There is further provided a method

There is further provided a method of treatment of a human or animal subject, which
method ประกอบรวมด้วยs administering a therapeutically effective amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้.

There is further provided a method of treatment of a disease associated with the
involvement of pathogenic T cells in a human or animal subject ซึ่ง ประกอบรวมด้วย administering a
therapeutically effective amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้.
There is further provided a method of treatment of psoriasis, โรคโครห์น, rheumatoid 5 arthritis, primary biliary cirrhosis, systemic lupus erythematosus (SLE), Sj6gren's syndrome, multiple
sclerosis, ลำไส้ใหญ่ อักเสบ ชนิดแผลเรื้อรัง or autoimmune hepatitis, which method ประกอบรวมด้วยs administering to a
human subject in need thereof, a therapeutically effective amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of
the การประดิษฐ์นี้.
In a further รูปลักษณะ, there is provided a method of treatment of psoriasis, which 10 method ประกอบรวมด้วยs administering to a human subject in need thereof, a therapeutically effective
amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้.
In a further รูปลักษณะ, there is provided a method of treatment of โรคโครห์น, which method ประกอบรวมด้วยs administering to a human subject in need thereof, a therapeutically effective
amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้.
15 In a further รูปลักษณะ, there is provided a method of treatment of ลำไส้ใหญ่ อักเสบ ชนิดแผลเรื้อรัง, which
method ประกอบรวมด้วยs administering to a human subject in need thereof, a therapeutically effective amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้.
The phrase "therapeutically effective amount" as used herein is an amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้ required to ameliorate or reduce one or more symptoms of,
20 or to prevent or cure, the disease.

Examples
The following Examples illustrate but do not limit the การประดิษฐ์.

25 Example 1: BiacoreTM SPR analysis of purified anti-LAG-3 ฮิวเมไนซ์ antibodies

A9H12 (IMP731), as disclosed in WO 2008/132601, was ฮิวเมไนซ์ by grafting murine CDRs
onto two heavy and two สายเบา human acceptor เฟรมเวิร์คs. A number of heavy and สายเบา
ฮิวเมไนซ์ anti-LAG-3 รูปแปรผันs were prepared, containing human to murine back mutations and 30 CDR modifications. สายหนัก รูปแปรผันs were numbered HO to H8, and JO, J7 to J13 and สายเบา
รูปแปรผันs were numbered LO to L10 and MO to Ml. Tissue culture supernatants containing all
combinations of heavy and สายเบา ฮิวเมไนซ์ anti_LAG-3 รูปแปรผันs were analysed for binding to
Fc-tagged recombinant soluble LAG-3 (IMP321). The data was analysed using a 1:1 model inherent
to the BiacoreTM 4000 software. Antibodies were selected based on calculated affinities and also by 35 visual comparison of binding sensorgrams with the chimeric antibody IMP731. A total of 54
constructs that exhibited equivalent or improved binding for IMP321 were identified for re-analysis

using a Biacorem 3000. Data was fitted to both the 1:1 and bivalent models, inherent to the BiaCore 3000 analysis software, and binding data was compared by normalising the binding curves at maximal association and comparing off-rates against IMP731 visually. This enabled antibodies that
demonstrated improved off-rates in comparison to IMP731 to be discerned. A total of 18 ฮิวเมไนซ์ 5 anti-LAG-3 antibodies were selected for further analysis on the basis of either equivalent or
improved binding kinetics to recombinant sLAG-3 in comparison to IMP731. These 18 ฮิวเมไนซ์
antibodies were re-expressed and analysed as follows:

Anti-LAG-3 ฮิวเมไนซ์ antibodies were expressed in HEK 293 6E cells and purified by แอฟฟินิตี้
10 chromatography as follows:

100m1 scale HEK 293 6E expression
Expression plasmids encoding heavy and สายเบาs of the ฮิวเมไนซ์ antibodies identified in Table 3 were transiently co-ทรานสเฟคต์ into HEK 293 6E cells and expressed at 100m1 scale to
15 produce antibody.

Purification of ฮิวเมไนซ์ antibodies
The expressed antibody molecules were purified by แอฟฟินิตี้ chromatography. Protein A
sepharose beads (GE Healthcare Cat No 17-5280-04), were added to the cell culture supernatants 20 and mixed at room temperature for 30-60 minutes. The protein A sepharose beads were then
centrifuged and washed in PBS. The mixture was then added into a 10m1 disposable column (Pierce
Cat No: 29924) and the PBS allowed to drain. The column was washed 3 times with 10m1 PBS
before elution of the antibody with IgG Elution buffer (Pierce Cat No: 21009). The antibody eluted
was immediately neutralized using 1M Trizma® hydrochloride buffer (T2819) and was then buffer 25 exchanged into PBS with a Vivaspin 6 mwco 5000 column (Cat. No.: FDP-875-105D). The yield was
determined by measurement of absorbance at 280nm. The level of aggregated protein in the
purified sample was determined by size exclusion chromatography.

