2.3. In vitro fertilization (IVF)IV

2.3. In vitro fertilization (IVF)
IVF took place in droplets (90L) containing tyrode albumin lactate pyruvate (TALP) supplemented
with 6mg/mL fatty acid free BSA (Sigma–Aldrich), 100mMsodium pyruvate (Sigma–Aldrich),
75g/mL gentamicin (Sigma–Aldrich), 11g/mL heparin and 44g/mL PHE (2mM penicillamine,
1mM hypotaurine, 250mM epinephrine; Sigma–Aldrich).
All experiments were carried out using frozen semen from Nelore or Angus bulls. A different bull
(from a total of two Nelore and two Angus) was used for each replicate to diminish bull effect. Semen
was thawed in a 37◦C for 20 s and spermatozoa were washed in a discontinuous Percoll gradient
(Pharmacia, Uppsala, Sweden) prepared by adding 2mL of 45% Percoll to 2mL of 90% Percoll in a
15mL centrifuge tube (Cornning®). The semen samples were added on the top of Percoll gradient and
centrifuged at 900×g for 25min. After removal of the supernatant, spermatozoa were re-suspended
in IVF medium, counted in a Neubauer chamber and sperm suspension (10l of a final concentration
= 1×106 cells/mL) was added into each droplet. Incubation was carried out at 39 ◦C in a saturated
humidity atmosphere containing 5% CO2 and 95% air for 10–14 h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. การเพาะเลี้ยงการปฏิสนธิ (IVF)IVF ทำในหยด (90 L) ประกอบด้วย tyrode albumin lactate pyruvate (TALP) เสริม6mg/mL มี กรดไขมันอิสระบีเอสเอ (ซิก-Aldrich), pyruvate 100mMsodium (ซิก-Aldrich),gentamicin 75 g/mL (ซิก-Aldrich), เฮพาริน 11 g/mL และ 44 g/mL เพ (penicillamine 2 มม.มม. 1 hypotaurine อะดรีนาลิน 250 มม. Sigma–Aldrich)การทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการโดยใช้น้ำเชื้อแช่แข็งจากวัว Angus หรือ Nelore ตำรวจแตกต่างกัน(จากทั้งสอง Nelore และสอง Angus) ใช้สำหรับจำลองแต่ละหรี่ผลวัว น้ำเชื้อเป็น thawed ในการ 37◦C สำหรับ 20 s และ spermatozoa ถูกล้างในไล่ Percoll ไม่ต่อเนื่อง(Pharmacia, Uppsala สวีเดน) เตรียม โดยการเพิ่มมล 2 45% Percoll ไป 2mL 90% Percoll ในการ15mL เครื่องหมุนเหวี่ยงท่อ (Cornning ®) ตัวอย่างน้ำเชื้อเพิ่มด้านบนไล่ระดับ Percoll และcentrifuged ที่ 900 × g สำหรับ 25 นาที หลังจากเอาของ supernatant, spermatozoa ถูกเลื่อนออกไปอีกIVF กลาง นับใน Neubauer หอการค้าและสเปิร์มระงับ (10 ลิตรความเข้มข้นสุดท้าย= 1 × 106 เซลล์/มล.) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละหยดนั้น คณะทันตแพทยศาสตร์ได้ดำเนินการที่ ◦C 39 ในการอิ่มตัวบรรยากาศความชื้น 5% CO2 และอากาศ 95% h 10-14

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 ในปฏิสนธิในหลอดทดลอง (IVF)
ผสมเทียมเกิดขึ้นในหยด (90 ลิตร) ที่มีไพรูนมอัลบูมิ tyrode (TALP)
เสริมด้วย6mg / mL กรดไขมันอิสระบีเอสเอ (Sigma-Aldrich) ไพรู 100mMsodium (Sigma-Aldrich)
75? กรัม / mL gentamicin (Sigma-Aldrich) 11 กรัม / เฮมิลลิลิตรและ 44 กรัม / มิลลิลิตรเพ (2mm penicillamine,?
1 mM hypotaurine, อะดรีนาลีน 250mm; Sigma-Aldrich).
การทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการโดยใช้น้ำเชื้อแช่แข็งจาก Nelore หรือวัวแองกัส . วัวที่แตกต่างกัน
(จากทั้งหมดสอง Nelore และสองแองกัส) ถูกนำมาใช้สำหรับแต่ละซ้ำเพื่อลดผลกระทบวัว น้ำอสุจิที่ถูกละลายใน37◦C 20 และตัวอสุจิถูกล้างในการไล่ระดับสี Percoll ต่อเนื่อง (Pharmacia อัปซาลา, สวีเดน) จัดทำขึ้นโดยการเพิ่ม 2mL 45% Percoll เพื่อ 2mL 90% Percoll ในหลอดcentrifuge 15ml (Cornning®) . กลุ่มตัวอย่างน้ำอสุจิที่ถูกเพิ่มที่ด้านบนของการไล่ระดับสี Percoll และหมุนเหวี่ยงที่ 900 ×กรัมสำหรับ 25 นาที หลังจากที่การกำจัดของสารละลายที่สเปิร์มเป็นอีกครั้งที่ถูกระงับในสื่อผสมเทียมนับในห้อง Neubauer และระงับสเปิร์ม (10 ลิตรความเข้มข้นสุดท้าย = 1 × 106 เซลล์ / มิลลิลิตร) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละหยด บ่มเพาะได้ดำเนินการที่ 39 ◦Cอิ่มตัวในบรรยากาศที่มีความชื้น5% CO2 และอากาศ 95% สำหรับ 10-14 ชั่วโมง