1. IntroductionCerebrospinal fluid

1. Introduction
Cerebrospinal fluid (CSF) surrounds brain and spinal cord and is situated between arachnoid and pia maters. The main functions of CSF are: protection against mechanical damage of the brain, transport of nutrients and excretion of toxic and waste substances [1], [2] and [3]. CSF is selectively secreted mainly by choroid plexus but it is also formed by intrathecal synthesis of lining cells of brain and spinal cord. It is worth to emphasize that CSF is not a product of ultrafiltration of plasma (through blood–CSF barrier) but rather selective secretion of plasma components. CSF reflects, approximately, the composition of blood plasma but concentrations of particular metabolites and proteins can be elevated in comparison with concentration of plasma particles. The reason of specific composition of CSF is active transport from blood and secretion from the brain.

The analysis of CSF is very important for diagnostic assessment of clinical pathology. CSF total protein determination is requested in the case of infection, neoplasm, hemorrhage, inflammatory processes, polyneuritis, degeneration of the central nervous system or psychiatric illness [1], [2], [3] and [4]. Total protein determination and protein fractions analysis in CSF samples are crucial indicators of changes of permeability of the blood–brain barrier. Increased total protein concentration is observed in the examples of bacterial and viral infections of meningitis or neoplastic occlusion [4], [5] and [6]. Total protein level in CSF varies also in the dependence of the age of patient [7]. In the literature, several methods for protein determination can be found including photometric [7], [8], [9] and [10] and light scattering methods [10] and [11] for total protein and immunochemical methods [6], [7], [8], [9], [10], [11] and [12] as well as electrophoresis [13] and spectroscopic methods [13] and [14] for quantitative protein fractions analysis. In each method, the problem of the amount of sample appears. In normal conditions, the total volume of CSF in adult human body is approximately 150 mL. These limitations are the reason of hampering chemical analysis of cerebrospinal fluid [1] and [2].

The aim of this contribution is to develop the multicommutated flow analysis system (MCFA) for total protein determination that requires small amounts of CSF. The system is based on newly developed optoelectronic detectors for turbidimetric and nephelometric measurements [15]. The analytical method applied in this work for total protein determination is based on conventional Exton protocol [16] and [17] recommended for the needs of routine clinical analytics.

2. Experimental
Lyophilized bovine serum albumin (BSA), sulphosalicylic acid (SSA) and other reagents of analytical grade, were obtained from POCh (Poland). For all experiments doubly distilled water was used throughout. Samples of cerebrospinal fluid with known levels of total protein in pathological and physiological ranges were obtained from the Central Clinical Laboratory of Medical University of Warsaw. The samples were analyzed in clinical settings using a routine Exton precipitation method with turbidimetric detection [16] and [17]. These reference determinations were performed using quartz cuvettes from Optiglass Ltd. (England) and spectrophotometer (Helios Delta, Thermo Scientific, USA)

Light emitting diodes (LEDs) of 565 nm, 600 nm, 630 nm and 650 nm wavelengths used in these investigations were obtained from Optosupply (Hong Kong). These LEDs have common shape, 5 mm diameter, transparent lens, and 20 nm declared full width at half-maximum. For turbidimetric measurements a 565 nm LED-emitter and a 600 nm LED-detector were applied. In the nephelometric configuration two 630 nm LED-emitters and 650 nm LED-detector were used. The optical flow-through cell of 60 μL internal volume integrated with respective LEDs made of PEEK (PolyEther Ether Ketone) material that is resistant on acidic solutions. The cross-section of the detector is shown in Fig. 1. The detailed video tutorial illustrating step-by-step the procedure of mechanical fabrication of very similar compact flow-through detector for fluorimetric measurements is shown elsewhere [18] as a Supplementary material.

The cross-section of flow-through cell integrated with LEDs.
Fig. 1.
The cross-section of flow-through cell integrated with LEDs.
Figure options
LEDs used as light sources were powered with stable currents generated by homemade low-voltage circuit based on L272 chip containing two independent operational amplifiers. All electronic components and solderless board were obtained from TME (Poland). The electromotive force generated by illuminated LED-detectors (treated as an analytical signal [19]) was measured, transduced and recorded using a Voltcraft multimeter (model VC820, Germany) connected with data storage PC via RS232 interface.

The MCFA manifold has been arranged using microsolenoid pumps (indicated stroke volume of 12 μL, product no. 120SP1210-4TE) and three-way microsolenoid valves (product no. 100T3MP12-62-5) purchased from Bio-Chem Fluidics (Boonton, USA) and PTFE Microbore tubing (ID 0.8 mm) obtained from Cole-Palmer (USA). The microsolenoid devices were controlled by PC-programmed KSP Measuring System (Poland).

3. Results and discussion
3.1. MCFA manifold

The Exton method for total protein determination, recommended for analysis of biomedical fluids, is based on measurements of light scattering by samples after treatment with concentrated sulphosalicylic acid (SSA) that causes all proteins precipitation. Although paired light emitting diodes are mainly used for photometric measurements, it has been shown recently that such optoelectronic devices are also applied for turbidimetric [15] and [20] as well as nephelometric [15] detection. Such devices constructed in the compact flow-through detector format are useful for measurements in conventional FIA systems [15] as well as SIA manifolds [20]. Both, turbidimetric and nephelometric, optoelectronic detectors have been successfully applied for determination of total protein level in urine samples [15]. In this contribution the MCFA system based on turbidimetric and nephelometric flow-through detectors dedicated for analysis of CSF is presented. The MCFA manifold is shown in Fig. 2. The manifold of developed flow system fulfills three requirements, especially important in the case of CSF analysis: (i) low amount of sample consumption, (ii) reproducible sampling of samples of different viscosities and (iii) possibility of differential measurements necessary for elimination of effects from own turbidity of samples.

The MCFA manifold: SL-sample line, RL – reagent line, P – microsolenoid pumps, V ...
Fig. 2.
The MCFA manifold: SL-sample line, RL – reagent line, P – microsolenoid pumps, V – microsolenoid valves.
Figure options
The MCFA consists of two steam lines connected before the detector. The sample line (SL) contains the four-way cell of 8 μL volume playing the similar role as injection loop in conventional FIA systems. The sample aspiration is performed through the valve V2 using pump P3. This time valve V3 and pumps P1 and P2 are closed. After aspiration pump P3 and valve V2 are closed and the 8 μL segment of sample from the cell is pushing by pump P2 towards the detector. The detailed description of the module providing reproducible sampling independent of sample viscosity is given elsewhere [21]. The reagent line (RL) is equipped with pump P1 and additional valve V1 enabling performance of whole measurement cycle with or without presence of SSA. This way the MCFA system can be also easily applied for the detection of own turbidity of CSF samples caused by sporadic presence of cells, microorganisms or myelographic contrast media.

