2.7. Analysis of total polyphenols

2.7. Analysis of total polyphenols and total flavonoids
Three grams of chestnut powder was reflux-extracted with
75 mL of Et-OH/H2O (70%, v/v) at 70 C for 30 min. The extract
was filtered using 0.22 lm Millipore Express Membrane Filters
and stored at 4 C until analysis. For the determination of total
polyphenols content, the reaction system included 1.0 mL of
sample solution, 5.0 mL of Folin–Ciocalteu reagent and 4 mL of
Na2CO3 (7.5%, w/v). The mixture was kept at room temperature
for 60 min, and then the absorbance at 765 nm was measured
(Ramanauskiene˙ , Inke˙ niene˙ , Petrikaite˙ , & Briedis, 2013). The concentration
of polyphenols was calculated according to the standard
curve, with gallic acid as the standard. The results were expressed
as mg of gallic acid equivalent (GAE)/g d.m.
To measure total flavonoid content, the reaction system consisted
of 2 mL of sample and 0.5 mL of NaNO2 (5%, w/v). After reaction
for 6 min, 0.5 mL of Al(NO3)3 (10%, w/v) was added and left to
stand for 6 min; then, 4.0 mL of NaOH (4%, w/v) was added and 70%
Et-OH/H2O (v/v) was supplemented to increase to 10 mL. The
absorbance was measured at 510 nm after reaction for 15 min
(Gao et al., 2011). The concentration of flavonoid was calculated
according to the standard curve, with rutin as the standard. The
results were expressed as mg of rutin equivalent/g d.m.
2.8. HPLC analysis of organic acids
HPLC analysis was carried out according to a previous study
(Ribeiro et al., 2007), with some modifications. 5 g of chestnut
powder was extracted with 50 mL of Et-OH/H2O (80%, v/v) at room
temperature for 20 min and then centrifuged at 8000g for 15 min.
Et-OH was removed from the supernatant by flushing with nitrogen.
The concentrated extract was added to 0.2 mL of phosphoric
acid (1 M) and supplemented with deionized water to reach
10 mL. The solution was filtered using a 0.2 lm microfiltration
membrane and stored at 4 C until HPLC analysis. The determination
of organic acids, including oxalic acid, malic acid, ascorbic
acid, citric acid and fumaric acid, was performed on a Shimadzu
LC-2010 with a C18 column (4.6 mm  250 mm, 5 lm; Shimadzu).
The mobile phase was 0.01 M (NH4)2HPO4 (pH 2.7) and the detection
wavelength was 210 nm. The injection volume was 20 lL and
the flow rate was 1.0 mL/min.
2.9. HPLC analysis of free amino acids (FAA)
The fresh and cooked chestnuts, 10 g of each, were shelled and