Binding Kinetics
30 The binding kinetics of the purified antibodies for a sLAG-3 molecule were assessed by SPR
using a BiacoreTM 3000. A goat anti-human kappa antibody (Southern Biotech, Catalogue No. 2060-
01) was immobilised on a CM5 chip by primary amine coupling. ฮิวเมไนซ์ anti-LAG3 antibodies were captured on this surface and the LAG3-Ig molecule IMP321 (Chrystelle Brignone, Caroline
Grygar, Manon Marcu, Knut Schakel, Frederic Triebel, The Journal of Immunology, 2007, 179: 4202-
35 4211) used as the analyte at 64nM with a buffer injection (i.e. OnM) used to double reference the
binding curves. Regeneration was with 10mM Glycine, pH1.5. The run was carried out on the
BiacoreTM 3000, using HBS-EP as running buffer and at 25°C. Sensorgrams were normalised for
27

binding at maximal association and off-rates compared against IMP731 by visual inspection of the sensorgram profiles.
The results show that the purified ฮิวเมไนซ์ anti-LAG-3 antibodies can be categorised into
3 groups; group 1 with ฮิวเมไนซ์ รูปแปรผันs that appear to be better at binding to IMP32 'than the

5

10

15

chimeric IMP731, group 2 with รูปแปรผันs that appear to bind in a very similar manner to IMP731 and group 3 with รูปแปรผันs that demonstrate worse binding than IMP731.
10 ฮิวเมไนซ์ รูปแปรผันs fall within group 1 and demonstrate improved (i.e. reduced) off-rates when compared to IMP731 by visual inspection of the BiacoreTM sensorgrams. All of these molecules contained the L7 สายเบา, which contains a glycine to proline substitution at position 27e in สายเบา CDR1. This data indicates that proline at position 27e improves the off-rate for IMP321 of the ฮิวเมไนซ์ anti-LAG-3 antibodies when paired with numerous ฮิวเมไนซ์ สายหนักs.
Of the remaining antibodies tested, 4 molecules fall within group 2 and had similar off-rates
to the chimeric IMP731 antibody, while 4 other molecules fall within group 3 and exhibit worse off-
rates than IMP731. Table 3 provides an approximate ranking of those molecules in comparison to
IMP731. H5L7 exhibits the best off-rate (i.e. lowest) in this experiment by visual inspection of the
BiacoreTM sensorgrams.

Table 3: Comparison of off-rates with IMP731

.= ..;>: , ::-4 :;,.,::4:: ^.:'Ft , : '
' . .-

ฮิวเมไนซ์.รูปแปรผัน Off-ratecomparison with IMP731, R order of off-rates
* ..A- 1e .;-,,..,% . .2.
H5L7 better 1
H1L7 better 2
J7L7 better 3
H4L7 better 4
311L7 better 5
H2L7 better 6
J13L7 better 7
H7L7 better 8
J0L7 better 9
H0L7 better 10
H1L1 same
H5L1 same
J7L1 same
J11L1 same
J13L1 worse
H7L1 worse
JOL1 worse
HOL1 worse
20

28

Example 2: Binding analysis of wild type fucosylated and afucosylated ฮิวเมไนซ์ anti-LAG-3 antibodies for binding to รีคอมบิแนนต์ ฮิวเมน LAG-3-His using the Biacorem/T100

Afucosylated antibody H5L7BW was generated by expression of plasmids encoding H5L7 in 5 the BioWa POTELLIGENT® (FUT8 knock-out CHO) cell line. Afucosylated antibodies produced using
POTELLIGENT® technology have been shown to exhibit increased antibody dependent cell-
mediated cytotoxicity (ADCC) compared to equivalent highly-fucosylated conventional antibodies
through increased แอฟฟินิตี้ to FcyRIIIa (CD16).
Wild type fucosylated and afucosylated antibodies were compared for their ability to bind to 10 รีคอมบิแนนต์ ฮิวเมน LAG-3 ECD with a C-terminal His6 (SEQ ID NO:51) using the BiacoreTM T100
(GE HealthcareTm). Protein A was immobilised on a CM5 chip by primary amine coupling. This
surface was then used to capture the ฮิวเมไนซ์ antibodies. รีคอมบิแนนต์ ฮิวเมน LAG-3 ECD-His6
was then passed over the captured antibodies at 32, 8, 2, 0.5 and 0.125nM and regeneration was
carried out using 50mM NaOH. The binding curves were double referenced with buffer injection (i.e.
15 OnM) and the data was fitted to the T100 analysis software using the 1:1 model. The run was
carried out at 25°c, using HBS-EP as the running buffer.
In order to investigate the statistical significance of this kinetic data, this experiment was
repeated 3 times with the same batch of the four antibodies and the chimeric control. KD, ka and kd
parameters were each log (base 10) transformed prior t

