The frozen leaf sample was homogeni

The frozen leaf sample was homogenized using a chilled mortar and pestle with cooled extraction buffer containing 50 mM Tris–HCl (pH 7.5), 1 mM ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA), 1 mM MgCl2, 12.5% (v/v) glycerin, 10% poly vinyl pyrrolidone (PVP), and 10 mM -mercaptoethanol. The homogenate was centrifuged at 15,000 × g for 15 min at 4 ◦C.Rubisco activity was determined spectrophotometrically by coupling 3-phosphoglyceric acid formation with NADH oxidation at 25 ◦C according to Nakano et al. [26] with some modifications. The total activity was assayed after the crude extract was activated in a 0.2 mL activation mixture containing 50 mM HEPES–NaOH, pH 8.0, 0.67 mM EDTA, 33 mM MgCl2, and 10 mM NaHCO3 for 10 min. Initial Rubisco activity measurements were carried out in a 0.9 mL reaction medium containing 50 mM HEPES–NaOH (pH 8.0), 10 mM NaHCO3, 20 mM MgCl2, 2.5 mM dithiothreitol, 1 mM EDTA, 10 U creatine phosphokinase, 10 U 3-phosphoglyceric phosphokinase, 10 U glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, 5 mM ATP, 0.15 mM NADH, 5 mM phosphocreatine, 0.6 mM RuBP, and 0.1 mLextract. The change in absorbance at 340 nm was monitored for 90 s.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างใบแช่แข็งถูก homogenized เป็นกลุ่มด้วยการเย็นโกร่งบัฟเฟอร์สกัดเย็น ๆ ประกอบด้วย 50 mM ตรี – HCl (pH 7.5), 1 มม.เอทิลีน diamine tetraacetic กรด (EDTA), 1 mM MgCl2 กลีเซอรีน 12.5% (v/v) 10% โพลีไวนิล pyrrolidone (PVP), และ 10 มม. - mercaptoethanol Homogenate ถูก centrifuged ที่ 15000 × g สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ◦C.Rubisco กิจกรรมได้ตาม spectrophotometrically coupling ก่อตัวกรด 3-phosphoglyceric กับออกซิเดชัน NADH ที่ 25 ◦C ตามนากาโนะ et al. [26] มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง กิจกรรมทั้งหมดถูก assayed หลังจากสกัดน้ำมันถูกเรียกใช้ในส่วนผสมเปิดใช้งาน 0.2 mL ประกอบด้วย 50 mM HEPES – NaOH, pH 8.0, 0.67 mM EDTA, MgCl2 33 มม. และ 10 มม. NaHCO3 ใน 10 นาทีแรก Rubisco กิจกรรมวัดได้ดำเนินการกลางปฏิกิริยา 0.9 mL ประกอบด้วย 10 มม. NaHCO3, MgCl2 20 มม. 50 มม. HEPES – NaOH (pH 8.0), , dithiothreitol 2.5 มม. EDTA 1 มม. phosphokinase นื้คือ U 10, 10 U 3-phosphoglyceric phosphokinase, dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต U 10, 5 มม. ATP, NADH 0.15 มม. phosphocreatine 5 มม. 0.6 มม. RuBP และ 0.1 mLextract การเปลี่ยนแปลง absorbance ที่ 340 nm ถูกตรวจสอบใน 90 s

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างใบแช่แข็งทำให้เป็นเนื้อเดียวกันโดยใช้ปูนแช่เย็นและสากกับบัฟเฟอร์สกัดเย็นที่มี 50 มิลลิ Tris-HCl (pH 7.5) 1 มิลลิ diamine เอทิลีนกรด tetraacetic (EDTA) 1 มิลลิ MgCl2 12.5%​​ (v / v) กลีเซอรีน 10% pyrrolidone โพลีไวนิล (PVP) และ 10 มิลลิ? -mercaptoethanol homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 15,000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 กิจกรรม◦C.Rubiscoถูกกำหนดโดยการแต่งงาน spectrophotometrically กรด 3 phosphoglyceric กับการเกิดออกซิเดชัน NADH ที่ 25 ◦Cตาม Nakano et al, [26] มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง กิจกรรมทั้งหมดที่ได้รับการวิเคราะห์หลังจากที่สารสกัดถูกเปิดใช้งานในส่วนผสมยืนยันการใช้งาน 0.2 มิลลิลิตรที่มี 50 มิลลิ HEPES-NaOH ค่า pH 8.0 0.67 มิลลิ EDTA, 33 มิลลิ MgCl2 และ 10 มิลลิ NaHCO3 เป็นเวลา 10 นาที กิจกรรม Rubisco เบื้องต้นวัดได้ดำเนินการในกลางปฏิกิริยามิลลิลิตร 0.9 มี 50 มิลลิ HEPES-NaOH (pH 8.0), 10 มิลลิ NaHCO3 20 มิลลิ MgCl2 2.5 มิลลิ dithiothreitol 1 มิลลิ EDTA, 10 ยูรี phosphokinase 10 U 3 phosphoglyceric phosphokinase 10 U dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต 5 มิลลิเอทีพี NADH 0.15 มิลลิ 5 มิลลิ phosphocreatine 0.6 มิลลิ RuBP และ 0.1 mLextract การเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงที่ 340 นาโนเมตรได้รับการตรวจสอบเป็นเวลา 90 วินาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แช่แข็งแช่เย็นบดใบตัวอย่างใช้ครกและสากกับเย็นใช้สารที่มี 50 มม. โดย– HCl ( pH 7.5 ) , 1 มม. เอทิลีนไดอะ tetraacetic acid ( EDTA ) , MgCl2 1 มม. , 12.5 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กลีเซอรีน , 10% โพลีไวนิล pyrrolidone ( PVP ) และ  - 10 มม. mercaptoethanol . โดยแยกเป็นระดับที่ 15000 × G สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ◦ Cกิจกรรม rubisco ตั้งใจนี้ควบคู่ 3-phosphoglyceric กรดเกิดกับการออกซิเดชันที่อุณหภูมิ 25 C ตาม◦นากา et al . [ 26 ] กับการปรับเปลี่ยน กิจกรรมทั้งหมดที่ถูก assayed หลังจากสกัดถูกใช้งานในการกระตุ้น 0.2 มล. ผสมที่ประกอบด้วย 50 มิลฮีเปส ( NaOH , pH 8.0 , 0.67 มม. EDTA , MgCl2 33 มิลลิเมตรและ 10 มิลลิเมตรโซเดียมไบคาร์บอเนตนาน 10 นาทีการวัดกิจกรรม rubisco เริ่มต้นดำเนินการใน 0.9 ml ปฏิกิริยาปานกลาง ประกอบด้วย 50 mm ฮีเปส ( NaOH ( pH 8.0 ) , โซเดี่ยมชุด 10 มม. 20 มม. บัตรแข็ง 2.5 มม. 1 mM EDTA 10 U U 3-phosphoglyceric Creatine phosphokinase 10 5 , 10 และ glyceraldehyde-3-phosphate เอนไซม์ ATP , NADH 5 มิลลิเมตร phosphocreatine 0.15 มิลลิเมตร 5 มิลลิเมตร rubp 0.6 มิลลิเมตร และ 0.1 mlextract .การเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงที่ 340 nm การ 90 s