using a cork knife. The samples were embedded in plastic tubes containing
O.C.T. compound (embedding medium, Tissue Tek, USA) and frozen
in liquid nitrogen. Freezing (below 80 C) occurred in approximately
50 s. The frozen specimens were stored at 80 C until sectioning.
The specimens were sectioned (10 lm) and frozen at
27 C in a cryostat (Leica CM1800, Heidelberg, Germany) for
transverse cuts. Cryo-sections were mounted on slides (Super-
Frost/Plus, 25 75 1.0 mm, Menzel-Gläser, Germany) and stored
at 80 C until staining. The sections were stained for 5 min in Orange
G (0.5 g of Orange G, 1 ml acetic acid dissolved in 99 ml distilled
water and filtered). The sections were washed with
distilled water and stained for 5 min in Methyl blue solution
(0.07 g Methyl blue, 1 ml acetic acid dissolved in 99 ml distilled
water and filtered). The stained samples were washed for 5 min
with distilled water before mounting with Mountex (Histolab
Products AB). This procedure resulted in yellow staining of muscle
protein, whereas collagen appeared as blue threads
ใช้ไม้มีด ตัวอย่างที่ฝังตัวอยู่ในหลอดพลาสติกที่มีo.c.t. สารประกอบ ( ฝังกลาง , เนื้อเยื่อเต็ก , USA ) และแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว การแช่แข็ง ( ด้านล่าง 80 C ) ที่เกิดขึ้นในประมาณ50 . แช่แข็งอุณหภูมิ 80 C ตัวอย่างจนวุ่น .ทำการตัด ( LM ) และแช่แข็งที่27 C ใน Cryostat ( Leica cm1800 , ไฮเดลเบิร์ก , เยอรมนี )การตัดตามขวาง ส่วนแช่แข็ง ติดบนสไลด์ ( ซุปเปอร์ฟรอสต์ / บวก 25 75 มม. Menzel GL และ , เซอร์ , เยอรมนี ) และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 80 C จนกระทั่ง staining ส่วนที่ใช้ย้อมเป็นเวลา 5 นาทีในสีส้มกรัม ( 0.5 กรัมต่อมิลลิลิตรกรดส้ม 1 ใน 99 ml น้ำกลั่นน้ำกรอง ) ส่วนที่ถูกล้างด้วยน้ำกลั่นและเปื้อนเป็นเวลา 5 นาทีในสารละลายสีน้ำเงิน เมทิล( 0.07 กรัมกรดเมทิลบลู 1 มิลลิลิตร ละลายใน 99 ml กลั่นน้ำกรอง ) การย้อมจำนวนซัก 5 นาทีด้วยน้ำกลั่นก่อนการติดตั้งกับ mountex ( histolabผลิตภัณฑ์ AB ) กระบวนการนี้ส่งผลในคราบสีเหลืองของกล้ามเนื้อโปรตีน และ คอลลาเจน ปรากฏเป็นหัวข้อสีฟ้า
การแปล กรุณารอสักครู่..