There is further provided a method of treatment of a disease associated with the
involvement of pathogenic T cells in a human or animal subject ซึ่ง ประกอบรวมด้วย administering a
therapeutically effective amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้.
There is further provided a method of treatment of psoriasis, โรคโครห์น, rheumatoid 5 arthritis, primary biliary cirrhosis, systemic lupus erythematosus (SLE), Sj6gren's syndrome, multiple 
 sclerosis, ลำไส้ใหญ่ อักเสบ ชนิดแผลเรื้อรัง or autoimmune hepatitis, which method ประกอบรวมด้วยs administering to a 
 human subject in need thereof, a therapeutically effective amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of 
 the การประดิษฐ์นี้.
In a further รูปลักษณะ, there is provided a method of treatment of psoriasis, which 10 method ประกอบรวมด้วยs administering to a human subject in need thereof, a therapeutically effective 
 amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้.
In a further รูปลักษณะ, there is provided a method of treatment of โรคโครห์น, which method ประกอบรวมด้วยs administering to a human subject in need thereof, a therapeutically effective 
amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้.
15 In a further รูปลักษณะ, there is provided a method of treatment of ลำไส้ใหญ่ อักเสบ ชนิดแผลเรื้อรัง, which
method ประกอบรวมด้วยs administering to a human subject in need thereof, a therapeutically effective amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้.
The phrase "therapeutically effective amount" as used herein is an amount of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้ required to ameliorate or reduce one or more symptoms of,
20 or to prevent or cure, the disease.

Examples
The following Examples illustrate but do not limit the การประดิษฐ์.

25  Example 1: BiacoreTM SPR analysis of purified anti-LAG-3 ฮิวเมไนซ์ antibodies

A9H12 (IMP731), as disclosed in WO 2008/132601, was ฮิวเมไนซ์ by grafting murine CDRs 
 onto two heavy and two สายเบา human acceptor เฟรมเวิร์คs. A number of heavy and สายเบา 
 ฮิวเมไนซ์ anti-LAG-3 รูปแปรผันs were prepared, containing human to murine back mutations and 30 CDR modifications. สายหนัก รูปแปรผันs were numbered HO to H8, and JO, J7 to J13 and สายเบา 
 รูปแปรผันs were numbered LO to L10 and MO to Ml. Tissue culture supernatants containing all 
 combinations of heavy and สายเบา ฮิวเมไนซ์ anti_LAG-3 รูปแปรผันs were analysed for binding to 
 Fc-tagged recombinant soluble LAG-3 (IMP321). The data was analysed using a 1:1 model inherent 
 to the BiacoreTM 4000 software. Antibodies were selected based on calculated affinities and also by 35 visual comparison of binding sensorgrams with the chimeric antibody IMP731. A total of 54 
 constructs that exhibited equivalent or improved binding for IMP321 were identified for re-analysis

using a Biacorem 3000. Data was fitted to both the 1:1 and bivalent models, inherent to the BiaCore 3000 analysis software, and binding data was compared by normalising the binding curves at maximal association and comparing off-rates against IMP731 visually. This enabled antibodies that
demonstrated improved off-rates in comparison to IMP731 to be discerned. A total of 18 ฮิวเมไนซ์ 5 anti-LAG-3 antibodies were selected for further analysis on the basis of either equivalent or 
 improved binding kinetics to recombinant sLAG-3 in comparison to IMP731. These 18 ฮิวเมไนซ์ 
 antibodies were re-expressed and analysed as follows:

Anti-LAG-3 ฮิวเมไนซ์ antibodies were expressed in HEK 293 6E cells and purified by แอฟฟินิตี้
10 chromatography as follows:

100m1 scale HEK 293 6E expression
Expression plasmids encoding heavy and สายเบาs of the ฮิวเมไนซ์ antibodies identified in Table 3 were transiently co-ทรานสเฟคต์ into HEK 293 6E cells and expressed at 100m1 scale to
15 produce antibody.

Purification of ฮิวเมไนซ์ antibodies
The expressed antibody molecules were purified by แอฟฟินิตี้ chromatography. Protein A 
 sepharose beads (GE Healthcare Cat No 17-5280-04), were added to the cell culture supernatants 20 and mixed at room temperature for 30-60 minutes. The protein A sepharose beads were then 
 centrifuged and washed in PBS. The mixture was then added into a 10m1 disposable column (Pierce 
 Cat No: 29924) and the PBS allowed to drain. The column was washed 3 times with 10m1 PBS 
 before elution of the antibody with IgG Elution buffer (Pierce Cat No: 21009). The antibody eluted 
 was immediately neutralized using 1M Trizma® hydrochloride buffer (T2819) and was then buffer 25 exchanged into PBS with a Vivaspin 6 mwco 5000 column (Cat. No.: FDP-875-105D). The yield was 
 determined by measurement of absorbance at 280nm. The level of aggregated protein in the 
 purified sample was determined by size exclusion chromatography.

