2.4. Protein extractionSamples were

2.4. Protein extraction
Samples were ground with a Cyclotec sample mill, model 1093
(Foss, Sweden) fitted with a 0.5 mm grid screen. Protein extraction
was performed using a suspension of 100mg of the sample powder
in 1.5 ml of the extraction buffer (7 M urea, 2 M thiourea, 4% (w/v)
CHAPS, 2% (v/v) ampholyte, 100 mM DTT, and 40 mM Tris), followed
by sonication and DNase treatment for 30 min at 4
C. The
samples were centrifuged at 10,000  g for 45 min, and then, the
supernatant was mixed with 6 N trichloroacetic acid. After incubation
at 20
C for 2 h, samples were centrifuged at 14,000 rpm
for 20 min. The protein pellet was washed 3 times with cold
acetone, dried, and resuspended in sample buffer (7 M urea, 2 M
thiourea, 4.5% CHAPS, 100 mM DTE, 40 mM Tris; pH 8.8). The
concentration of extracted proteins was determined by the Bradford
method (Bradford, 1976). One milligram of protein from each
sample was used for two-dimensional gel electrophoresis (2DE)
analysis

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. โปรตีนสกัดตัวอย่างถูกพื้นดินกับโรงสีอย่าง Cyclotec รุ่น 1093(ฟอสส์ สวีเดน) พร้อม มีหน้าจอตาราง 0.5 มม. โปรตีนสกัดดำเนินการระงับการ 100 มิลลิกรัมของผงตัวอย่างโดยใช้ใน 1.5 ml ของบัฟเฟอร์สกัด (ยูเรีย 7 M, 2 M thiourea, 4% (w/v)ตาม CHAPS, ampholyte 2% (v/v) 100 mM DTT และ 40 มม.ทริส),โดย sonication และรักษา DNase 30 นาทีที่ 4 cตัวอย่างได้จากที่ 10,000 g สำหรับ 45 นาที จาก นั้น การsupernatant ถูกผสมกับกรด trichloroacetic N 6 หลังจากบ่มที่ 20 C สำหรับ 2 h ตัวอย่างได้จากที่ 14,000 รอบต่อนาที20 นาที เม็ดโปรตีนถูกล้าง 3 ครั้ง ด้วยน้ำเย็นอะซิโตน แห้ง และ resuspended ในตัวอย่างบัฟเฟอร์ (ยูเรีย 7 เมตร 2 เมตรthiourea, CHAPS 4.5% หลัก ทริสเรทติ้ง 40 mM 100 mM pH 8.8) การกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนสกัด โดยแบรดฟอร์ดวิธีการ (แบรดฟอร์ด 1976) หนึ่งมิลลิกรัมโปรตีนจากแต่ละตัวอย่างใช้อิเจสองมิติ (2DE)วิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การสกัดโปรตีน
ตัวอย่างกับพื้นตัวอย่างโรงงาน Cyclotec รุ่น 1093
(ฟอสส์สวีเดน) พอดีกับหน้าจอ 0.5 ตารางมิลลิเมตร การสกัดโปรตีน
ถูกดำเนินการโดยใช้การระงับการ 100mg ของผงตัวอย่างที่
1.5 มล. ของบัฟเฟอร์สกัด (7 M ยูเรีย 2 M thiourea, 4% (w / v)
CHAPS, 2% (v / v) ampholyte, 100 มิลลิเมตร DTT และขนาด 40 มมทริส) ตาม
โดย sonication และการรักษา DNase 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส
ตัวอย่างที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000? กรัมเป็นเวลา 45 นาทีและจากนั้นที่
ใสผสมกับ 6 กรดไตรคลอโร N หลังจากการบ่ม
ที่ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงตัวอย่างถูกหมุนเหวี่ยงที่ 14,000 รอบต่อนาที
เป็นเวลา 20 นาที เม็ดโปรตีนถูกล้าง 3 ครั้งกับความหนาวเย็น
เล็บแห้งและ resuspended ในบัฟเฟอร์ตัวอย่าง (7 M ยูเรีย 2 M
thiourea, 4.5% CHAPS, 100 มิลลิเมตร DTE, 40 มิลลิเมตร Tris; ค่า pH 8.8)
ความเข้มข้นของโปรตีนที่สกัดได้เมื่อกำหนดโดยแบรดฟอ
วิธี (แบรด, 1976) หนึ่งมิลลิกรัมของโปรตีนจากแต่ละ
กลุ่มตัวอย่างที่ใช้สำหรับสองมิติ gel electrophoresis (2DE)
การวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การสกัดโปรตีนตัวอย่างดินด้วย cyclotec ตัวอย่างแบบที่โรงงาน( ฟอส , สวีเดน ) พอดีกับตาราง 0.5 มม. หน้าจอ การสกัดโปรตีนการใช้ชั่วคราวของตัวอย่างผง 100 มก.1.5 ml ของบัฟเฟอร์ที่แยก ( 7 M ยูเรีย Thiourea , 2 ม. 4 % ( w / v )Chaps , 2% ( v / v ) ampholyte DTT 100 มม. , และ 40 มิลลิเมตรโดย ) , ตามโดย sonication ตรวจหา ADNase และการ 30 นาทีที่ 4 ค .จำนวนระดับที่ 10 , 000 G สำหรับ 45 นาที , แล้วที่นำ มาผสมกับ 6 N กรดไตรคลอโรอะซิติก . หลังจากบ่มที่ 20 C 2 H , จำนวนไฟฟ้าที่ 14 , 000 รอบต่อนาที20 นาที โปรตีนเม็ด ซัก 3 ครั้ง กับ เย็นอะซิโตน , แห้ง , และตัวอย่าง resuspended ในบัฟเฟอร์ ( 7 M ยูเรีย , 2 ม.ไทโอยูเรียร้อยละ 4.5 Chaps , dte 100 มิลลิเมตรจาก 40 มม. ; พีเอช 8.8 ) ที่ความเข้มข้นของโปรตีนที่สกัดได้ถูกกำหนดโดยแบรดฟอร์ดวิธี Bradford , 1976 ) 1 มิลลิกรัมโปรตีนจากแต่ละตัวอย่างที่ใช้คือ gel electrophoresis ( 2de ) แบบสองมิติการวิเคราะห์