homogenized in 150 mL of Me-OH/H2O (80%, v/v). The slurry was
centrifuged at 8000g for 15 min, and the sediment was homogenized
in 150 mL of Me-OH/H2O (80%, v/v) for a second time and
centrifuged at 8000g for 15 min again. The two supernatants were
combined, vacuum concentrated and lyophilized. The obtained
powder was dissolved in 5% (w/v) trichloroacetic acid to reach a
constant volume of 25 mL, filtered using a 0.2 lm microfiltration
membrane, and stored at 4 C until HPLC analysis. The samples
were hydrolyzed using 7.5 M HCl at 110 C for 24 h. The concentrations
of amino acids were analyzed via HPLC on a Hitachi
Automatic Amino Acid Analyzer L-8900 (Hitachi, Japan) system
with aUV–VIS spectrometer and a Hitachi #2622pH column
(4.6  60 mm). The mobile phase was 0.075 M of sodium citrate
buffer (pH 3.3) and the detection wavelength was 570 nm. The
flow rate was 0.4 mL/min, the injection volume was 20 lL and
the oven temperature was set at 57 C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7 การวิเคราะห์โพลีทั้งหมดและรวมฟลา3 กรัมของผงเกาลัดถูกสกัดกรดไหลย้อนด้วย75 mL ของ Et-OH/H2O (70%, v/v) 70 c เป็นเวลา 30 นาที สารสกัดถูกกรองใช้ 0.22 lm มิลลิพอร์ Express เยื่อกรองและเก็บไว้ที่ 4 C จนถึงการวิเคราะห์ สำหรับการวัดค่าของผลรวมโพลีฟีนเนื้อหา ระบบปฏิกิริยารวม 1.0 มิลลิลิตรปัญหาอย่าง 5.0 mL ของรีเอเจนต์ท่อง – Ciocalteu และ 4 mL ของเรียก (7.5%, w/v) ส่วนผสมถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 60 นาที absorbance ที่ 765 nm ที่มีวัด(Ramanauskiene˙, Inke˙ niene˙, Petrikaite˙, & Briedis, 2013) ความเข้มข้นของโพลีฟีนได้คำนวณตามมาตรฐานโค้ง กรด gallic เป็นมาตรฐาน ผลลัพธ์ได้แสดงเป็นมิลลิกรัมของกรด gallic เทียบเท่า (GAE) /g d.m.วัดเนื้อหารวม flavonoid ระบบปฏิกิริยาประกอบด้วยของ 2 มิลลิลิตร ของตัวอย่าง และ NaNO2 0.5 มล. (5%, w/v) หลังจากปฏิกิริยาสำหรับ 6 นาที 0.5 mL ของ Al (NO3) 3 (10%, w/v) เพิ่ม และต้องสำหรับ 6 นาที แล้ว 4.0 มิลลิลิตรของ NaOH (4%, w/v) เป็นการเพิ่ม ถึง 70%ร้อยเอ็ด-OH/H2O (v/v) ถูกเสริมจะเพิ่มขึ้นเป็น 10 มล. การมีวัด absorbance ที่ 510 nm หลังปฏิกิริยา 15 นาที(Gao ร้อยเอ็ด 2011) คำนวณความเข้มข้นของ flavonoidตามมาตรฐานโค้ง มี rutin เป็นมาตรฐาน การผลลัพธ์ที่แสดงเป็นมิลลิกรัมของ d.m. rutin เทียบ เท่า/g2.8 การ HPLC การวิเคราะห์กรดอินทรีย์วิเคราะห์ HPLC ดำเนินตามการศึกษาก่อนหน้านี้(Ribeiro et al. 2007), ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง 5 กรัมของเกาลัดผงถูกสกัด ด้วย 50 มิลลิลิตรของ Et-OH/H2O (80%, v/v) ที่ห้องอุณหภูมิ 