Binding Kinetics
30 The binding kinetics of the purified antibodies for a sLAG-3 molecule were assessed by SPR
using a BiacoreTM 3000. A goat anti-human kappa antibody (Southern Biotech, Catalogue No. 2060-
01) was immobilised on a CM5 chip by primary amine coupling. ฮิวเมไนซ์ anti-LAG3 antibodies were captured on this surface and the LAG3-Ig molecule IMP321 (Chrystelle Brignone, Caroline
Grygar, Manon Marcu, Knut Schakel, Frederic Triebel, The Journal of Immunology, 2007, 179: 4202-
35 4211) used as the analyte at 64nM with a buffer injection (i.e. OnM) used to double reference the 
 binding curves. Regeneration was with 10mM Glycine, pH1.5. The run was carried out on the 
 BiacoreTM 3000, using HBS-EP as running buffer and at 25°C. Sensorgrams were normalised for
27

binding at maximal association and off-rates compared against IMP731 by visual inspection of the sensorgram profiles.
The results show that the purified ฮิวเมไนซ์ anti-LAG-3 antibodies can be categorised into
3 groups; group 1 with ฮิวเมไนซ์ รูปแปรผันs that appear to be better at binding to IMP32 'than the
 
5

15
 
chimeric IMP731, group 2 with รูปแปรผันs that appear to bind in a very similar manner to IMP731 and group 3 with รูปแปรผันs that demonstrate worse binding than IMP731.
10 ฮิวเมไนซ์ รูปแปรผันs fall within group 1 and demonstrate improved (i.e. reduced) off-rates when compared to IMP731 by visual inspection of the BiacoreTM sensorgrams. All of these molecules contained the L7 สายเบา, which contains a glycine to proline substitution at position 27e in สายเบา CDR1. This data indicates that proline at position 27e improves the off-rate for IMP321 of the ฮิวเมไนซ์ anti-LAG-3 antibodies when paired with numerous ฮิวเมไนซ์ สายหนักs.
Of the remaining antibodies tested, 4 molecules fall within group 2 and had similar off-rates 
to the chimeric IMP731 antibody, while 4 other molecules fall within group 3 and exhibit worse off-
rates than IMP731. Table 3 provides an approximate ranking of those molecules in comparison to 
IMP731. H5L7 exhibits the best off-rate (i.e. lowest) in this experiment by visual inspection of the 
BiacoreTM sensorgrams.

Table 3: Comparison of off-rates with IMP731

.=  ..;>:  ,  ::-4  :;,.,::4::  ^.:'Ft  ,  :  '
' .  .-
 
ฮิวเมไนซ์.รูปแปรผัน Off-ratecomparison with IMP731, R order of off-rates
* ..A- 1e .;-,,..,% . .2.
H5L7 better 1
H1L7 better 2
J7L7 better 3
H4L7 better 4
311L7 better 5
H2L7 better 6
J13L7 better 7
H7L7 better 8
J0L7 better 9
H0L7 better 10
H1L1 same
H5L1 same
J7L1 same
J11L1 same
J13L1 worse
H7L1 worse
JOL1 worse
HOL1 worse
20

Example  2: Binding analysis of wild type fucosylated and afucosylated ฮิวเมไนซ์ anti-LAG-3 antibodies for binding to รีคอมบิแนนต์ ฮิวเมน LAG-3-His using the Biacorem/T100

Afucosylated antibody H5L7BW was generated by expression of plasmids encoding H5L7 in 5 the BioWa POTELLIGENT® (FUT8 knock-out CHO) cell line. Afucosylated antibodies produced using 
 POTELLIGENT® technology have been shown to exhibit increased antibody dependent cell-
 mediated cytotoxicity (ADCC) compared to equivalent highly-fucosylated conventional antibodies 
 through increased แอฟฟินิตี้ to FcyRIIIa (CD16).
Wild type fucosylated and afucosylated antibodies were compared for their ability to bind to 10 รีคอมบิแนนต์ ฮิวเมน LAG-3 ECD with a C-terminal His6 (SEQ ID NO:51) using the BiacoreTM T100 
 (GE HealthcareTm). Protein A was immobilised on a CM5 chip by primary amine coupling. This 
 surface was then used to capture the ฮิวเมไนซ์ antibodies. รีคอมบิแนนต์ ฮิวเมน LAG-3 ECD-His6 
 was then passed over the captured antibodies at 32, 8, 2, 0.5 and 0.125nM and regeneration was 
 carried out using 50mM NaOH. The binding curves were double referenced with buffer injection (i.e.
15 OnM) and the data was fitted to the T100 analysis software using the 1:1 model. The run was
carried out at 25°c, using HBS-EP as the running buffer.
In order to investigate the statistical significance of this kinetic data, this experiment was
repeated 3 times with the same batch of the four antibodies and the chimeric control. KD, ka and kd
parameters were each log (base 10) transformed prior t

0/5000

จาก: -

เป็น: -

ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]

คัดลอก!