The detailed program controlling operation of the MCFA system is presented in Table 1. The first step is filling the manifold with water by pumps P1 and P2 while valve V1 is switched ON. This step plays the role of washing procedure in the case of continuous analysis of consecutive samples. Then, injection of the sample takes place. The sequence starts when segment of the sample is aspirated through valve V2 by single impulse of pump P3. For process of aspiration it is required that valve V3 has to be switched ON, otherwise segments from waste would be aspirated to the manifold as well and the volume of sample injected this way would not be known. The following step is pushing the sample segment towards detector by the single impulse of pump P1 while valves V2 and V3 are closed. At the same moment pump P2 transports segment of water. This sequence is repeated a few times to introduce known, intended volume of sample (multiplicity of 8 μL volume) into the manifold. Afterwards, segments of sample are mixed with water and pushed to the detector by pumps P1 and P2. As a result, peak for sample without SSA is recorded. A measurement of signal that refers to precipitation of total protein is a second part of the presented procedure. In this case, the whole sequence presented above is the same except that the valve V1 is switched OFF throughout this part of procedure. It provides the mixing of sample segments with SSA solution. As a result the precipitation takes place and the recorded peak is proportional to total protein level in sample. In the presented study the analytical signal for real sample of CSF is understood as a difference between peaks for segment samples mixed with water and with SSA. For transparent samples this feature can be omitted and the whole procedure is reduced to measurements only with SSA.

Table 1.
The program controlling the operation of MCFA system.
Step V1 V2 V3 P1 (Hz) P2 (Hz) P3 Number of cycles Cycle time (s) Description
1 1 0 0 3.(3) 3.(3) 0 12 24 Flushing of the system with water
2 1 0.8 Hz 0.8 Hz 0.8 0.8 0.8 Hz 12 15.6 Injection of CSF sample
3 1 0 0 3.(3) 3.(3) 0 50 100 Background signal

