2.3. Microbial analysis and DNA ext

2.3. Microbial analysis and DNA extraction from cheese
Microbail analysis was performed on cheese after 1 day and at 1,3,6 and 9 months of ripening. Eleven g of cheese was homogenized (1:10 v/v) with 3MTM Flip-top Butterfield’s Buffer (3M, St.Paul, MN, USA) in a stomacher for 2 min at 260 rpm. Starters were enumerated in MRS agar (Difco BD, Frankin Lakes, NJ, USA). Lactobacillus spp. Were enumerated in RogosaSl agar (Difco BD). Non-starter lactic acid bacteria (NSLAB) were enumerated in Rogosa SL agar (Difco BD) with 6% (w/w) sodium chloride, this medium does allow the growth of Lb. helveticus (Johnson M.E., unpublished resalts). All plates were incubated at 32 C for 3 days anaerobically. For DNA extraction, homogenized cheese (30 ml) was centrifuged 5 min at 800 g at 4 C. Ten ml of the supernatant were collected in a sterile 15 ml tube and centrifuged 10 min at 12,000 g at 4 C. Cell pellet was washed with 1 ml of Butterfield’s Buffer (3M) nadcentrifuged . DNA was isolated with DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen) according to the manufacture instructions with minor changes. Lysozyme and proteinase K treatment were prolonged to 1 h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. จุลินทรีย์วิเคราะห์และสกัดดีเอ็นเอจากชีสMicrobail วิเคราะห์ดำเนินการบนชีหลัง จาก 1 วัน และ ที่ 1,3,6 และ 9 เดือนของสุก ก.สิบเอ็ดชีถูก homogenized (1:10 v/v) กับบัฟเฟอร์ 3MTM ด้านบนพลิก Butterfield (3m, St.Paul, MN สหรัฐอเมริกา) ในแผงประดับหน้าอกเป็น 2 นาทีที่ 260 รอบต่อนาที สตาร์ทเตอร์ก็ระบุในอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS (Difco BD, Frankin ทะเลสาบ นิวเจอร์ซีย์ สหรัฐอเมริกา) แลคโตบาซิลลัสออกซิเจนถูกนำในวุ้น RogosaSl (Difco BD) เริ่มต้นไม่ใช่กรดแลคติกแบคทีเรีย (NSLAB) ได้ระบุในวุ้น Rogosa SL (Difco BD) กับ 6% (w/w) โซเดียมคลอไรด์ สื่อนี้ให้เจริญเติบโตของ helveticus ปอนด์ (M.E. จอห์นสัน ยกเลิกประกาศ resalts) แผ่นทั้งหมดได้รับการกกที่ 32 C 3 วัน anaerobically สำหรับสกัดดีเอ็นเอ ชี homogenized (30 ml) คือผลิตภัณฑ์ที่ 800 กรัมที่ 4 C. 10 ml 5 นาที ของ supernatant ถูกรวบรวมไว้ในหลอดที่ปลอดเชื้อ 15 ml และ centrifuged 10 นาทีที่ 12,000 g ที่เม็ดเซลล์ค. 4 ถูกล้าง ด้วย 1 มล.ของ nadcentrifuged ของ Butterfield บัฟเฟอร์ (3 เมตร) ดีเอ็นเอถูกแยกกับ DNeasy เลือดและเนื้อเยื่อ Kit (Qiagen) ตามคำแนะนำการผลิตมีการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อย Lysozyme และ proteinase K รักษาได้เป็นเวลานานถึง 1 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การวิเคราะห์เชื้อจุลินทรีย์และการสกัดดีเอ็นเอจากชีส
วิเคราะห์ Microbail ได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับชีสหลังวันที่ 1 และวันที่ 1,3,6 และ 9 เดือนของการทำให้สุก Eleven กรัมชีสทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน (01:10 v / v) กับ 3MTM พลิกด้านบนฟีลด์ของบัฟเฟอร์ (3M, St.Paul, MN, USA) ใน Stomacher 2 นาทีที่ 260 รอบต่อนาที เริ่มถูกระบุใน MRS agar (Difco BD, Frankin Lakes, นิวเจอร์ซีย์, สหรัฐอเมริกา) Lactobacillus spp ถูกระบุใน RogosaSl วุ้น (Difco BD) ไม่เริ่มต้นแบคทีเรียแลคติก (NSLAB) ได้รับการระบุใน Rogosa SL วุ้น (Difco BD) กับ 6% (w / w) โซเดียมคลอไรด์ขนาดกลางนี้ไม่อนุญาตให้มีการเจริญเติบโตของปอนด์ helveticus (จอห์นสัน ME, resalts ไม่ถูกเผยแพร่) แผ่นทั้งหมดถูกบ่มที่อุณหภูมิ 32 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 วันแบบไม่ใช้อากาศ สำหรับการสกัดดีเอ็นเอชีสหดหาย (30 มล.) คือการหมุนเหวี่ยง 5 นาทีที่ 800 กรัมที่ 4 องศาเซลเซียสสิบมิลลิลิตรใสถูกเก็บไว้ในหลอด 15 มลหมันและปั่น 10 นาทีที่ 12,000 กรัมที่ 4 องศาเซลเซียสเซลล์เม็ดถูกล้างด้วย 1 มิลลิลิตรของฟีลด์ของบัฟเฟอร์ (3M) nadcentrifuged ดีเอ็นเอที่แยกกับ DNeasy เลือดและเนื้อเยื่อ Kit (Qiagen) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตที่มีการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อย ไลโซไซม์และโปร K การรักษาได้รับเป็นเวลานานถึง 1 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การวิเคราะห์จุลินทรีย์และการสกัดดีเอ็นเอจากชีสการวิเคราะห์ microbail คือใช้ชีส หลังจาก 1 วัน ที่ 1,3,6 9 เดือนของสุก 11 กรัมชีสมันบด ( 1 : 10 v / v ) กับ 3mtm พลิกยอดฟีลด์เป็นบัฟเฟอร์ ( 3M , St . Paul , MN , USA ) ในแผงประดับหน้าอกสำหรับ 2 นาทีที่ 260 รอบต่อนาที เริ่มถูกระบุใน MRS agar ( difco BD แฟรงคลิน เลคส์ , NJ , USA ) Lactobacillus spp . ) ที่ระบุใน rogosasl ( difco BD ) ไม่เชื้อแบคทีเรียกรดแล็กติก ( nslab ) ระบุใน rogosa SL ( difco BD ) กับ 6 % ( w / w ) โซเดียมคลอไรด์ กลาง นี้จะช่วยให้เจริญเติบโตของปอนด์ helveticus ( จอห์นสันนิติเวช พิมพ์ resalts ) ทุกแผ่นอุณหภูมิ 32 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 วันพ . การสกัดดีเอ็นเอ บดชีส ( 30 ml ) คือระดับ 5 นาทีที่ 10 ml 800 กรัมที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส และน่านเก็บตัวที่เป็นหมัน 15 ml หลอดไฟฟ้า 10 นาทีที่ 12 , 000 กรัม 4 . เซลล์เม็ดซัก 1 มิลลิลิตร บัตเตอร์ฟิลด์เป็นบัฟเฟอร์ ( 3M ) nadcentrifuged . ดีเอ็นเอที่แยกกับ dneasy เลือดและเนื้อเยื่อชุด ( เพิ่ม ) ตามการผลิตคำแนะนำที่มีการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อย ไลโซไซม์และการรักษาอยู่เป็นเวลานานถึง 1 ชั่วโมง เค โปร