มีเพิ่มเติมให้วิธีการรักษาของเรื่องเป็นมนุษย์ หรือสัตว์ ที่ประกอบรวมด้วยs วิธีจัดการจำนวนแอนติเจนการยึดเกาะโปรตีนของการประดิษฐ์นี้มีประสิทธิภาพ therapeutically มีเพิ่มเติมให้วิธีการรักษาโรคที่เกี่ยวข้องกับการมีส่วนร่วมของ pathogenic T เซลล์ในเป็นเรื่องที่มนุษย์ หรือสัตว์ซึ่งประกอบรวมด้วยการจัดการการจำนวนแอนติเจนการยึดเกาะโปรตีนของการประดิษฐ์นี้มีประสิทธิภาพ therapeuticallyมีเพิ่มเติมให้วิธีการรักษาโรคสะเก็ดเงิน โรคโครห์น rheumatoid 5 โรคไขข้ออักเสบ ตับแข็ง biliary หลัก systemic ไต erythematosus (SLE), กลุ่มอาการของ Sj6gren หลาย เส้นโลหิตตีบ ลำไส้ใหญ่อักเสบชนิดแผลเรื้อรัง หรือผิดปกติ โรค ประกอบรวมด้วยs วิธีที่จัดการกับการ มนุษย์หัวข้อจำเป็นดังกล่าว จำนวนแอนติเจนการยึดเกาะโปรตีนของ therapeutically มีประสิทธิภาพ การประดิษฐ์นี้ในรูปลักษณะเพิ่มเติม มีไว้วิธีการรักษาโรคสะเก็ดเงิน ประกอบรวมด้วยs 10 วิธีที่จัดการกับเรื่องมนุษย์จำเป็นดังกล่าว มีประสิทธิภาพ therapeutically จำนวนแอนติเจนการยึดเกาะโปรตีนของการประดิษฐ์นี้ในรูปลักษณะเพิ่มเติม มีไว้วิธีการรักษาของโรคโครห์น ประกอบรวมด้วยs วิธีที่จัดการกับเรื่องมนุษย์จำเป็นดังกล่าว มีประสิทธิภาพ therapeutically จำนวนแอนติเจนการยึดเกาะโปรตีนของการประดิษฐ์นี้15 ในรูปลักษณะเพิ่มเติม มีไว้รักษาลำไส้ใหญ่อักเสบชนิดแผลเรื้อรัง วิธีการที่ประกอบรวมด้วยs วิธีที่จัดการเรื่องมนุษย์จำเป็นดังกล่าว จำนวนแอนติเจนการยึดเกาะโปรตีนของการประดิษฐ์นี้มีประสิทธิภาพ therapeuticallyวลี "therapeutically ประสิทธิภาพยอด" เป็นใช้จะมีแอนติเจนยึดเกาะโปรตีนของการประดิษฐ์นี้ที่ต้อง ameliorate หรืออย่าง น้อยหนึ่งอาการ ลดจำนวน20 หรือเพื่อป้องกัน หรือ รักษา โรคตัวอย่างตัวอย่างต่อไปนี้แสดง แต่ไม่ได้จำกัดการประดิษฐ์ตัวอย่าง 25 1: วิเคราะห์คอฟฟี่ช็อป/ BiacoreTM แอนตี้บริสุทธิ์ต่อต้าน-LAG-3 ฮิวเมไนซ์A9H12 (IMP731), เป็นที่เปิดเผยใน WO 2008/132601 ถูกฮิวเมไนซ์ โดย grafting murine CDRs หนักสองและสองสายเบา acceptor มนุษย์ เฟรมเวิร์คs หนักและสายเบา ฮิวเมไนซ์ต่อต้าน-LAG-3 รูปแปรผันs ได้เตรียม มนุษย์กลายพันธุ์กลับ murine และแก้ไข CDR 30 สายหนัก รูปแปรผันs มีเลขโฮจิมินห์ กับ H8 โจ้ J7 J13 และสายเบา รูปแปรผันs มีเลขโลกับ L10 และ MO เพื่อ supernatants วัฒนธรรมมลเนื้อเยื่อที่ประกอบด้วยทั้งหมด ชุดของ รูปแปรผันs anti_LAG 3 ฮิวเมไนซ์หนักและสายเบาได้ analysed สำหรับผูกกับ ติดแท็ก fc recombinant ละลายความล่าช้า-3 (IMP321) ข้อมูลเป็น analysed ใช้แบบ 1:1 โดยธรรมชาติ ซอฟต์แวร์ BiacoreTM 4000 แอนตี้ได้เลือกใช้ ใน affinities คำนวณ และเปรียบเทียบภาพ 35 sensorgrams ผูกกับแอนติบอดี chimeric IMP731 จำนวน 54 ระบุโครงสร้างที่จัดแสดงรวมเทียบเท่า หรือดีขึ้นสำหรับ IMP321 สำหรับการวิเคราะห์ใหม่ใช้ Biacorem 3000 ข้อมูลถูกติดตั้งไปทั้ง 1:1 และ bivalent แต่กำเนิดซอฟต์แวร์วิเคราะห์ BiaCore 3000 และผูกข้อมูลถูกเปรียบเทียบ โดย normalising ผูกเส้นโค้งที่สมาคมสูงสุด