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1. บทนำไขสันหลัง (CSF) ล้อมรอบสมองและสันหลัง และอยู่ระหว่างเยื่ออะแร็กและ pia maters ฟังก์ชันหลักของ CSF: ป้องกันความเสียหายทางกลของสมอง การขนส่งสารอาหารและการขับถ่ายของเสีย และสารพิษสาร [1], [2] [3] CSF เป็น secreted โดย choroid ข่ายประสาทส่วนใหญ่เลือก แต่มันจะเกิดขึ้น โดยการสังเคราะห์ intrathecal ซับเซลล์สมองและสันหลัง มันเที่ยวเน้นว่า CSF ไม่ผลิตภัณฑ์ ultrafiltration ของพลาสมา (ผ่านอุปสรรคเลือด – CSF) แต่หลั่งแต่ใช้ส่วนประกอบของพลาสมา CSF สะท้อน ประมาณ ส่วนประกอบของเลือดแต่ความเข้มข้นของ metabolites เฉพาะ และสามารถยกระดับเมื่อเปรียบเทียบกับความเข้มข้นของอนุภาคพลาสมาโปรตีน เหตุผลขององค์ประกอบเฉพาะของ CSF คือ ขนส่งการใช้งานจากเลือดและหลั่งจากสมองการวิเคราะห์ของ CSF เป็นสิ่งสำคัญมากสำหรับการประเมินวินิจฉัยพยาธิวิทยาคลินิก มีการร้องขอการกำหนด CSF โปรตีนรวมในกรณีของการติดเชื้อ เนื้องอกของ ตกเลือด กระบวนการอักเสบ polyneuritis เสื่อมของระบบประสาทส่วนกลางหรือโรคทางจิตเวช [1], [2], [3] และ [4] โปรตีนรวมและการวิเคราะห์เศษโปรตีนในตัวอย่าง CSF มีตัวบ่งชี้สำคัญของการเปลี่ยนแปลงของ permeability ของอุปสรรคเลือดสมอง ความเข้มข้นของโปรตีนเพิ่มขึ้นทั้งหมดจะสังเกตในตัวอย่างของการติดเชื้อแบคทีเรีย และไวรัสของเยื่อหุ้มสมองอักเสบหรือ neoplastic สิ่งสำคัญ [4], [5] และ [6] ระดับโปรตีนรวมใน CSF แตกต่างนอกจากนี้ในการพึ่งพาของอายุของผู้ป่วย [7] ในวรรณคดี วิธีการต่าง ๆ สำหรับการกำหนดโปรตีนสามารถพบรวม photometric [7], [8], [9] และ [10] และแสง scattering วิธี [10] และ [11] สำหรับโปรตีนรวมและ immunochemical วิธี [6], [7], [8], [9], [10], [11] และ [12] เป็นดี เป็น electrophoresis [13] และวิธีการด้าน [13] [14] สำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณโปรตีนเศษส่วนได้ ในแต่ละวิธีการ ปัญหาของจำนวนตัวอย่างแล้ว ในสภาพปกติ ปริมาณรวมของ CSF ในร่างกายมนุษย์ผู้ใหญ่มีประมาณ 150 mL ข้อจำกัดเหล่านี้เป็นเหตุผลของการกระทบวิเคราะห์ทางเคมีของสมองไขสันหลัง [1] และ [2]จุดมุ่งหมายของส่วนนี้คือการ พัฒนาระบบการวิเคราะห์การไหล multicommutated (MCFA) สำหรับการกำหนดโปรตีนทั้งหมดที่ต้องใช้เงินของ CSF ระบบจะขึ้นอยู่กับเครื่องตรวจจับ optoelectronic พัฒนาใหม่สำหรับ turbidimetric และ nephelometric วัด [15] วิธีวิเคราะห์ที่ใช้ในการทำงานนี้สำหรับกำหนดโปรตีนรวมอยู่ในโพรโทคอล Exton ทั่วไป [16] [17] แนะนำความต้องการของการวิเคราะห์ทางคลินิกประจำ2. ทดลองLyophilized วัว albumin ในซีรั่ม (บีเอสเอ), กรด sulphosalicylic (SSA) และอื่น ๆ reagents เกรดวิเคราะห์ ได้รับจาก POCh (โปแลนด์) สำหรับการทดลองทั้งหมด ถูกใช้น้ำกลั่นสองเหตุการณ์ตลอด ตัวอย่างของไขสันหลัง ด้วยรู้จักกันระดับของโปรตีนรวมในช่วงทางพยาธิวิทยา และสรีรวิทยาได้รับจากเซ็นทรัลคลินิกปฏิบัติของแพทย์มหาวิทยาลัยของวอร์ซอว์ มีวิเคราะห์ตัวอย่างในการตั้งค่าทางคลินิกโดยใช้ขั้นตอนวิธีฝน Exton กับ turbidimetric ตรวจสอบ [16] [17] Determinations อ้างอิงเหล่านี้ถูกดำเนินการโดยใช้ควอตซ์ cuvettes Optiglass จำกัด (อังกฤษ) และเครื่องทดสอบกรดด่าง (เฮลิออสเดลต้า เทอร์โมวิทยาศาสตร์ สหรัฐอเมริกา)Light emitting diodes (Led) 565 nm, 600 nm, 630 nm และความยาวคลื่น 650 nm ใช้ในการตรวจสอบเหล่านี้ได้รับมาจาก Optosupply (Hong Kong) ไฟ Led เหล่านี้มีรูปร่างทั่วไป เส้นผ่าศูนย์กลาง 5 มม. เลนส์ และ 20 nm ประกาศความกว้างเต็มที่เกินครึ่ง สำหรับการประเมิน turbidimetric ต่อ 565 nm LED ตัวส่งและตัว 600 nm จับ LED ถูกนำไปใช้ Nm ตั้งค่าคอนฟิก nephelometric 630 สอง LED emitters และ 650 nm จับ LED ใช้ แสงไหลผ่านเซลล์ของ 60 μL ภายในเล่มรวมกับไฟ Led ตามลำดับที่ทำจากวัสดุ PEEK (คีโตนอีเทอร์ PolyEther) ที่ทนในโซลูชั่นกรด ระหว่างส่วนของเครื่องตรวจจับจะแสดงใน Fig. 1 สอนวิดีโอรายละเอียดแสดงขั้นตอนกระบวนการผลิตเครื่องจักรกลของคล้ายขนาดเล็กไหลผ่านเครื่องตรวจจับสำหรับการประเมิน fluorimetric แสดงอื่น ๆ [18] เป็นวัสดุเสริมระหว่างส่วนของเซลล์ไหลรวมกับไฟ LedFig. 1 ระหว่างส่วนของเซลล์ไหลรวมกับไฟ Ledตัวเลือกรูปไฟ Led ที่ใช้เป็นแหล่งไฟถูกขับเคลื่อน ด้วยกระแสมั่นคงสร้างวงจรแรงดันต่ำโฮมเมตามชิ L272 ประกอบด้วยสองอิสระดำเนินงานเครื่องขยายเสียง อิเล็กทรอนิกส์ทั้งหมดและคณะ solderless ได้รับมาจากการแต่งตั้ง (โปแลนด์) แรงดันสร้างขึ้น โดยสว่าง LED-อุปกรณ์ตรวจจับ (ถือว่าเป็นสัญญาณการวิเคราะห์ [19]) ถูกวัด transduced และบันทึกโดยใช้มัลติมิเตอร์ Voltcraft (รุ่น VC820 เยอรมนี) พร้อมการจัดเก็บข้อมูล PC ผ่านทาง RS232 อินเทอร์เฟซการเชื่อมต่ออเนก MCFA ได้ถูกจัดโดยใช้ microsolenoid ปั๊ม (จังหวะที่ระบุปริมาณของ μL 12 ผลิตภัณฑ์หมายเลข 120SP1210-4TE) และวาล์วสามทาง microsolenoid (ผลิตภัณฑ์หมายเลข 100T3MP12-62-5) ซื้อจาก Fluidics ไบโอเคมี (Boonton สหรัฐอเมริกา) และท่อไฟเบอร์ Microbore (รหัส 0.8 มม.) ได้จากโคลพาล์มเมอร์ (สหรัฐอเมริกา) อุปกรณ์ microsolenoid ถูกควบคุม โดยคอมพิวเตอร์โปรแกรม KSP วัดระบบ (โปแลนด์)3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1. MCFA อเนกวิธี Exton สำหรับกำหนดรวมโปรตีน การวิเคราะห์ของเหลวทางชีวการแพทย์ จะขึ้นอยู่กับขนาดของแสง scattering โดยตัวอย่างหลังการรักษาด้วยกรดเข้มข้น sulphosalicylic (SSA) ที่ทำให้โปรตีนทั้งหมดฝน แม้ว่าจัดเป็นคู่ diodes เปล่งแสงส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการประเมิน photometric มันได้ถูกแสดงล่าสุดว่า optoelectronic อุปกรณ์ดังกล่าวยังใช้สำหรับการ turbidimetric [15] และ [20] และตรวจ nephelometric [15] อุปกรณ์ดังกล่าวสร้างขึ้นในรูปแบบขนาดเล็กไหลผ่านเครื่องตรวจจับมีประโยชน์สำหรับการประเมินในระบบ FIA ปกติ [15] SIA manifolds [20] ทั้ง turbidimetric และ nephelometric, optoelectronic จับได้ถูกนำไปใช้สำหรับการกำหนดระดับโปรตีนรวมในตัวอย่างปัสสาวะ [15] ในส่วนนี้ เป็นแสดงระบบ MCFA ตาม turbidimetric และ nephelometric ไหลผ่านเครื่องตรวจจับเฉพาะสำหรับการวิเคราะห์ของ CSF อเนก MCFA จะแสดงใน Fig. 2 มากมายของขั้นตอนการพัฒนาระบบตอบสนองข้อกำหนดสาม สำคัญโดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีที่วิเคราะห์ CSF: (i) ตัวอย่างการใช้, (ii) จำลองของตัวอย่างของ viscosities แตกต่างกันและ (iii) ความเป็นไปได้ของการวัดส่วนที่จำเป็นสำหรับการตัดออกของผลกระทบจากความขุ่นของน้ำเองตัวอย่างการสุ่มตัวอย่างค่าอเนก MCFA: SL ตัวอย่างบรรทัด RL – รีเอเจนต์บรรทัด P – ปั๊ม microsolenoid, V ...Fig. 2 อเนก MCFA: SL ตัวอย่างบรรทัด RL – รีเอเจนต์บรรทัด P – ปั๊ม microsolenoid, V – microsolenoid วาล์วตัวเลือกรูปMCFA จะประกอบด้วยไอน้ำสองเส้นเชื่อมต่อก่อนที่เครื่องตรวจจับ ตัวอย่างบรรทัด (SL) ประกอบด้วยเซลล์สี่ของปริมาณ μL 8 ที่เล่นบทบาทคล้ายวนฉีดในระบบ FIA ธรรมดา