Isolation of mutants specifically d

Isolation of mutants specifically deficient in the production of alkaline protease would facilitate definitive studies addressing the role of alkaline protease in P. aeruginosa infections. This approach has been complicated by the fact that most strains of P. aeruginosa produce at least two distinct extracellular proteases (25) and that alkaline protease does not possess a unique or stringent substrate specificity (26). We have been unable to specifically inhibit the activity of interfering protease (elastase) to facilitate detection of alkaline protease mutants on skim milk agar plates (unpublished data). To circumvent these problems, we chose to isolate alkaline protease mutants in strain PA103, which produces alkaline protease (4) but no detectable elastase (28). Despite the fact that strain PA103 is serum sensitive (41), it is virulent in a mouse eye model of corneal infection (17, 27). We have isolated alkaline protease-deficient mutants of strain PA103 after ethyl methanesulfonate (EMS) mutagenesis and screening of mutagenized colonies on skim milk agar plates. After in vitro characterization of these mutants, mutants specifically deficient in alkaline protease production were identified, and the virulence of these mutants was compared with that of the wild-type strain in a mouse eye model.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกของสายพันธุ์โดยเฉพาะขาดสารในการผลิตอัลคาไลน์รติเอสจะช่วยกำหนดบทบาทของรติเอสด่างในเชื้อ P. aeruginosa การศึกษาทั่วไป วิธีการนี้มีการซับซ้อนความจริงที่ว่า สายพันธุ์ส่วนใหญ่ของ P. aeruginosa ผลิต extracellular proteases น้อยสองหมด (25) และรติเอสอัลคาไลน์ที่มี specificity พื้นผิวเฉพาะ หรือเข้มงวด (26) เราได้รับไม่สามารถยับยั้งกิจกรรมของรติเอสรบกวน (elastase) เพื่อตรวจหาสายพันธุ์ด่างรติเอสบนแผ่นนม skim agar (ยกเลิกประกาศข้อมูล) โดยเฉพาะ เพื่อหลีกเลี่ยงปัญหาเหล่านี้ เราเลือกที่จะแยกสายพันธุ์รติเอสด่างในต้องใช้ PA103 ซึ่งสร้างรติเอสด่าง (4) แต่ไม่สามารถตรวจสอบได้ elastase (28) ทั้ง ๆ ที่สายพันธุ์ PA103 เป็นเซรั่มสำคัญ (41) เป็น virulent ในเมาส์รุ่นตาติดเชื้อกระจกตา (17, 27) เราได้แยกต่างหากไม่รติเอสสายพันธุ์ที่ด่างของต้องใช้ PA103 หลังจากเอทิล mutagenesis methanesulfonate (EMS) และการคัดกรองของอาณานิคม mutagenized บนแผ่น agar skim นม หลังจากสมบัติในของสายพันธุ์เหล่านี้ ระบุสายพันธุ์ขาดสารโดยเฉพาะในการผลิตอัลคาไลน์รติเอส และ virulence