The number of R. solani internal tr

The number of R. solani internal transcribed spacer (ITS) copies was determined with SYBR Green real-time PCR ( Lievens et al. 2006). Real-time PCR amplifications were performed with a total volume of 50 μl of SYBR® Premix Ex Taq™ (TaKaRa, Dalian, China) on a PRISM® thermocycler (Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR, Applied Biosystems Inc., Foster City, CA, USA). Each PCR reaction contained 2 μl of the target DNA extract, 1 μl of Rox II, 25 μl of SYBR Green premix EX Taq (2×), 1 μl of primer ST-RS1 and ITS4 (10 μM, Table 1) and 20 μl of sterile distilled water. Thermal cycling conditions included 1 min at 95 °C followed by 40 amplification cycles of 10 s at 95 °C and 34 s at 60 °C. Fluorescence was detected during the second stage of each cycle. To evaluate amplification specificity, a melt curve analysis was performed at the end of each PCR run. A melt curve profile was obtained by continuously measuring fluorescence while heating the mixture to 95 °C, cooling to 60 °C (15 s), and slowly heating to 95 °C at 0.1 °C s−1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จำนวนของสำเนาที่เป็นตัวเว้นวรรคใช้ทับภายใน (ของ) R. solani ที่ถูกกำหนด ด้วย PCR แบบเรียลไทม์ SYBR Green (Lievens et al. 2006) Amplifications PCR แบบเรียลไทม์ได้กระทำกับปริมาตรรวมของ μl 50 ของ SYBR ® Premix Ex Taq ™ (TaKaRa ต้าเหลียน จีน) กับ thermocycler ®ปริซึม (ใช้ Biosystems 7500 Real-Time PCR ใช้ Biosystems Inc. ฟอสเตอร์ City, CA, USA) Μl 2 ของสารสกัดดีเอ็นเอเป้าหมายมีอยู่แต่ละปฏิกิริยา PCR, μl 1 ของ Rox II, μl 25 สีเขียว SYBR premix EX Taq (2 ราย), 1 μl พื้น ST RS1 และ ITS4 (10 μM ตารางที่ 1) และ μl 20 ของกอซกลั่นน้ำ สภาพความร้อนขี่จักรยานอยู่ 1 นาทีที่ 95 ° C ตามวงจรขยาย 40 10 s 95 ° C และ 34 s ที่ 60 องศาเซลเซียส Fluorescence ถูกตรวจพบในระหว่างขั้นตอนสองของรอบแต่ละรอบ ประเมิน specificity ขยาย การวิเคราะห์โค้งละลายที่ดำเนินการในตอนท้ายของ PCR แต่ละรัน โพรไฟล์โค้งละลายกล่าว โดยวัด fluorescence ขณะผสมถึง 95 ° C ระบายความร้อนถึง 60 ° C ความร้อนอย่างต่อเนื่อง (15 s), และเครื่องทำความร้อนได้ช้าถึง 95 ° C ที่ s−1 0.1 ° C

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จำนวน R. solani spacer ถ่ายทอดภายใน (ITS) สำเนาถูกกำหนดด้วยสีเขียว SYBR real-time PCR (Lievens et al. 2006) real-time PCR เครื่องขยายเสียงได้รับการดำเนินการกับปริมาณรวมของ 50 ไมโครลิตรของพรีมิกซ์SYBR® Ex Taq ™ (TaKaRa, ต้าเหลียน, จีน) บนเครื่อง thermocycler PRISM® (Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR, Applied Biosystems อิงค์สเตอร์ซิตี้ CA, USA) แต่ละปฏิกิริยา PCR ที่มี 2 ไมโครลิตรของสารสกัดดีเอ็นเอเป้าหมายที่ 1 ไมโครลิตรของ Rox ครั้งที่สอง 25 ไมโครลิตรของ SYBR กรีนพรีมิกซ์ EX Taq (2 ×) 1 ไมโครลิตรของไพรเมอร์ ST-RS1 และ ITS4 (10 ไมโครเมตรตารางที่ 1) และ 20 ไมโครลิตร น้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อ เงื่อนไขการขี่จักรยานความร้อนรวม 1 นาทีที่ 95 ° C ตามด้วย 40 รอบการขยายของ 10 วินาทีที่ 95 ° C และ 34 s ที่ 60 ° C เรืองแสงได้รับการตรวจพบในระหว่างขั้นตอนที่สองของแต่ละรอบ เพื่อประเมินความจำเพาะขยายการวิเคราะห์โค้งละลายได้ดำเนินการในตอนท้ายของแต่ละวิ่ง PCR รายละเอียดเส้นโค้งละลายได้โดยการวัดการเรืองแสงอย่างต่อเนื่องในขณะที่ความร้อนส่วนผสมถึง 95 ° C, ระบายความร้อนถึง 60 ° C (15 วินาที) และค่อย ๆ ร้อนถึง 95 ° C ที่ 0.1 ° C s-1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จํานวน R . solani ภายในและ spacer ( ITS ) ฉบับได้รับกลับคืนสีเขียว SYBR แบบ PCR ( lievens et al . 2006 ) เวลา PCR จริง amplifications จำนวนกับปริมาณ 50 μ L ของ SYBR ®รวมอดีตได้ดี™ ( Takara , Dalian , จีน ) ปริซึม®เทอร์มอไซเคล ์ ( Applied Biosystems 7500 จริงเวลา PCR , Applied Biosystems อิงค์ , Foster City , CA , USA )แต่ละเทคนิคปฏิกิริยาที่มีอยู่ 2 μ L ของดีเอ็นเอเป้าหมายสกัด 1 ลิตรμ Rox 2 , 25 μลิตรสีเขียว SYBR รวมอดีตได้ดี ( 2 × ) 1 μลิตรและ st-rs1 รองพื้น its4 ( 10 μ M , ตารางที่ 1 ) และ 20 μผมเป็นหมันของน้ำกลั่น เงื่อนไขการขี่จักรยานการระบายความร้อนอยู่ 1 นาทีที่ 95 องศา C ตาม 40 ( รอบ 10 ที่ 95 องศา C และ 34 s ที่ 60 องศา โดยถูกตรวจพบในระหว่างขั้นตอนที่สองของแต่ละรอบเพื่อประเมินการเพิ่มความจำเพาะ ละลายโค้งการวิเคราะห์ในตอนท้ายของแต่ละเทคนิควิ่ง ละลายโค้งโปรไฟล์ได้โดยต่อเนื่องการวัดการเรืองแสงในขณะที่ความร้อนผสมกับ 95 องศา C เย็น 60 °องศาเซลเซียส ( 15 ) และค่อยๆ ร้อนถึง 95 องศา C ที่ 0.1 องศา C − 1