ความใฝ่ฝันอย่างจะกระทำผ่านวาล์ว V2 ใช้ปั๊ม P3 ปิดนี้เวลาวาล์ว V3 และปั๊ม P1 และ p 2 หลังจากปิดปั๊มปณิธาน P3 และวาล์ว V2 และผลักส่วน μL 8 ของตัวอย่างจากเซลล์ โดยปั๊ม p 2 ต่อเครื่องตรวจจับ คำอธิบายรายละเอียดของโมดูลให้อิสระสุ่มตัวอย่างจำลองของตัวอย่างความหนืดได้อื่น ๆ [21] บรรทัดรีเอเจนต์ (RL) พร้อมกับปั๊ม P1 และเพิ่มวาล์ว V1 เปิดใช้งานประสิทธิภาพการทำงานของวงจรทั้งวัดมี หรือไม่ มีของ SSA วิธีนี้ระบบ MCFA สามารถยังใช้ตรวจความขุ่นเองตัวอย่าง CSF ที่เกิดจากการมีสถานะของเซลล์ จุลินทรีย์ หรือสื่อ myelographic ความคมชัดรายละเอียดโปรแกรมการควบคุมการทำงานของระบบ MCFA จะแสดงในตารางที่ 1 ขั้นตอนแรกเป็นไส้มากมายน้ำ โดยปั๊ม P1 และ p 2 ขณะวาล์ว V1 เป็นสลับบน ขั้นตอนนี้บทบาทของกระบวนการวิเคราะห์อย่างต่อเนื่องติดต่อกันอย่างในกรณีของการซักผ้า แล้ว ฉีดตัวอย่างเกิดขึ้น ลำดับจะเริ่มต้นเมื่อแบ่งส่วนของตัวอย่างคือ aspirated ผ่านวาล์ว V2 โดยกระแสเดียวปั๊ม P3 สำหรับกระบวนการของความใฝ่ฝัน จึงจำเป็นที่วาล์ว V3 ได้สลับบน มิฉะนั้น จะ aspirated เซ็กเมนต์จากเสียไปมากมายเช่นกัน และปริมาตรของตัวอย่างฉีดวิธีนี้จะไม่ทราบ ขั้นตอนต่อไปนี้คือกดเซ็กเมนต์ตัวอย่างไปตรวจจับตามกระแสเดียวปั๊ม P1 ขณะปิดวาล์ว V2 และ V3 P 2 ขนส่งส่วนของน้ำที่ปั๊มในขณะเดียวกัน ลำดับนี้จะซ้ำกันกี่ครั้งเพื่อแนะนำรู้จัก ตามปริมาณของตัวอย่าง (มากมายของ 8 μL เสียงหลายหลาก) เข้าช่องทางเข้าออก ภายหลัง ส่วนของตัวอย่างที่ผสมกับน้ำ และผลักให้เครื่องตรวจจับ โดยปั๊ม P1 และ p 2 ดัง สูงสุดสำหรับตัวอย่างโดย SSA จะถูกบันทึกไว้ วัดสัญญาณที่อ้างอิงถึงฝนของโปรตีนรวมอยู่ส่วนที่สองของขั้นตอนการนำเสนอ ในกรณีนี้ ลำดับทั้งหมดที่นำเสนอข้างต้นจะเหมือนกันยกเว้นว่าวาล์ว V1 เป็นสลับออฟตลอดนี้เป็นส่วนหนึ่งของกระบวนการ ให้ผสมของกลุ่มตัวอย่าง ด้วยโซลูชั่นของ SSA ดัง ฝนที่เกิดขึ้น และจุดสูงสุดที่บันทึกไว้เป็นสัดส่วนกับระดับโปรตีนรวมในตัวอย่าง การศึกษานำเสนอเข้าใจสัญญาณวิเคราะห์สำหรับตัวอย่างจริงของ CSF เป็นผลต่างระหว่างยอดตัวอย่างส่วนผสม กับน้ำ และ SSA สำหรับตัวอย่างโปร่งใส สามารถละเว้นคุณลักษณะนี้ และลดขั้นตอนการประเมินเท่ากับ SSAตารางที่ 1โปรแกรมควบคุมการทำงานของระบบ MCFAขั้นตอนที่ V1 V2 V3 P1 (Hz) p 2 จำนวน P3 (Hz) ของวงจรวงจรเวลา (s) คำอธิบาย1 1 0 0 3 (3) 3 (3) ลบ 0 12 24 ของระบบน้ำ2 1 0.8 Hz 0.8 Hz 0.8 0.8 0.8 Hz 12 ไม่เกิน 15.6 ฉีด CSF ตัวอย่าง3 1 0 0 3 (3) 3 (3) 0 50 100 สัญญาณพื้นหลัง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1.
บทนำน้ำไขสันหลัง(CSF) ล้อมรอบสมองและไขสันหลังและตั้งอยู่ระหว่างแมงมุมและเพีย maters หน้าที่หลักของน้ำไขสันหลังคือการป้องกันความเสียหายทางกลของสมอง, การขนส่งของสารอาหารและการขับถ่ายของสารพิษและของเสีย [1], [2] [3] น้ำไขสันหลังหลั่งคัดเลือกส่วนใหญ่โดย choroid ช่องท้อง แต่มันจะเกิดขึ้นโดยการสังเคราะห์เข้าช่องไขสันหลังของเซลล์เยื่อบุของสมองและไขสันหลัง เป็นมูลค่าที่จะเน้น CSF ที่ไม่ได้เป็นผลิตภัณฑ์ของการกรองของพลาสม่า (ผ่านอุปสรรคเลือด CSF) แต่การหลั่งเลือกของชิ้นส่วนพลาสม่า สะท้อนให้เห็นถึงน้ำไขสันหลังประมาณองค์ประกอบของเลือด แต่ความเข้มข้นของสารโปรตีนโดยเฉพาะและสามารถยกระดับในการเปรียบเทียบกับความเข้มข้นของอนุภาคพลาสม่า เหตุผลขององค์ประกอบที่เฉพาะเจาะจงของน้ำไขสันหลังคือการขนส่งที่ใช้งานจากเลือดและสารคัดหลั่งจากสมอง. การวิเคราะห์น้ำไขสันหลังเป็นสิ่งสำคัญมากสำหรับการประเมินการวินิจฉัยของพยาธิวิทยาคลินิก CSF ความมุ่งมั่นที่มีโปรตีนรวมที่มีการร้องขอในกรณีของการติดเชื้อ, เนื้องอก, เลือดออกในกระบวนการอักเสบ polyneuritis, ความเสื่อมของระบบประสาทส่วนกลางหรือความเจ็บป่วยทางจิตเวช [1], [2], [3] และ [4] ความมุ่งมั่นที่มีโปรตีนรวมและโปรตีนวิเคราะห์เศษส่วนในตัวอย่างน้ำไขสันหลังเป็นตัวชี้วัดที่สำคัญของการเปลี่ยนแปลงของการซึมผ่านของอุปสรรคเลือดสมอง เพิ่มความเข้มข้นของโปรตีนรวมเป็นที่สังเกตในตัวอย่างของการติดเชื้อแบคทีเรียและไวรัสที่เยื่อหุ้มสมองอักเสบหรืออุดเนื้องอกส่วน [4] [5] และ [6] ระดับโปรตีนในน้ำไขสันหลังรวมแตกต่างกันไปในการพึ่งพาอาศัยกันของอายุของผู้ป่วย [7] ในวรรณคดีหลายวิธีสำหรับการกำหนดโปรตีนสามารถพบได้รวมทั้งแสง [7] [8] [9] และ [10] และวิธีการกระเจิงแสง [10] และ [11] โปรตีนรวมและวิธีเอนไซม์ [6] [7] [8] [9] [10] [11] และ [12] เช่นเดียวกับอิเล็ก [13] และวิธีสเปกโทรสโก [13] และ [14] โปรตีนการวิเคราะห์เชิงปริมาณเศษส่วน ในแต่ละวิธีปัญหาของจำนวนของกลุ่มตัวอย่างจะปรากฏขึ้น ในสภาวะปกติปริมาณรวมของน้ำไขสันหลังในร่างกายมนุษย์ที่เป็นผู้ใหญ่จะอยู่ที่ประมาณ 150 มิลลิลิตร ข้อ จำกัด เหล่านี้เป็นเหตุผลของการขัดขวางการวิเคราะห์ทางเคมีของน้ำไขสันหลัง [1] และ [2]. จุดมุ่งหมายของผลงานนี้คือการพัฒนาระบบการวิเคราะห์การไหลของ multicommutated (MCFA) สำหรับการกำหนดโปรตีนรวมที่ต้องใช้จำนวนเงินที่เล็ก ๆ ของน้ำไขสันหลัง ระบบจะขึ้นอยู่กับการพัฒนาขึ้นใหม่สำหรับเครื่องตรวจจับ optoelectronic turbidimetric และการวัด nephelometric [15] วิธีการวิเคราะห์เปรียบเทียบในงานนี้สำหรับการกำหนดโปรตีนรวมอยู่บนพื้นฐานของโปรโตคอลเอกซ์เดิม [16] และ [17] แนะนำสำหรับความต้องการของการวิเคราะห์ทางคลินิกประจำ. 2 ทดลองLyophilized ซีรั่มอัลบูมิวัว (BSA) กรด sulphosalicylic (SSA) และสารเคมีอื่น ๆ ของชั้นประถมศึกษาวิเคราะห์ที่ได้รับจาก Poch (โปแลนด์) สำหรับการทดลองทั้งหมดทวีคูณน้ำกลั่นที่ถูกนำมาใช้ตลอด ตัวอย่างน้ำไขสันหลังที่มีระดับของโปรตีนที่รู้จักกันโดยรวมในช่วงพยาธิวิทยาและสรีรวิทยาที่ได้รับจากห้องปฏิบัติการทางคลินิกกลางของการแพทย์มหาวิทยาลัยวอร์ซอ กลุ่มตัวอย่างที่ได้มาวิเคราะห์ทางคลินิกในการตั้งค่าการใช้งานประจำวิธีการเร่งรัดเอกซ์มีการตรวจสอบ turbidimetric [16] และ [17] หาความอ้างอิงเหล่านี้ถูกดำเนินการโดยใช้ cuvettes ผลึกจาก Optiglass จำกัด (อังกฤษ) และ spectrophotometer (Helios Delta, เทอร์โมวิทยาศาสตร์สหรัฐอเมริกา) ไดโอดเปล่งแสง (LEDs) 565 นาโนเมตร 600 นาโนเมตรและ 630 นาโนเมตรความยาวคลื่น 650 นาโนเมตรมาใช้ในการตรวจสอบเหล่านี้ ที่ได้รับจาก Optosupply (ฮ่องกง) ไฟ LED เหล่านี้มีรูปทรงที่พบบ่อยขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 5 มิลลิเมตรเลนส์โปร่งใสและ 20 นาโนเมตรประกาศเต็มความกว้างครึ่งสูงสุด สำหรับการตรวจวัด turbidimetric 565 นาโนเมตรอีซีแอล-LED และนาโนเมตร 600 เครื่องตรวจจับ-LED ถูกนำไปใช้ ในการกำหนดค่า nephelometric สอง 630 นาโนเมตร emitters-LED และ 650 นาโนเมตรตรวจจับ-LED ถูกนำมาใช้ เซลล์ไหลผ่านแสง 60 ไมโครลิตรปรับระดับเสียงภายในรวมกับไฟ LED ที่เกี่ยวข้องที่ทำจาก PEEK (Polyether อีเธอร์คีโตน) วัสดุที่ทนต่อการแก้ปัญหาที่เป็นกรด ข้ามส่วนของเครื่องตรวจจับที่มีการแสดงในรูป 1. วิดีโอสอนรายละเอียดที่แสดงขั้นตอนโดยขั้นตอนขั้นตอนของการผลิตทางกลของที่คล้ายกันมากตรวจจับการไหลผ่านขนาดกะทัดรัดสำหรับการตรวจวัด