ของสายพันธุ์เหล่านี้ถูกเปรียบเทียบกับของสายพันธุ์ชนิดป่าในรูปแบบตาเมาส์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกการกลายพันธุ์โดยเฉพาะขาดในการผลิตเอนไซม์โปรติเออัลคาไลน์จะอำนวยความสะดวกในการศึกษาที่ชัดเจนอยู่บทบาทของโปรติเอสอัลคาไลน์ในการติดเชื้อ P. aeruginosa วิธีการนี​​้จะได้รับความซับซ้อนโดยความจริงที่ว่าสายพันธุ์ส่วนใหญ่ของเชื้อ P. aeruginosa ผลิตอย่างน้อยสองโปรตีเอสสารที่แตกต่างกัน (25) และอัลคาไลน์โปรติเอสที่ไม่ได้มีความจำเพาะไม่ซ้ำกันหรือพื้นผิวที่เข้มงวด (26) เราได้รับไม่สามารถเฉพาะยับยั้งกิจกรรมของเอนไซม์โปรติเอรบกวน (elastase) เพื่ออำนวยความสะดวกการตรวจหาการกลายพันธุ์อัลคาไลน์โปรติเอสในนมพร่องมันเนยแผ่นวุ้น (ข้อมูลที่ไม่ถูกเผยแพร่) เพื่อหลีกเลี่ยงปัญหาเหล​​่านี้เราเลือกที่จะแยกการกลายพันธุ์โปรติเอสอัลคาไลน์ในสายพันธุ์ PA103 ซึ่งผลิตเอนไซม์โปรติเออัลคาไลน์ (4) แต่ไม่มี elastase ตรวจพบ (28) แม้จะมีความจริงที่ว่า PA103 ความเครียดเป็นซีรั่มที่สำคัญ (41) มันเป็นความรุนแรงในรูปแบบตาเมาส์ของการติดเชื้อที่กระจกตา (17, 27) เราได้แยกอัลคาไลน์โปรติเอสกลายพันธุ์ขาดของ PA103 ความเครียดหลังจากเอทิล methanesulfonate (EMS) ฉับและการคัดกรองของอาณานิคม mutagenized ในนมพร่องมันเนยแผ่นวุ้น หลังจากที่ในหลอดทดลองลักษณะของการกลายพันธุ์เหล่านี้กลายพันธุ์โดยเฉพาะขาดในการผลิตเอนไซม์โปรติเออัลคาไลน์ที่ถูกระบุและความรุนแรงของการกลายพันธุ์เหล่านี้ได้รับการเปรียบเทียบกับสายพันธุ์ชนิดป่าในรูปแบบตาเมาส์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกสายพันธุ์ โดยเฉพาะการขาดในการผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสจะอำนวยความสะดวกในการศึกษาที่ชัดเจนกับบทบาทของอัลคาไลน์โปรติเอสใน P . aeruginosa การติดเชื้อ วิธีการนี้มีความซับซ้อน โดยข้อเท็จจริงที่ว่า สายพันธุ์มากที่สุดของหน้าลดการผลิตอย่างน้อยสองแตกต่างกันพบว่าน้ำหนักโมเลกุล ( 25 ) และการผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสไม่ได้มีเฉพาะ หรืออย่างเข้มงวด ( ความจำเพาะ ( 26 ) เราไม่สามารถยับยั้งกิจกรรมของเอนไซม์โปรติเอสรบกวนโดยเฉพาะ ( elastase ) เพื่อความสะดวกในการตรวจสอบของอัลคาไลน์โปรติเอสกลายพันธุ์บนจานวุ้นนม ( ข้อมูลจากประกาศ ) เพื่อหลีกเลี่ยงปัญหาเหล่านี้เราเลือกที่จะแยกแอลคาไล pa103 กลายพันธุ์ในสายพันธุ์ที่ผลิตอัลคาไลน์โปรติเอส ( 4 ) แต่ยังไม่พบอีลาสเตส ( 28 ) แม้จะมีความจริงที่ว่า pa103 เมื่อยเซรั่มไว ( 41 ) มันรุนแรงในรูปแบบของการติดเชื้อที่กระจกตาเมาส์ตา ( 17 , 27 )เราได้แยกแอลคาไลขาดสายพันธุ์สายพันธุ์ pa103 หลังจากการ methanesulfonate ( EMS ) การกลายพันธุ์และการคัดเลือก mutagenized อาณานิคมบนหางวุ้นจานนม หลังจากการแยกสายพันธุ์ โดยเฉพาะสายพันธุ์เหล่านี้ ขาดการยับยั้งการผลิตอัลคาไลน์โปรติเอสยังระบุและความรุนแรงของสายพันธุ์เหล่านี้เมื่อเทียบกับที่ของของความเครียดในสายตา

เมาส์แบบ