Mammalian Neu3 is a ganglioside spe

Mammalian Neu3 is a ganglioside specific sialidase. Gangliosides are involved in various physiological events such as cell growth, differentiation and diseases. Significance of Neu3 and gangliosides is still unclear in aquaculture fish species. To gain more insights of fish Neu3 sialidases, molecular cloning and characterization were carried out in tilapia (Oreochromis niloticus). A tilapia genome-wide search for orthologues of human NEU1, NEU2, NEU3 and NEU4 yielded eight putative tilapia sialidases, five of which were neu3-like and designated as neu3a, neu3b, neu3c, neu3d and neu3e. Among five neu3 genes, neu3a, neu3d and neu3e were amplified by PCR from adult fish brain cDNA with consensus sequences of 1227 bp, 1194 bp and 1155 bp, respectively. Multiple alignments showed conserved three Asp-boxes (SXDXGXTW), YRIP and VGPG motifs. The molecular weights for Neu3a, Neu3d and Neu3e were confirmed using immunoblotting analysis as 45.9 kDa, 44.4 kDa and 43.6 kDa, respectively. Lysate from neu3 genes transfected HEK293 cells showed sialidase activity in Neu3a towards ganglioside mix optimally at pH 4.6. Using pure gangliosides as substrates, highest sialidase activity for Neu3a was observed towards GD3 followed by GD1a and GM3, but not GM1. On the other hand, sialidase activities were not observed in Neu3d and Neu3e towards various sialoglycoconjugates. Indirect immunofluorescence showed that tilapia Neu3a and Neu3d are localized at the plasma membrane, while most Neu3e showed a cytosolic localization. RT-PCR analyses for neu3a showed significant expression in the brain, liver, and spleen tissues, while neu3d and neu3e showed different expression patterns. Based on these results, tilapia Neu3 exploration is an important step towards full understanding of a more comprehensive picture of Neu3 sub-family of proteins in fish.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Mammalian Neu3 sialidase เฉพาะ ganglioside ได้ Gangliosides เกี่ยวข้องในเหตุการณ์ต่าง ๆ สรีรวิทยาเซลล์เจริญเติบโต สร้างความแตกต่าง และโรค ความสำคัญของ Neu3 และ gangliosides จะยังคงชัดเจนในพันธุ์ปลาการเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ เพื่อให้ได้ข้อมูลเชิงลึกเพิ่มเติมของปลา Neu3 sialidases โคลนและสมบัติได้ดำเนินการในปลานิล (Oreochromis niloticus) ปลานิลทั้งจีโนมหา orthologues ของมนุษย์ NEU1, NEU2, NEU3 และ NEU4 ที่เต็ม 8 นิล putative sialidases, 5 ซึ่งได้ เหมือน neu3 และกำหนด neu3a, neu3b, neu3c, neu3d และ neu3e หมู่ 5 ยีน neu3, neu3a, neu3d และ neu3e ถูกขยาย โดย PCR จาก cDNA สมองปลาผู้ใหญ่มีมติลำดับของ bp ช้าง 1194 bp และ 1155 bp ตามลำดับ จัดแนวหลายแสดงนำสาม Asp-กล่อง (SXDXGXTW), YRIP และ VGPG ลง น้ำหนักโมเลกุล Neu3a, Neu3d และ Neu3e ถูกยืนยันโดยใช้การวิเคราะห์ immunoblotting เป็น 45.9 kDa, 44.4 kDa 43.6 kDa ตามลำดับ Lysate จากยีน neu3 transfected HEK293 เซลล์พบกิจกรรม sialidase ใน Neu3a ต่อผสม ganglioside ที่ pH 4.6 อย่างเหมาะสม กิจกรรม sialidase สูงสุดสำหรับ Neu3a ใช้ gangliosides บริสุทธิ์เป็นพื้นผิว ถูกสังเกตต่อ GD3 ตาม GD1a และ GM3 แต่ไม่ GM1 บนมืออื่น ๆ กิจกรรม sialidase ไม่สุภัค Neu3d และ Neu3e ต่อ sialoglycoconjugates ต่าง ๆ Immunofluorescence ทางอ้อมพบว่าปลานิลที่ Neu3a และ Neu3d แปลที่เยื่อพลาสมา ในขณะที่ Neu3e ส่วนใหญ่พบว่าแปล cytosolic วิเคราะห์ RT-PCR สำหรับ neu3a แสดงนิพจน์สำคัญในเนื้อเยื่อสมอง ตับ และม้าม ในขณะที่ neu3d และ neu3e แสดงให้เห็นรูปแบบนิพจน์ต่าง ๆ ขึ้นอยู่กับผลลัพธ์เหล่านี้ นิล Neu3 สำรวจเป็นขั้นตอนสำคัญต่อความเข้าใจของรูปภาพที่ครอบคลุมมากขึ้นของครอบครัว