fluorimetric จะแสดงอื่น ๆ [18] เป็นวัสดุเสริม. ส่วนข้ามของเซลล์ไหลผ่านบูรณาการกับ ไฟ LED. รูป 1. ส่วนข้ามของเซลล์ไหลผ่านรวมกับไฟ LED. รูปที่ตัวเลือกไฟ LED ใช้เป็นแหล่งกำเนิดแสงที่ถูกขับเคลื่อนด้วยกระแสที่มีเสถียรภาพที่เกิดจากวงจรโฮมเมดแรงดันต่ำขึ้นอยู่กับ L272 ชิปที่มีสองเครื่องขยายเสียงในการดำเนินงานที่เป็นอิสระ ส่วนประกอบทั้งหมดอิเล็กทรอนิกส์และคณะกรรมการ solderless ที่ได้รับจาก TME (โปแลนด์) แรงเคลื่อนไฟฟ้าที่เกิดจากการเรืองแสง LED ตรวจจับ (ถือว่าเป็นสัญญาณการวิเคราะห์ [19]) วัด, transduced และบันทึกโดยใช้มัลติมิเตอร์ VOLTCRAFT (รูปแบบ VC820 เยอรมนี) ที่เชื่อมต่อกับเครื่องคอมพิวเตอร์การจัดเก็บข้อมูลผ่านทางอินเตอร์เฟซ RS232. นานา MCFA ได้รับการจัด โดยใช้เครื่องสูบน้ำ microsolenoid (นิ้วความจุที่ระบุไว้ 12 ไมโครลิตรผลิตภัณฑ์ no. 120SP1210-4TE) และสามทางวาล์ว microsolenoid (ไม่มีสินค้า. 100T3MP12-62-5) ซื้อมาจาก fluidics Bio-Chem (Boonton สหรัฐอเมริกา) และ PTFE แบบ Microbore ท่อ ( ID 0.8 มิลลิเมตร) ที่ได้รับจากโคลพาลเมอร์ (สหรัฐอเมริกา) อุปกรณ์ microsolenoid ถูกควบคุมโดยคอมพิวเตอร์โปรแกรม KSP ระบบการวัด (โปแลนด์). 3 และการอภิปรายผล3.1 MCFA หลายวิธีสำหรับการกำหนดเอกซ์โปรตีนรวมแนะนำสำหรับการวิเคราะห์ของของเหลวแพทย์จะขึ้นอยู่กับการตรวจวัดกระเจิงแสงจากกลุ่มตัวอย่างหลังการรักษาด้วยกรดsulphosalicylic เข้มข้น (SSA) ที่ทำให้เกิดการตกตะกอนโปรตีนทั้งหมด แม้ว่าไดโอดเปล่งแสงคู่ส่วนใหญ่จะใช้สำหรับการตรวจวัดความเข้มแสงจะได้รับการแสดงให้เห็นว่าเมื่อเร็ว ๆ นี้ว่าอุปกรณ์ optoelectronic ดังกล่าวยังถูกนำมาใช้สำหรับ turbidimetric [15] และ [20] เช่นเดียวกับ nephelometric [15] การตรวจสอบ อุปกรณ์ดังกล่าวสร้างขึ้นในรูปแบบที่เครื่องตรวจจับการไหลผ่านขนาดกะทัดรัดที่มีประโยชน์สำหรับการวัดในระบบ FIA เดิม [15] เช่นเดียวกับแมนิโฟล SIA [20] ทั้ง turbidimetric และ nephelometric ตรวจจับ optoelectronic ได้รับการใช้ประสบความสำเร็จในการตรวจวัดระดับโปรตีนรวมในตัวอย่างปัสสาวะ [15] ในการสนับสนุนระบบนี้ขึ้นอยู่กับ MCFA turbidimetric nephelometric และตรวจจับการไหลผ่านเฉพาะสำหรับการวิเคราะห์น้ำไขสันหลังจะนำเสนอ นานา MCFA แสดงในรูป 2. ท่อระบบไหลพัฒนาตอบสนองความต้องการที่สามโดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีที่มีความสำคัญของการวิเคราะห์น้ำไขสันหลัง (i) ปริมาณต่ำของการบริโภคตัวอย่าง (ii) การสุ่มตัวอย่างเลียนแบบตัวอย่างของความหนืดที่แตกต่างกันและ (iii) ความเป็นไปได้ของการวัดความแตกต่างที่จำเป็นสำหรับ การกำจัดของผลกระทบจากความขุ่นของตัวเองของกลุ่มตัวอย่าง. นานา MCFA สาย SL-ตัวอย่าง RL - สายน้ำยาพี - ปั๊ม microsolenoid วี ... รูป 2. นานา MCFA สาย SL-ตัวอย่าง RL - สายน้ำยาพี - ปั๊ม microsolenoid วี - วาล์ว microsolenoid. เลือกรูปMCFA ประกอบด้วยสองสายการอบไอน้ำที่เชื่อมต่อก่อนที่จะตรวจจับ บรรทัดตัวอย่าง (SL) มีเซลล์สี่ทิศทางของปริมาณ 8 ไมโครลิตรเล่นบทบาทที่คล้ายกันเป็นห่วงการฉีดในระบบ FIA ธรรมดา ทะเยอทะยานตัวอย่างจะดำเนินการผ่านวาล์ว V2 โดยใช้ปั๊ม P3 เวลา V3 วาล์วและปั๊มนี้ P1 และ P2 ถูกปิด หลังจากที่ทะเยอทะยานปั๊มและวาล์ว P3 V2 ถูกปิดและส่วนที่ 8 ไมโครลิตรของกลุ่มตัวอย่างจากเซลล์จะผลักดันจากปั๊ม P2 ต่อการตรวจจับ คำอธิบายรายละเอียดของโมดูลการให้อิสระการสุ่มตัวอย่างทำซ้ำความหนืดตัวอย่างจะได้รับอื่น ๆ [21] บรรทัดสาร (RL) เป็นอุปกรณ์ที่มีเครื่องสูบน้ำ P1 และวาล์วเพิ่มเติม V1 ช่วยให้ประสิทธิภาพการทำงานของวงจรการวัดทั้งที่มีหรือไม่มีการปรากฏตัวของ SSA วิธีนี้ระบบ MCFA สามารถได้อย่างง่ายดายนอกจากนี้ยังนำไปใช้สำหรับการตรวจสอบความขุ่นของตัวเองของตัวอย่างน้ำไขสันหลังที่เกิดจากการแสดงตนเป็นระยะ ๆ ของเซลล์จุลินทรีย์หรือสื่อความคมชัด myelographic. โปรแกรมรายละเอียดการควบคุมการทำงานของระบบ MCFA จะนำเสนอในตารางที่ 1. ขั้นตอนแรก เติมด้วยน้ำมากมายโดยปั๊ม P1 และ P2 ในขณะที่วาล์ว V1 เปิดอยู่ ขั้นตอนนี้จะมีบทบาทของขั้นตอนการซักผ้าในกรณีที่มีการวิเคราะห์อย่างต่อเนื่องติดต่อกันของกลุ่มตัวอย่างที่ จากนั้นฉีดของกลุ่มตัวอย่างที่เกิดขึ้น ลำดับเริ่มต้นเมื่อส่วนของกลุ่มตัวอย่างที่มีการสำลักผ่านวาล์ว V2 โดยแรงกระตุ้นเดียวของปั๊ม P3 สำหรับขั้นตอนการสำลักจะต้องให้ V3 วาล์วจะต้องมีการเปลี่ยนในส่วนอื่นจากของเสียจะถูกดูดไปต่าง ๆ นานาเช่นกันและปริมาณของตัวอย่างฉีดวิธีนี้จะไม่เป็นที่รู้จัก ต่อไปนี้ขั้นตอนที่จะผลักดันส่วนกลุ่มตัวอย่างที่มีต่อการตรวจจับโดยแรงกระตุ้นเดียวของเครื่องสูบน้ำ P1 ขณะที่วาล์ว V2 และ V3 ปิด ที่ปั๊มช่วงเวลาเดียวกัน P2 ลำเลียงส่วนของน้ำ ลำดับนี้ซ้ำแล้วซ้ำอีกไม่กี่ครั้งที่จะแนะนำเป็นที่รู้จักในปริมาณตั้งใจของกลุ่มตัวอย่าง (หลายหลากของปริมาณ 8 ไมโครลิตร) ลงนานา หลังจากนั้นกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการผสมกับน้ำและผลักดันในการตรวจจับโดยปั๊ม P1 และ P2 เป็นผลให้ยอดตัวอย่างโดยไม่ต้อง SSA จะถูกบันทึกไว้ การวัดสัญญาณที่หมายถึงการตกตะกอนของโปรตีนรวมเป็นส่วนที่สองของขั้นตอนที่นำเสนอ ในกรณีนี้ตามลำดับทั้งนำเสนอข้างต้นจะเหมือนกันยกเว้นว่า V1 วาล์วเปิดปิดตลอดส่วนหนึ่งของขั้นตอนนี้ มันมีการผสมของกลุ่มตัวอย่างที่มีการแก้ปัญหา SSA อันเป็นผลมาจากฝนที่เกิดขึ้นและจุดสูงสุดที่บันทึกไว้เป็นสัดส่วนกับระดับโปรตีนรวมในตัวอย่าง ที่นำเสนอในการศึกษาวิเคราะห์สัญญาณสำหรับกลุ่มตัวอย่างที่แท้จริงของน้ำไขสันหลังเป็นที่เข้าใจกันความแตกต่างระหว่างยอดเขาสำหรับตัวอย่างส่วนผสมกับน้ำและ SSA สำหรับตัวอย่างโปร่งใสคุณลักษณะนี้สามารถมองข้ามและขั้นตอนทั้งหมดจะลดลงไปวัดเฉพาะกับ SSA. ตารางที่ 1 โปรแกรมควบคุมการทำงานของระบบ MCFA ได้. ขั้นตอนที่ V1 V2 V3 P1 (Hz) P2 (Hz) P3 จำนวนรอบรอบเวลา (s) คำอธิบาย1 1 0 0 3 (3) 3. (3) 0 12 24 แดงของระบบที่มีน้ำ2 1 เฮิร์ตซ์ 0.8 0.8 0.8 0.8 เฮิร์ตซ์ 0.8 เฮิร์ตซ์ 12 15.6 ฉีดตัวอย่างน้ำไขสันหลัง3 1 0 0 3 ( 3) 3. (3) 0 50 100 สัญญาณพื้นหลัง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 . บทนำ
น้ำเลี้ยงสมองและไขสันหลัง ( CSF ) รอบสมองและไขสันหลังและตั้งอยู่ระหว่างชั้นกลางเปีย maters และ . หน้าที่หลักของ CSF : ป้องกันความเสียหายเชิงกลของสมอง , การขนส่งของรังและการขับถ่ายของสารพิษและของเสียสาร [ 1 ] , [ 2 ] และ [ 3 ]ควบแน่นเป็นส่วนใหญ่ โดยเลือกที่มีอิทธิผล แต่มันก็เกิดขึ้นจากการสังเคราะห์ในไขสันหลังของเยื่อเซลล์ของสมองและไขสันหลัง มันคุ้มค่าที่จะเน้นว่าน้ำไม่ได้ผลิตภัณฑ์กรองของพลาสมา ( เลือดและน้ำไขสันหลังผ่านสิ่งกีดขวาง ) แต่การเลือกส่วนประกอบของพลาสมา น้ำสะท้อนให้เห็นถึง ประมาณ ,องค์ประกอบของเลือด แต่ความเข้มข้นของสารที่เฉพาะเจาะจงและโปรตีนสามารถสูงในการเปรียบเทียบกับความเข้มข้นของอนุภาคในพลาสมา เหตุผลขององค์ประกอบที่เฉพาะเจาะจงของ CSF คือการขนส่งที่ใช้งานจากเลือดและการหลั่งจากสมอง . . .