และเปรียบเทียบจากราคากับ IMP731 สายตา นี้เปิดใช้งานแอนตี้ที่แสดงการปรับปรุงปิดราคาพิเศษ โดย IMP731 จะเข้าใจ จำนวน 18 ฮิวเมไนซ์ 5 แอนตี้ต่อต้าน-LAG-3 ถูกเลือกสำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติมตามที่เทียบเท่าอย่างใดอย่างหนึ่ง หรือ ปรับปรุงการผูกจลนพลศาสตร์ recombinant sLAG-3 โดย IMP731 เหล่านี้ฮิวเมไนซ์ 18 แอนตี้การแสดง และ analysed เป็นดังนี้:แอนตี้ต่อต้าน-LAG-3 ฮิวเมไนซ์ได้ถูกแสดงในเซลล์ 6E HEK 293 และบริสุทธิ์ โดยแอฟฟินิตี้chromatography 10 เป็นดังนี้:ขนาด 100m 1 นิพจน์ 6E HEK 293Plasmids นิพจน์เข้าหนักและ สายเบาs ของแอนตี้ฮิวเมไนซ์ที่ระบุในตารางที่ 3 ได้ co-ทรานสเฟคต์ลงในเซลล์ 6E HEK 293 transiently และแสดงที่ปรับ 100m 115 ผลิตแอนติบอดีทำให้บริสุทธิ์ของแอนตี้ฮิวเมไนซ์โมเลกุลแอนติบอดีแสดงได้บริสุทธิ์ โดยแอฟฟินิตี้ chromatography โปรตีน A ลูกปัด sepharose (GE ดูแลสุขภาพแมวไม่มี 17-5280-04), ได้เพิ่ม supernatants วัฒนธรรมของเซลล์ 20 และผสม 30-60 นาทีที่อุณหภูมิห้อง โปรตีนเม็ด sepharose มีแล้ว PBS centrifuged และหินใน ผสมแล้วเพิ่มเป็น 10 เมตร 1 คอลัมน์ผ้าอ้อม (เพียร์ซ แมว No: 29924) และ PBS ที่อนุญาตให้ระบายน้ำ คอลัมน์ถูกล้าง 3 ครั้ง ด้วย PBS 10 เมตร 1 ก่อน elution ของแอนติบอดีที่มี IgG Elution กันชน (ไม่ใช่แมวเพียร์ซ: 21009) แอนติบอดีที่ eluted ได้ทันที neutralized ใช้บัฟเฟอร์ 1 M Trizma ®ไฮโดรคลอไรด์ (T2819) และถูก แล้วบัฟเฟอร์ 25 แลกเปลี่ยนใน PBS กับ mwco Vivaspin 6 คอลัมน์ 5000 (แมว หมายเลข: FDP-875-105 D) ผลตอบแทนได้ กำหนด โดยการวัด absorbance ที่ 280nm ระดับของโปรตีนรวมในการ ตัวอย่างบริสุทธิ์ถูกกำหนด โดยขนาดแยก chromatographyจลนพลศาสตร์การผูก30 จลนพลศาสตร์การผูกของแอนตี้บริสุทธิ์สำหรับโมเลกุล sLAG-3 ถูกประเมิน โดยคอฟฟี่ช็อป/ใช้ BiacoreTM 3000 แอนติบอดีที่ต่อต้านมนุษย์กัปปะแพะ (ไบโอเทคภาคใต้ แคตตาล็อกหมายเลข 2060-01) ถูก immobilised ในชิ CM5 โดยคลัป amine หลัก แอนตี้ต่อต้าน-LAG3 ฮิวเมไนซ์ถูกจับบนผิวนี้และโมเลกุล LAG3 Ig IMP321 (Chrystelle Brignone แคโรไลน์Grygar, Manon Marcu, Knut Schakel เฟรดเด Triebel สมุดรายวันของภูมิคุ้มกันวิทยา 2007, 179:4202-35 4211) ใช้เป็น analyte ที่ 64nM กับฉีดบัฟเฟอร์ (เช่น OnM) ใช้ในการอ้างอิงคู่ ผูกเส้นโค้ง ฟื้นฟูได้ ด้วย 10 มม. Glycine, pH1.5 การรันถูกดำเนินการในการ BiacoreTM 3000 ใช้ HBS EP ใช้บัฟเฟอร์ ที่ 25 องศาเซลเซียส Sensorgrams ได้ normalised สำหรับ27 ผูกความสัมพันธ์สูงสุดและเทียบกับ IMP731 ตรวจสอบภาพของส่วนกำหนดค่า sensorgram ลดราคาพิเศษแสดงผลที่สามารถจัดการแอนตี้ต่อต้าน-LAG-3 ฮิวเมไนซ์บริสุทธิ์เป็นกลุ่มที่ 3 กลุ่มที่ 1 กับ รูปแปรผันs ฮิวเมไนซ์ที่ต้องการดีกว่าที่ผูกกับ IMP32 ' กว่า 51015 chimeric IMP731 กลุ่ม 2 กับ รูปแปรผันs ที่จะผูกในลักษณะคล้ายคลึงกับ IMP731 และกลุ่ม 3 กับ รูปแปรผันs ที่ผูกแย่กว่า IMP73110 ฮิวเมไนซ์ รูปแปรผันs อยู่ในกลุ่ม 1 และสาธิตการปรับปรุง (เช่นลดลง) ปิด-ราคาถูกเมื่อเทียบกับ IMP731 โดยตรวจสอบภาพของ BiacoreTM sensorgrams โมเลกุลเหล่านี้ทั้งหมดอยู่หมายเลข L7 สายเบา ที่ประกอบด้วย glycine จะ proline แทนที่ตำแหน่ง 27e สายเบา CDR1 ข้อมูลนี้บ่งชี้ว่า proline ที่ตำแหน่ง 27e ปิดอัตราสำหรับ IMP321 ที่ฮิวเมไนซ์ต่อต้าน-LAG-3 แอนตี้เมื่อจับคู่กับ สายหนักs ฮิวเมไนซ์จำนวนมากที่ปรับปรุงแอนตี้ที่เหลือทดสอบ 4 โมเลกุลอยู่ภายในกลุ่ม 2 และมีคล้ายปิดราคา การแอนติบอดี IMP731 chimeric ขณะ 4 โมเลกุลอื่น ๆ อยู่ภายในกลุ่ม 3 และแสดงแย่ออก-ราคากว่า IMP731 ตาราง 3 แสดงการจัดอันดับโดยประมาณของโมเลกุลดังกล่าวเปรียบเทียบ IMP731 H5L7 จัดแสดงสุดปิดอัตรา (เช่นราคา) ในการทดลองนี้ โดยตรวจสอบภาพใน BiacoreTM sensorgramsตาราง 3: เปรียบเทียบราคาปิดกับ IMP731.= ..; >: , ::-4 :;,.,::4:: ^.:'Ft , : '' . .- ปิด ratecomparison การฮิวเมไนซ์.รูปแปรผันกับ IMP731, R สั่งปิดราคาพิเศษ* .. A - 1e.; -,,..,% . 2H5L7 better 1H1L7 better 2J7L7 better 3H4L7 better 4311L7 better 5H2L7 better 6J13L7 better 7H7L7 better 8J0L7 better 9H0L7 better 10H1L1 sameH5L1 sameJ7L1 sameJ11L1 sameJ13L1 worseH7L1 worseJOL1 worseHOL1 worse2028 Example 2: Binding analysis of wild type fucosylated and afucosylated ฮิวเมไนซ์ anti-LAG-3 antibodies for binding to รีคอมบิแนนต์ ฮิวเมน LAG-3-His using the Biacorem/T100Afucosylated antibody H5L7BW was generated by expression of plasmids encoding H5L7 in 5 the BioWa POTELLIGENT® (FUT8 knock-out CHO) cell line. Afucosylated antibodies produced using POTELLIGENT® technology have been shown to exhibit increased antibody dependent cell- mediated cytotoxicity (ADCC) compared to equivalent highly-fucosylated conventional antibodies through increased แอฟฟินิตี้ to FcyRIIIa (CD16).Wild type fucosylated and afucosylated antibodies were compared for their ability to bind to 10 รีคอมบิแนนต์ ฮิวเมน LAG-3 ECD with a C-terminal His6 (SEQ ID NO:51) using the BiacoreTM T100 (GE HealthcareTm). Protein A was immobilised on a CM5 chip by primary amine coupling. This surface was then used to capture the ฮิวเมไนซ์ antibodies. รีคอมบิแนนต์ ฮิวเมน LAG-3 ECD-His6 was then passed over the captured antibodies at 32, 8, 2, 0.5 and 0.125nM and regeneration was carried out using 50mM NaOH. The binding curves were double referenced with buffer injection (i.e.15 OnM) and the data was fitted to the T100 analysis software using the 1:1 model. The run wascarried out at 25°c, using HBS-EP as the running buffer.In order to investigate the statistical significance of this kinetic data, this experiment wasrepeated 3 times with the same batch of the four antibodies and the chimeric control. KD, ka and kdparameters were each log (base 10) transformed prior t