Neu3 ย่อยโปรตีนในปลา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เลี้ยงลูกด้วยนม Neu3 เป็น sialidase เฉพาะ ganglioside แกงมีส่วนร่วมในการจัดกิจกรรมทางสรีรวิทยาต่างๆเช่นการเติบโตของเซลล์แตกต่างและโรค ความสำคัญของการ Neu3 และ gangliosides ยังคงไม่มีความชัดเจนในการเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำสายพันธุ์ปลา ที่จะได้รับข้อมูลเชิงลึกเพิ่มเติมของ sialidases Neu3 ปลาโคลนยีนและศึกษาคุณสมบัติได้ดำเนินการในปลานิล (Oreochromis niloticus) ค้นหาจีโนมทั้งปลานิลสำหรับ orthologues ของ NEU1 มนุษย์ NEU2, NEU3 และ NEU4 ผลแปด sialidases ปลานิลสมมุติห้าซึ่งเป็น neu3 เหมือนและกำหนดให้เป็น neu3a, neu3b, neu3c neu3d และ neu3e ในบรรดาห้ายีน neu3, neu3a neu3d และ neu3e ถูกขยายโดยวิธี PCR จากผู้ใหญ่ cDNA สมองปลาที่มีลำดับฉันทามติของ 1227 bp 1194 bp และ 1155 bp ตามลำดับ การจัดแนวหลายแสดงให้เห็นว่าการอนุรักษ์สามงูเห่ากล่อง (SXDXGXTW) YRIP และ VGPG สำคัญ น้ำหนักโมเลกุลสำหรับ Neu3a, Neu3d และ Neu3e ได้รับการยืนยันโดยใช้การวิเคราะห์ immunoblotting เป็น 45.9 กิโลดาลตัน 44.4 กิโลดาลตันและ 43.6 กิโลดาลตันตามลำดับ lysate จากยีน neu3 transfected เซลล์ HEK293 แสดงให้เห็นว่ากิจกรรมใน sialidase Neu3a ต่อการผสม ganglioside ได้อย่างดีที่สุดที่ pH 4.6 โดยใช้ gangliosides บริสุทธิ์เป็นพื้นผิวกิจกรรม sialidase สูงสุดสำหรับ Neu3a เป็นข้อสังเกตต่อ GD3 ตาม GD1a และ GM3 แต่ไม่ GM1 ในขณะที่กิจกรรม sialidase เขาไม่ได้ตั้งข้อสังเกตใน Neu3d และ Neu3e ต่อ sialoglycoconjugates ต่างๆ immunofluorescence อ้อมแสดงให้เห็นว่าปลานิล Neu3a และ Neu3d มีการแปลเป็​​นภาษาท้องถิ่นที่เมมเบรนพลาสม่าในขณะที่ส่วนใหญ่แสดงให้เห็น Neu3e แปล cytosolic RT-PCR การวิเคราะห์แสดงให้เห็น neu3a แสดงออกอย่างมีนัยสำคัญในเนื้อเยื่อสมองตับและม้ามขณะ neu3d และ neu3e แสดงให้เห็นว่ารูปแบบการแสดงออกที่แตกต่างกัน ขึ้นอยู่กับผลการเหล่านี้การสำรวจปลานิล Neu3 เป็นขั้นตอนที่สำคัญต่อความเข้าใจที่เต็มไปด้วยภาพที่ครอบคลุมมากขึ้นของ Neu3 ครอบครัวย่อยของโปรตีนในปลา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เขต neu3 เป็นแกงกลิโอไซด์เฉพาะไซ ลิเดส . มีส่วนร่วมในเหตุการณ์จับตัวสรีรวิทยาต่างๆเช่นการเจริญเติบโตของเซลล์ ที่แตกต่าง และโรค ความสำคัญของ neu3 จับตัวและยังไม่มีความชัดเจนในสายพันธุ์ปลา การเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำ เพื่อรับข้อมูลเชิงลึกเพิ่มเติมของปลา sialidases การโคลนและการศึกษาคุณสมบัติ neu3 , ทดลองในปลานิล ( Oreochromis niloticus )เป็นปลานิล genome-wide ค้นหา orthologues ของ neu1 มนุษย์ neu2 neu3 neu4 , และให้ผล sialidases ปลานิลซึ่งแปดห้าซึ่งเป็น neu3 ชอบและกำหนด neu3a neu3b neu3c , , , และ neu3d neu3e หมู่ 5 neu3 ยีน neu3a neu3d neu3e , และถูกขยายโดย PCR จากปลาผู้ใหญ่สมอง cDNA ด้วยลำดับของ 1227 เอกฉันท์ BP ใกล้ BP และ 1155 คู่เบส ตามลำดับมีหลายแนวร่วมอนุรักษ์ สามกล่อง ASP ( sxdxgxtw ) yrip vgpg และลวดลาย น้ำหนักโมเลกุลเพื่อ neu3a neu3d neu3e , และการใช้วิธีวิเคราะห์ที่ 45.9 kDa และ 44.4 kDa 43.6 กิโลดาลตัน ตามลำดับ lysate จาก neu3 ยีน transfected hek293 เซลล์พบว่าไซ ลิเดสกิจกรรมใน neu3a ต่อแกงกลิโอไซด์ผสมได้ดีที่ pH 4.6 . ใช้จับตัวที่บริสุทธิ์พื้นผิวกิจกรรม neu3a ไซ ลิเดสสูงสุดพบว่าต่อ gd3 และตามด้วย gd1a gm3 แต่ราคาถูก . บนมืออื่น ๆ , กิจกรรมไซ ลิเดสไม่พบใน neu3d neu3e ต่อและ sialoglycoconjugates ต่าง ๆ วิธีทางอ้อมพบว่า neu3a ปลานิลและ neu3d เป็นถิ่นที่เยื่อหุ้มเซลล์ ส่วน neu3e ส่วนใหญ่มีการ cytosolic .เทคนิคการวิเคราะห์สำหรับ neu3a อย่างมีนัยสำคัญแสดงออกใน สมอง ตับ และเนื้อเยื่อที่ม้าม และในขณะที่ neu3d neu3e พบรูปแบบการแสดงออกที่แตกต่างกัน จากผลการสำรวจ neu3 ปลานิล เป็นขั้นตอนสำคัญต่อความเข้าใจที่เต็มรูปแบบของภาพที่ครอบคลุมมากขึ้นของครอบครัว neu3 ย่อยโปรตีนในปลา