การวิเคราะห์น้ำเป็นสิ่งสำคัญมากสำหรับการประเมินวินิจฉัยพยาธิวิทยาคลินิกผลิตรวมโปรตีนปริมาณการร้องขอในกรณีของการติดเชื้อ มะเร็ง , ตกเลือด , กระบวนการ , polyneuritis อักเสบ ความเสื่อมของระบบประสาท หรือความเจ็บป่วยทางจิต [ 1 ] , [ 2 ] , [ 3 ] และ [ 4 ] ปริมาณโปรตีนรวมและการวิเคราะห์โปรตีนในน้ำไขสันหลังเป็นเศษส่วนจำนวนตัวชี้วัดที่สำคัญของการเปลี่ยนแปลงของค่าการซึมผ่านของเลือดและสมองกั้นเพิ่มความเข้มข้นของโปรตีนทั้งหมด เป็นที่สังเกตในตัวอย่างของแบคทีเรียและไวรัสของโรคเยื่อหุ้มสมองอักเสบ หรือเนื้องอกอุดตัน [ 4 ] , [ 5 ] [ 6 ] ระดับโปรตีนรวมในน้ำไขสันหลังไปยังขึ้นอยู่กับอายุของผู้ป่วย [ 7 ] ในวรรณคดีหลายวิธีสำหรับการหาโปรตีนสามารถพบได้ รวมทั้งแสง [ 7 ] , [ 8 ][ 9 ] และ [ 10 ] และการกระจายแสงวิธีการ [ 10 ] และ [ 11 ] สำหรับโปรตีนรวมและวิธีการ immunochemical [ 6 ] [ 7 ] , [ 8 ] , [ 9 ] , [ 10 ] [ 11 ] และ [ 12 ] รวมทั้ง electrophoresis [ 13 ] [ 13 ] และวิธีสเปกโทรสโกปีและ [ 14 ] ให้ปริมาณโปรตีนสำหรับการวิเคราะห์ ในแต่ละวิธี ปัญหาของปริมาณตัวอย่างที่ปรากฏ ในภาวะปกติปริมาณรวมของน้ำในร่างกายมนุษย์ผู้ใหญ่ประมาณ 150 มิลลิลิตร ข้อ จำกัด เหล่านี้เป็นเหตุขัดขวางการวิเคราะห์ทางเคมีของน้ำหล่อสมองไขสันหลัง [ 1 ] และ [ 2 ] .

