The resultant crude enzyme extracti

The resultant crude enzyme extraction was submitted to puri-
fication of tannase by the method of Mata-Gomez (
Marco et al.,
2009). The crude enzyme solution was precipitated by ammonium
sulfate in a saturation range of 60e90% at 4
C for 3 h followed
by centrifugation in an Avanti J-25 centrifuge using a JA10 rotor
(Beckman Coulter, USA) at 17,700 g (10,000 r/min) and 4
C for
20 min. The resultant pellet was extensively dialyzed in a 30 kDa
cut-off dialysis tube against 10 mmol/L sodium citrate buffer (pH
5.0) at 4
C for 24 h, and subsequently separated on a DEAESepharose
column (2 20 cm) previously equilibrated with
10 mmol/L sodium citrate buffer (pH 5.0). After gradient elution
with 0e1 mol/L NaCl in 10 mmol/L sodium citrate buffer (pH 5.0),
tannase fractions which were pooled within 0.3e0.5 mol/L NaCl
was concentrated by ultrafiltration through an Amicon Ultra-4
Centrifugal Filter Unit (cut-off at 30 KDa), and further applied to a
Sephacyl S-200 HR column (1.6 100 cm) followed by elution with
50 mmol/L sodium citrate buffer at 0.5 mL/min. The purification
steps yielded a tannase solution with an enzymatic activity of
89.33 U/mL, protein concentration of 0.91 mg/mL, specific activity
of 97.84 U/mg. The enzyme was kept at 4
C and diluted to a
desirable concentration before use.
2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสกัดเอนไซม์ผลถูกส่งไปยัง puri-
การตรวจของ tannase โดยวิธีการ Mata-โกเมซ (มาร์โก et al.,
2009) วิธีการแก้ปัญหาเอนไซม์ถูกตกตะกอนโดยแอมโมเนียมซัลเฟตอยู่ในช่วงอิ่มตัวของ 60e90% ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 ชั่วโมงตามโดยการหมุนเหวี่ยงในAvanti J-25 centrifuge ใช้โรเตอร์ JA10 (Beckman Coulter สหรัฐอเมริกา) ที่ 17,700 g (10,000 รอบ / นาที) และ 4 องศาเซลเซียสสำหรับ20 นาที เม็ดผลที่ได้รับการ dialyzed อย่างกว้างขวางใน 30 กิโลดาลตันท่อล้างไตตัดกับ10 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมบัฟเฟอร์ซิเตรต (pH 5.0) ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและแยกออกจากกันต่อมาใน DEAESepharose คอลัมน์ (2 20 เซนติเมตร) equilibrated ก่อนหน้านี้ด้วย10 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์ (pH 5.0) หลังจากชะลาดกับ 0e1 โมล / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ใน 10 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์ (pH 5.0) เศษส่วน tannase ซึ่งถูกรวบรวมภายใน 0.3e0.5 โมล / ลิตรโซเดียมคลอไรด์เป็นความเข้มข้นโดยกรองผ่านAmicon อัลตร้า 4 หน่วยกรองแรงเหวี่ยงหนีศูนย์ ( ตัดวันที่ 30 KDa) และนำไปใช้ต่อไปSephacyl S-200 คอลัมน์ HR (1.6 ซม. 100) ตามด้วยชะกับ50 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์ที่ 0.5 มิลลิลิตร / นาที บริสุทธิ์ขั้นตอนการแก้ปัญหาผล tannase ที่มีกิจกรรมของเอนไซม์ 89.33 U / มิลลิลิตรความเข้มข้นของโปรตีน 0.91 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรกิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของ97.84 U / mg เอนไซม์ที่ถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสและเจือจางไปที่ความเข้มข้นที่พึงประสงค์ก่อนการใช้งาน. 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ซึ่งเป็นเอนไซม์ที่สกัดถูกส่งไปยังปุริ -
fication ของแทนเนสโดยวิธีการของ มาตา โกเมซ (
มาร์โค et al . ,
2009 ) เอนไซม์ตกตะกอนด้วยแอมโมเนียม ซัลเฟตในสารละลายอิ่มตัว
ในช่วง 60e90 % 4
C 3 H ตาม
โดยปั่นในเครื่องปั่นเหวี่ยง AVANTI j-25 ใช้ ja10 ใบพัด
( Beckman Coulter , USA ) ที่ 17700 g , r / min ) และ 4
C
20 นาทีเม็ดที่ผ่านซึ่งเป็นอย่างกว้างขวางใน 30 kDa
ตัดท่อไตต่อ 10 mmol / L โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ pH
5.0 ) ที่ 4
เป็นเวลา 24 ชั่วโมง และต่อมาได้แยกออกเป็น deaesepharose
คอลัมน์ ( 20 ซม. ) ก่อนหน้านี้ equilibrated กับ
10 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ pH 5.0 ) หลังจากไล่ระดับด้วย (
0e1 โมลต่อลิตร เกลือ 10 mmol / L โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ pH 5.0 ) ,
แทนเนสเศษส่วนซึ่งรวมภายใน 0.3e0.5 โมลต่อลิตร เกลือ
ข้น โดยกรองผ่าน amicon ultra-4
แรงเหวี่ยงกรองหน่วย ( ตัดที่ 30 kDa ) และยังใช้กับ
sephacyl s-200 HR คอลัมน์ ( 1.6 100 ซม. ) ตามด้วย (
50 mmol / L โซเดียมซิเตรตบัฟเฟอร์ ที่ 0.5 มล. / นาทีผลิต
ขั้นตอนจากสารละลายด้วยเอนไซม์แทนเนสของ
89.33 U / ml .ความเข้มข้นของโปรตีนมิลลิกรัม ( มล.
กิจกรรมจำเพาะของ 97.84 U / mg เอนไซม์ที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส และ
เจือจางในความเข้มข้นที่พึงปรารถนา

2 ก่อนใช้