20 นาที และจากนั้น เหวี่ยงที่ 8000 กรัม 15 นาทีEt-OH ถูกเอาออกจาก supernatant ที่ โดยลบด้วยไนโตรเจนเพิ่มสารสกัดเข้มข้น 0.2 mL ของ phosphoricกรด (1 เมตร) และน้ำจุถึง10 mL โซลูชันที่ถูกกรองให้ใช้แบบ microfiltration lm 0.2เมมเบรน และเก็บไว้ที่ 4 C จนวิเคราะห์ HPLC ในการกำหนดกรดอินทรีย์ รวมทั้งกรดออกซาลิก กรด malic แอสคอร์บิคกรด กรดซิตริก และ กรด fumaric ทำตามแบบ ShimadzuLC-2010 กับคอลัมน์ C18 (4.6 มม. 250 มม. 5 lm Shimadzu)ขั้นตอนการเคลื่อนได้ 0.01 M (NH4) 2HPO4 (ค่า pH 2.7) และการตรวจสอบความยาวคลื่นได้ 210 nm ปริมาณฉีดได้ 20 lL และอัตราการไหลเป็น 1.0 มิลลิลิตร/นาที2.9 การ HPLC การวิเคราะห์กรดอะมิโนอิสระ (FAA)มีเปลือกสด และสุกเกาลัด 10 กรัมแต่ละ และhomogenized ใน 150 mL ของฉัน-OH/H2O (80%, v/v) ถูกละลายเหวี่ยงที่ 8000 กรัม 15 นาที และตะกอนถูก homogenizedในฉัน-OH/H2O (80%, v/v) เป็นเวลา 150 มิลลิลิตร และเหวี่ยงที่ 8000 กรัม 15 นาทีอีกด้วย Supernatants สองได้รวม เครื่องดูดฝุ่นเข้มข้น และ lyophilized การได้รับผงละลายในกรด trichloroacetic 5% (w/v) ในการเข้าถึงการปริมาณ 25 มล. กรองใช้แบบ microfiltration lm 0.2 คงเมมเบรน และเก็บไว้ที่ 4 C จนวิเคราะห์ HPLC ตัวอย่างwere hydrolyzed using 7.5 M HCl at 110 C for 24 h. The concentrationsof amino acids were analyzed via HPLC on a HitachiAutomatic Amino Acid Analyzer L-8900 (Hitachi, Japan) systemwith aUV–VIS spectrometer and a Hitachi #2622pH column(4.6  60 mm). The mobile phase was 0.075 M of sodium citratebuffer (pH 3.3) and the detection wavelength was 570 nm. Theflow rate was 0.4 mL/min, the injection volume was 20 lL andthe oven temperature was set at 57 C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 การวิเคราะห์ของโพลีฟีรวมและ flavonoids
รวมสามกรัมของผงเกาลัดถูกสกัดกรดไหลย้อนกับ
75 มิลลิลิตร Et โอ / H2O (70% v / v) ที่ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที สารสกัดถูกกรองโดยใช้ 0.22 ไมครอนคเอ็กซ์เพรสกรองเมมเบรนและเก็บไว้ที่4 องศาเซลเซียสจนการวิเคราะห์ สำหรับความมุ่งมั่นของทั้งหมดโพลีฟีนเนื้อหาระบบปฏิกิริยารวม 1.0 มิลลิลิตรของสารละลายตัวอย่าง5.0 มิลลิลิตรน้ำยา Folin-Ciocalteu และ 4 มิลลิลิตรNa2CO3 (7.5% w / v) ส่วนผสมที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 60 นาทีและจากนั้นดูดกลืนแสงที่ 765 นาโนเมตรวัด (Ramanauskiene˙, Inke niene˙, Petrikaite˙และ Briedis 2013) ความเข้มข้นของโพลีฟีที่คำนวณได้ตามมาตรฐานโค้งด้วยกรดฝรั่งเศสเป็นมาตรฐาน ผลการวิจัยแสดงเป็นมิลลิกรัมเทียบเท่ากรดฝรั่งเศส (GAE) / g DM การวัดเนื้อหารวม flavonoid ระบบปฏิกิริยาประกอบด้วย2 มิลลิลิตรของกลุ่มตัวอย่าง 0.5 มิลลิลิตร NaNO2 (5% w / v) หลังจากปฏิกิริยา6 นาที, 0.5 มิลลิลิตรอัล (NO3) 3 (10% w / v) ถูกเพิ่มเข้ามาและจากซ้ายไปยืนเป็นเวลา6 นาที; แล้ว 4.0 มิลลิลิตร NaOH (4% w / v) ถูกเพิ่มเข้ามาและ 70% Et โอ / H2O (v / v) ก็ตบท้ายว่าจะเพิ่มขึ้นถึง 10 มิลลิลิตร การดูดกลืนแสงวัดที่ 510 นาโนเมตรหลังจากปฏิกิริยานาน 15 นาที(Gao et al., 2011) ความเข้มข้นของ flavonoid ถูกคำนวณตามเส้นโค้งมาตรฐานที่มีรูตินเป็นมาตรฐาน ผลการวิจัยแสดงเป็นมิลลิกรัมรูตินเทียบเท่า / g DM 2.8 การวิเคราะห์ HPLC ของกรดอินทรีย์วิเคราะห์HPLC ได้ดำเนินการตามผลการศึกษาก่อนหน้า(แบร์โต et al., 2007) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง 5 กรัมเกาลัดผงถูกสกัดด้วย50 มล Et โอ / H2O (80% v / v) ที่ห้องอุณหภูมิ20 นาทีและปั่นแล้ว 8000G เป็นเวลา 15 นาที. ร้อยเอ็ดโอถูกลบออกจากสารละลายโดยการล้างด้วย ไนโตรเจน. สารสกัดเข้มข้นถูกบันทึกอยู่ใน 0.2 มิลลิลิตรฟอสฟอรัสกรด(1 M) และตบท้ายด้วยน้ำปราศจากไอออนที่จะไปถึง10 มิลลิลิตร การแก้ปัญหาถูกกรองโดยใช้ microfiltration LM 0.2 เมมเบรนและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสจนการวิเคราะห์ HPLC ความมุ่งมั่นของกรดอินทรีย์รวมทั้งกรดออกซาลิก, กรดมาลิก, วิตามินซีกรดกรดซิตริกและกรดfumaric ได้รับการดำเนินการบน Shimadzu LC-2010 ด้วยคอลัมน์ C18 (4.6 มิลลิเมตร 250 มิลลิเมตร 5 ไมครอน; Shimadzu.) ระยะที่มือถือ ถูก 0.01 M (NH4) 2HPO4 (pH 2.7) และการตรวจสอบความยาวคลื่น210 นาโนเมตรเป็น ปริมาณการฉีดจะเป็น 20 และอัตราการไหลเป็น1.0 มิลลิลิตร / นาที. 2.9 การวิเคราะห์ HPLC ของกรดอะมิโนอิสระ (FAA) เกาลัดสดและสุก 10 กรัมของแต่ละถูกปอกเปลือกและปั่นใน150 มิลลิลิตร Me-OH / H2O (80% v / v) สารละลายที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 8000G เป็นเวลา 15 นาทีและตะกอนที่ถูกปั่นใน150 มิลลิลิตร Me-OH / H2O (80% v / v) เป็นครั้งที่สองและหมุนเหวี่ยงที่8000G เป็นเวลา 15 นาทีอีกครั้ง ทั้งสอง supernatants ถูกรวมสูญญากาศความเข้มข้นและแห้ง ที่ได้รับผงถูกละลายใน 5% (w / v) กรดไตรคลอโรจะไปถึงปริมาณคงที่ของ25 มิลลิลิตรกรองโดยใช้ 0.2 LM microfiltration เมมเบรนและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสจนการวิเคราะห์ HPLC กลุ่มตัวอย่างที่ถูกย่อยสลายโดยใช้ 7.5 M HCl ที่ 110 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ความเข้มข้นของกรดอะมิโนที่ถูกนำมาวิเคราะห์ผ่าน HPLC ในฮิตาชิอัตโนมัติวิเคราะห์กรดอะมิโนL-8900 (ฮิตาชิญี่ปุ่น) ระบบที่มีสเปกโตรมิเตอร์AUV-VIS และคอลัมน์ # 2622pH ฮิตาชิ(4.6? 60 มิลลิเมตร) เฟสเคลื่อนที่เป็น 0.075 M ของโซเดียมซิเตรทบัฟเฟอร์(pH 3.3) และการตรวจสอบความยาวคลื่น 570 นาโนเมตรเป็น อัตราการไหล 0.4 มิลลิลิตร / นาทีปริมาณการฉีด 20 LL และอุณหภูมิเตาอบตั้งอยู่ที่57 องศาเซลเซียส