2.5.3. CM-H2DCFDA assayMouse hippoc

2.5.3. CM-H2DCFDA assay
Mouse hippocampal cells (HT22) were donated by Dr. Dong-Seok Lee from the
College of Natural Sciences, Kyungpook National University. Cells were cultured in
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM, Welgene, Daegu, Korea) supplemented
with 10% fetal bovine serum (FBS, Gibco, Grand Island, NY, USA), 100 U/mL penicillin
and 100 lg/mL streptomycin (Welgene). Cells were seeded at a density of 2 
105 cells/well in a 6-well plate (BD Biosciences, San Diego, CA, USA) and incubated
at 37 C in 5% CO2 incubator. After 24 h, they were treated with samples for 12 h before
10 mM glutamate treatment. Then cells were trypsinized with 100 lL of 0.25%
trypsin–EDTA and centrifuged. Cell pellets were suspended and washed once in phenol
red free DMEM (Welgene). After centrifugation, 10 lM of CM-H2DCFDA was
added to the cells and incubated for 20 min at 37 C. Cells were rinsed once and
resuspended in phenol red free DMEM before flow cytometric analysis. This analysis
was performed on 10,000 viable cells with a FACS (fluorescence-activated cell sorting,
BD Biosciences) system. Trolox, a derivative of vitamin E, was used as a positive
control.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5.3 ทดสอบ H2DCFDA ซม.บริจาคเซลล์ฮิปโปแคมปัสเมาส์ (HT22) โดยดร.ลีดอง-โซกจากการวิทยาลัยของวิทยาศาสตร์ธรรมชาติ มหาวิทยาลัยแห่งชาติเคียงพุ๊ก เซลล์ถูกล้างในเสริมกลางของ Dulbecco ปรับอินทรี (DMEM, Welgene แทกู เกาหลี)กับ 10% ทารกวัวซีรั่ม (FBS, Gibco แกรนด์ไอส์แลนด์ นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา), 100 U/mL ยาเพนนิซิลลินและ streptomycin lg/mL 100 (Welgene) มีเตรียมเซลล์ที่ 2105 เซลล์/ดีในดี 6 แผ่น (ออก BD, San Diego, CA, USA) และได้รับการกกที่ 37 C ในตู้อบ 5% CO2 หลังจาก 24 ชม. พวกเขาได้รับการรักษาตัวอย่างสำหรับ 12 ชั่วโมงก่อนการรักษากลูตา 10 มม. แล้วเซลล์ถูก trypsinized 100 lL 0.25%ทริปซิน – EDTA และเหวี่ยง เซลล์ขี้หยุดชั่วคราว และล้างครั้งในฟีนอลDMEM ฟรีสีแดง (Welgene) หลังจากหมุนเหวี่ยง 10 คือ lM ของ H2DCFDA ซม.เพิ่มเซลล์ และรับการกกสำหรับ 20 นาทีที่ 37 C. เซลล์ถูกล้างครั้งเดียว และresuspended สีแดงฟีนอลฟรี DMEM ก่อนการวิเคราะห์การไหล cytometric การวิเคราะห์นี้ดำเนินการในเซลล์ทำงานได้ 10,000 ด้วย FACS (เรืองแสงที่เปิดใช้งานเซลล์ การเรียงลำดับระบบออก BD) ใช้ Trolox อนุพันธ์ของวิตามินอี เป็นบวกการควบคุม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5.3 CM-H2DCFDA ทดสอบ
เมาส์เซลล์ hippocampal (HT22) ได้รับการบริจาคจากดร. ดง Seok ลีจาก
วิทยาลัยวิทยาศาสตร์ธรรมชาติ, Kyungpook มหาวิทยาลัยแห่งชาติ เซลล์ที่ถูกเพาะเลี้ยงใน
Dulbecco ของ Modified อินทรีปานกลาง (DMEM, Welgene, แดกูประเทศเกาหลี) เสริม
ด้วยซีรั่ม 10% ของทารกในครรภ์วัว (FBS, Gibco, เกาะแกรนด์, NY, USA) 100 U / มล penicillin
และ 100 LG / mL streptomycin (Welgene ) เซลล์ที่ถูกเมล็ดในอัตราความหนาแน่น 2 หรือไม่
105 เซลล์ / ดีในจานเดียว 6 (BD ชีววิทยาศาสตร์, San Diego, CA, USA) และบ่ม
ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในศูนย์บ่มเพาะ CO2 5% หลังจาก 24 ชั่วโมงพวกเขาได้รับการรักษาด้วยตัวอย่างเป็นเวลา 12 ชั่วโมงก่อนที่จะ
รักษากลูตาเมตขนาด 10 MM จากนั้นเซลล์ถูก trypsinized 100 LL 0.25%
trypsin-EDTA และหมุนเหวี่ยง เม็ดมือถือถูกระงับและล้างครั้งในฟีนอล
DMEM ฟรี Red (Welgene) หลังจากการหมุนเหวี่ยง 10 LM ของ CM-H2DCFDA ถูก
เพิ่มเข้าไปในเซลล์และบ่มเป็นเวลา 20 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส เซลล์ที่ถูกล้างครั้งเดียวและ
resuspended ในฟีนอล DMEM ฟรี Red ก่อนการวิเคราะห์การไหลของ cytometric การวิเคราะห์นี้จะ
ได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับ 10,000 เซลล์ที่มีชีวิตที่มีมาซึ่ง (เรืองแสงเปิดใช้งานเซลล์เรียงลำดับ
BD ชีววิทยาศาสตร์) ระบบ Trolox ซึ่งเป็นอนุพันธ์ของวิตามินอีที่ใช้เป็นบวก
การควบคุม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5.3 . cm-h2dcfda การทดสอบเซลล์น้ำหนักเมาส์ ( ht22 ) ได้รับบริจาคจาก ดร. ดอง ซุก ลี จากวิทยาลัยวิทยาศาสตร์มหาวิทยาลัยแห่งชาติ kyungpook . เซลล์เพาะเลี้ยงในดัลเบโค่การนกอินทรีขนาดกลาง ( dmem welgene , , แดกู , เกาหลีใต้ ) อาหารร้อยละ 10 ของซีรั่มโค ( FBS gibco Grand Island , NY , USA ) , 100 U / ml เพนนิซิลินLG / ml และ streptomycin 100 ( welgene ) เซลล์มีเมล็ดในอัตราความหนาแน่น 2105 เซลล์ / ใน 6-well จาน ( BD BIOSCIENCES , San Diego , CA , USA ) โดยที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ใน 5% CO2 ตู้ฟักไข่ หลังจาก 24 ชั่วโมง พวกเขาได้รับการรักษาด้วยตัวอย่างเป็นเวลา 12 ชั่วโมงก่อนการรักษาผงชูรส 10 มิลลิเมตร แล้วเซลล์ก็ trypsinized ด้วย 100 จะ 0.25 %และ EDTA มีค่าไฟฟ้า . เซลล์เม็ดถูกระงับ และล้างครั้งเดียวในฟีนอลสีแดงฟรี dmem ( welgene ) หลังจากปั่น 10 LM ของ cm-h2dcfda คือเพิ่มเซลล์ที่บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีเซลล์ก็ล้างครั้งresuspended ในฟีนอลแดง dmem ฟรีก่อนที่จะวิเคราะห์ลักษณะการไหล การวิเคราะห์นี้คือใช้ 10000 ได้เซลล์ที่มี facs ( เรืองแสงใช้งานเซลล์ การเรียงลำดับBD BIOSCIENCES ) ระบบ สารอนุพันธ์ของวิตามิน E ที่ใช้เป็นบวกควบคุม