Small-subunit rDNA clone libraries.

Small-subunit rDNA clone libraries. DNA isolated from the clay fraction of the AM treatment was used to create a 16S ribosomal DNA (rDNA) clone library. 16S rRNA genes were amplified by PCR with the primer 8f (59) under the PCR conditions (59) described above. PCR amplicons approximately 1,500 bp long were ligated into the pGEM-T plasmid vector (Promega) and transformed into Escherichia coli DH5a competent cells. After overnight transformation,single-cell colonies were transferred into 1.5-ml Eppendorf tubes containing 80 ml of TE buffer. Tubes were heated for 10 min at 95°C to lyse cells, chilled on ice, and centrifuged for 2 min at 13,000 rpm. Supernatants were used in subsequent PCRs

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เล็กย่อย rDNA โคลนไลบรารี ดีเอ็นเอแยกต่างหากจากเศษดินรักษา AM ที่ใช้สร้าง 16S ribosomal DNA (rDNA) โคลนรี มีขยายยีน 16S rRNA โดย PCR กับ 8f รองพื้น (59) ภายใต้เงื่อนไข PCR (59) ที่อธิบายไว้ข้างต้น PCR amplicons ประมาณ 1500 bp ยาวควบเป็นเวกเตอร์ plasmid pGEM T (Promega) และเปลี่ยนเป็น Escherichia coli เซลล์เชี่ยวชาญ DH5a หลังจากการเปลี่ยนแปลงบัตรกำนัล เซลล์เดียวอาณานิคมถูกโอนเข้าหลอด Eppendorf 1.5 ml ประกอบด้วย 80 ml บัฟเฟอร์ TE หลอดความร้อนใน 10 นาทีที่ 95° C ถึง lyse เซลล์ แช่ในน้ำแข็ง และ centrifuged สำหรับ 2 นาทีที่ 13000 รอบต่อนาที ใช้ supernatants ใน PCRs ตามมา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หน่วยย่อยขนาดเล็ก rDNA ห้องสมุดโคลน ดีเอ็นเอที่แยกได้จากดินเหนียวส่วนของการรักษา AM ถูกใช้ในการสร้าง 16S โซมอลดีเอ็นเอ (rDNA) ห้องสมุดโคลน ยีน 16S rRNA ถูกขยายโดยวิธี PCR ด้วยไพรเมอร์ที่ 8 (59) ภายใต้เงื่อนไข PCR (59) กล่าวไว้ข้างต้น PCR amplicons ประมาณ 1,500 bp ยาวถูกผูกเข้ากับพลาสมิด pGEM-T เวกเตอร์ (Promega) และกลายเป็นอีโค DH5a เซลล์อำนาจ หลังจากการเปลี่ยนแปลงค้างคืนอาณานิคมเซลล์เดียวที่ถูกโอนเข้ามาในหลอด Eppendorf 1.5 มล. 80 มล. ที่มีของบัฟเฟอร์ TE ท่อถูกความร้อนเป็นเวลา 10 นาทีที่ 95 ° C ถึง lyse เซลล์แช่เย็นบนน้ำแข็งและปั่นเป็นเวลา 2 นาทีที่ 13,000 รอบต่อนาที supernatants ถูกนำมาใช้ใน PCRs ที่ตามมา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เล็ก ๆซึ่งด้วยโคลนห้องสมุด ดีเอ็นเอที่แยกได้จากดินส่วนของคือการใช้เพื่อสร้าง 16S ไรโบโซมอลดีเอ็นเอ ( rDNA ) ห้องสมุดโคลน เบส 16S rRNA ยีนโดยขยาย PCR ด้วย primer 8f ( 59 ) ภายใต้เงื่อนไข PCR ( 59 ) ที่อธิบายข้างต้น PCR amplicons ประมาณ 1500 BP ยาวถูกผูกเข้า pgem-t plasmid เวกเตอร์ ( promega ) และเปลี่ยนเป็นเซลล์ Escherichia coli dh5a เชี่ยวชาญ หลังจากคืนการเปลี่ยนแปลงเซลล์เดียวไปเป็นอาณานิคม 1.5-ml เพนดอร์ฟหลอดที่มี 80 ml ของ TE buffer ท่อ คือร้อนสำหรับ 10 นาทีที่ 95 องศา C จะทำให้เซลล์ แช่เย็น น้ำแข็ง และไฟฟ้าสำหรับ 2 นาทีที่ 13 , 000 รอบต่อนาทีsupernatants ถูกใช้ใน pcrs ตามมา