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]

คัดลอก!

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]

คัดลอก!

มีเพิ่มเติมให้ วิธีการรักษาของมนุษย์หรือสัตว์ ซึ่งวิธีการของการบริหารเงิน
ประกอบรวมด้วยมีประสิทธิภาพ therapeutically ของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้

มีเพิ่มเติมให้ วิธีการรักษาของโรคที่เกี่ยวข้องกับ
การมีส่วนร่วมของเชื้อโรค ทีเซลล์ในมนุษย์หรือสัตว์ เรื่องซึ่งประกอบรวมด้วยการบริหาร
therapeutically จํานวนที่มีประสิทธิภาพของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้ .
มีเพิ่มเติมให้วิธีการรักษาโรคสะเก็ดเงินโรคโครห์น ไขข้ออักเสบ 5 , ฉาบ ,Systemic lupus erythematosus ( SLE ) , โรค
sj6gren ของหลายเส้นโลหิตตีบลำไส้ใหญ่อักเสบชนิดแผลเรื้อรังหรือไวรัสตับอักเสบ autoimmune ซึ่งวิธีการบริหาร เพื่อประกอบรวมด้วย S
มนุษย์ต้องการนั้น เป็นจำนวนเงินที่มีประสิทธิภาพ therapeutically ของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของ

การประดิษฐ์นี้ .ในรูปลักษณะเพิ่มเติมมีให้วิธีการรักษาโรคสะเก็ดเงิน ซึ่ง 10 วิธีประกอบรวมด้วย s ให้กับมนุษย์ในความต้องการดังกล่าว เป็นจำนวนเงินที่มีประสิทธิภาพ
therapeutically ของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้ .
ในรูปลักษณะเพิ่มเติมมีให้วิธีการรักษาโรคโครห์นซึ่งวิธีประกอบรวมด้วย s ให้กับมนุษย์ในความต้องการดังกล่าว เป็นจำนวนเงินที่มีประสิทธิภาพ
therapeutically ของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้ .
15 ในรูปลักษณะเพิ่มเติมมีให้วิธีการรักษาลำไส้ใหญ่อักเสบชนิดแผลเรื้อรังซึ่ง
วิธีประกอบรวมด้วย s ให้กับมนุษย์ในความต้องการดังกล่าว เป็นจำนวนเงินที่มีประสิทธิภาพ therapeutically ของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้ .
วลี " ที่มีประสิทธิภาพ therapeutically เงิน " ที่ใช้ในที่นี้คือจำนวนของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของการประดิษฐ์นี้ต้องกระเตื้องหรือลดหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งอาการของ
20 หรือเพื่อป้องกัน หรือรักษาโรค โรค ตัวอย่าง

ตัวอย่างต่อไปนี้แสดงให้เห็นถึง แต่ไม่ จำกัด การประดิษฐ์

25 ตัวอย่าง 1 :biacoretm สพการวิเคราะห์บริสุทธิ์ anti-lag-3 ฮิวเมไนซ์แอนติบอดี

a9h12 ( imp731 ) เป็นการเปิดเผยใน wo 2008 / 132601 , ฮิวเมไนซ์โดยการกราฟต์ ~ CDRs
ไปยังสองหนักและสองสายเบาพระนาสิกมนุษย์เฟรมเวิร์ค S . จำนวนของหนักและสายเบา
ฮิวเมไนซ์ anti-lag-3 รูปแปรผันของเตรียมประกอบด้วยมนุษย์ ~ การกลายพันธุ์กลับ 30 แก้ไข CDR . สายหนักรูปแปรผัน s นับ h8 โฮ และ โจ j7 และเพื่อ j13 สายเบา
รูปแปรผัน 2 โล ให้เลข l10 โมมล. และเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ supernatants ที่มีทั้งหมด
ชุดของหนักและสายเบาฮิวเมไนซ์ anti_lag-3 รูปแปรผัน s ผูกพัน

คนเอฟซี แท็กแบบละลาย lag-3 ( imp321 ) วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ แบบ 1 : 1 แท้จริง
ไป biacoretm 4000 ซอฟต์แวร์ แอนติบอดีที่ถูกเลือกตามค่า affinities ก็ 35 การเปรียบเทียบภาพของ sensorgrams ผูกพันกับ imp731 แอนติบอดีที่ไม่เป็นจริง ทั้งหมด 54
( เทียบเท่า หรือปรับปรุงโครงสร้างที่เชื่อม imp321 ถูกระบุสำหรับ

Re : การวิเคราะห์ใช้ biacorem 3000 ข้อมูลการติดตั้งทั้งใน 1 : 1 และไบวาเลนท์รุ่นที่แท้จริงกับ biacore 3000 ซอฟต์แวร์การวิเคราะห์และการผูกข้อมูล เปรียบเทียบ โดย normalising โค้งผูกที่สมาคมสูงสุดและเปรียบเทียบจากราคาต่อ imp731 มองเห็น นี้ใช้แอนติบอดีที่
) ปรับปรุงจากราคาในการเปรียบเทียบกับ imp731 จะเข้าใจ .

การแปล กรุณารอสักครู่..

ภาษาอื่น ๆ

การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.