จุดประสงค์ของงานนี้เพื่อพัฒนา multicommutated ไหลการวิเคราะห์ระบบ ( MCFA ) โดยกำหนดว่าต้องใช้จำนวนเงินขนาดเล็กของโปรตีนในน้ำไขสันหลัง .ระบบจะขึ้นอยู่กับเครื่องตรวจจับ Optoelectronic พัฒนาขึ้นใหม่สำหรับการวัดและ turbidimetric เนฟิโลเมทริก [ 15 ] วิธีวิเคราะห์ที่ใช้ในงานนี้ เพื่อหาปริมาณโปรตีนทั้งหมดจะขึ้นอยู่กับโปรโตคอล [ 16 ] และเอกซ์ตันทั่วไป [ 11 ] แนะนำสำหรับความต้องการของขั้นตอนทางคลินิกการวิเคราะห์

2 ทดลอง
โปรตีนอัลบูมิน ( BSA )sulphosalicylic acid ( SSA ) และสารเคมีอื่น ๆวิเคราะห์เกรดได้จาก poch ( โปแลนด์ ) สำหรับการทดลองทวีคูณน้ำกลั่นที่ใช้ตลอด ตัวอย่างน้ำหล่อสมองไขสันหลังทราบระดับของโปรตีนในพยาธิสรีรวิทยาทั้งหมดและช่วงที่ได้รับจากห้องแลปกลางมหาวิทยาลัยการแพทย์แห่งวอร์ซอตัวอย่างข้อมูลในการตั้งค่าทางคลินิกใช้รูทีน เอกซ์ตันการตกตะกอนด้วยวิธีตรวจหา turbidimetric [ 16 ] และ [ 17 ] รวมทั้งการอ้างอิงเหล่านี้โดยใช้คิวเวททควอทซ์จาก optiglass Ltd . ( อังกฤษ ) และวัสดุ ( Helios Delta , เทอร์โมวิทยาศาสตร์ , USA )

