ที่ 65 C แล้วสัมผัสกับเก้าอี้รับแขกฟิล์ม