light emitting diodes ( LEDs ) 810 nm 600 นาโนเมตร630 nm 650 nm ความยาวคลื่นที่ใช้ในการตรวจสอบเหล่านี้ได้จาก optosupply ( ฮ่องกง ) ไฟ LED เหล่านี้มีรูปร่าง ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 5 มม. เลนส์ใส , และ 20 nm ประกาศเต็มความกว้างสูงสุดครึ่ง . สำหรับการวัด turbidimetric เป็น 810 nm ทำให้อิมิตเตอร์และ 600 nm เครื่องตรวจจับที่ใช้ . ในการตั้งค่าเนฟิโลเมทริกสอง 630 นาโนเมตร emitters LED 650 nm เครื่องตรวจจับแบบแสง flow-through เซลล์ 60 μ L ภายในเล่มรวมกับไฟ LED ที่เกี่ยวข้องได้แอบมอง ( polyether อีเทอร์คีโตน ) วัสดุที่ทนต่อกรดในสารละลาย ขนาดของเครื่องจะแสดงในรูปที่ 1รายละเอียดวิดีโอกวดวิชาที่แสดงขั้นตอนโดยขั้นตอนขั้นตอนของการผลิตเครื่องจักรกล เครื่องตรวจจับ flow-through คล้ายกันมากขนาดกะทัดรัดสำหรับการวัด fluorimetric แสดงที่อื่น [ 18 ] เป็นวัสดุเสริม

ขนาดของ flow-through เซลล์รวมกับไฟ LED
รูปที่ 1
ขนาดของ flow-through เซลล์รวมกับไฟ LED .

รูปที่เลือกไฟ LED ที่ใช้เป็นแหล่งแสงที่ถูกขับเคลื่อน ด้วยกระแสคงที่วงจรแรงดันไฟฟ้าแบบโฮมเมดที่สร้างขึ้นโดยยึด l272 ชิปที่มีสองวงจรปฏิบัติการที่เป็นอิสระ ทั้งหมดอิเล็กทรอนิกส์ ส่วนประกอบและ solderless บอร์ดได้จากต่างประเทศ ( โปแลนด์ ) และแรงเคลื่อนไฟฟ้าที่สร้างขึ้นโดยไฟ LED เครื่องตรวจจับ ( ถือว่าเป็นสัญญาณวิเคราะห์ [ 19 ] ) คือวัด