Polyacrylamide gel electrophoresisP

Polyacrylamide gel electrophoresis
Proteins in the depleted and untreated plasma samples were
analyzed by PAGE using a standard protocol [17] and 2D-PAGE
using the method of O’Farrell [18] adapted as previously reported
[13]. PAGE wasperformedinamini-chamber; eachgelhad10 wells,
and in each well 20 L protein solution was loaded. The gels were
run at 120V during 10 min and after that at 180V until the advancing
front reached the button of the gel. For 2D-PAGE, 300 g of
protein were resuspended in 50 L of lysis buffer (9.5 M urea, 2%
Triton X-100, 1.6% ampholytes 4–7 range, 0.4% ampholytes 3–10
range, and 5% -mercaptoethanol), incubated at room temperature
for 15 min and loaded onto lab-made first dimension gels (115 mm
height and 3 mm internal diameter capillary tubes). A 4.0–7.0 pH
gradient was used. Gel prefocusing was carried out according to the
following program: 200V for 15 min, 300V for 15 min and 400V for
15 min. Isoelectric focusing (IEF) was performed at 400V for 20 h,
to complete 8000Vh. After IEF, the gels were extruded from the
glass capillary tubes and equilibrated immediately in 2 mL of equilibration
solution (10% glycerol, 5% -mercaptoethanol, 2.3% SDS,
0.0625 M Tris–HCl pH 6.8) for 10 min. Vertical SDS-PAGE was run
with lab-made homogeneous acrylamide gel (11.5% acrylamide;
180 mm height and 120 mm wide), at a constant voltage of 50V
during 16 h. PAGE and 2D-PAGE gels were soaked in a solution
of 25% methanol and 7.5% acetic acid for 30 minutes, stained in
Coomassie Brilliant Blue R-250 for 12 h (0.1% Coomassie Blue R-
250, 25% methanol, 7.5% acetic acid) and destained in a solution of
25% methanol and 7.5% acetic acid. The analyses were made in quadruplicate.
All chemicals were analytical grad

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Electrophoresis polyacrylamide เจลโปรตีนในตัวอย่างพลาสม่าพิก และไม่ถูกรักษาถูกวิเคราะห์ โดยใช้โพรโทคอลมาตรฐาน [17] และ 2D-เพเพใช้วิธีการ O'Farrell [18] ดัดแปลงเป็นรายงานไปก่อนหน้านี้[13] . หน้า wasperformedinamini-หอการค้า eachgelhad10 บ่อและถูกโหลดโซลูชันโปรตีนในแต่ละ L 20 ดี เจได้รันที่ 120V ระหว่าง 10 นาที และหลัง จากนั้นที่ 180V จนก้าวหน้าด้านหน้าถึงปุ่มของเจ สำหรับ 2D-หน้า 300 กรัมของโปรตีนถูก resuspended ใน L 50 lysis บัฟเฟอร์ (9.5 M urea, 2%ไตรตั้น X-100 ช่วง 4 – 7 ampholytes 1.6%, ampholytes 0.4% 3-10ช่วง และ 5% - mercaptoethanol), incubated ที่อุณหภูมิห้อง15 นาที และโหลดลงในแล็บทำครั้งแรก ขนาดเจ (115 มม.ความสูงและ 3 มม.เส้นผ่าศูนย์กลางภายในเส้นเลือดฝอยหลอด) มี pH 4.0-7.0ใช้การไล่ระดับสี เจ prefocusing ถูกดำเนินการตามโปรแกรมต่อไปนี้: 200V สำหรับ 15 นาที 300V สำหรับ 15 นาทีและ 400V สำหรับ15 นาที Isoelectric เน้น (IEF) ทำที่ 400V สำหรับ 20 hสมบูรณ์ 8000Vh หลังจาก IEF เจถูก extruded จากการแก้วหลอดเลือดฝอยท่อ และ equilibrated ทันทีใน 2 mL ของ equilibrationโซลูชัน (กลีเซอร 10%, 5% - mercaptoethanol, 2.3% SDS0.0625 M ตรี – HCl ค่า pH 6.8) ถูกรัน SDS หน้าแนวตั้งสำหรับ 10 นาทีมีทำแล็บเหมือนอะคริลาไมด์เจล (11.5% อะคริลาไมด์180 สูงมม.และ 120 มม.กว้าง), ที่แรงดันไฟฟ้าคงที่ของ 50Vระหว่าง 16 h. หน้าและ 2D หน้าเจได้ที่เปี่ยมล้นไปด้วยในการแก้ไขปัญหาของ 25% เมทานอลและ 7.5% กรดอะซิติก 30 นาที สีในบริลเลียนท์ Coomassie บลู R-250 สำหรับ 12 h (0.1% Coomassie บลู R -250, 25% เมทานอล กรดอะซิติก 7.5%) และ destained ในการแก้ปัญหาของ25% เมทานอลและ 7.5% กรดอะซิติก การวิเคราะห์การทำ quadruplicateสารเคมีทั้งหมดได้จบวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อะคริเลตข่าวคราวโปรตีนในตัวอย่างพลาสมาหมดและได้รับการรักษาที่ถูกวิเคราะห์โดยหน้าโดยใช้โปรโตคอลมาตรฐาน[17] และ 2D-PAGE โดยใช้วิธีการของแฟร์เรลล์ [18] ดัดแปลงเป็นรายงานก่อนหน้านี้[13] หน้า wasperformedinamini ห้อง; eachgelhad10 หลุมและในแต่ละดี20 ลิตรวิธีการแก้ปัญหาโปรตีนถูกโหลด ถูกเจลทำงานที่ 120V ในช่วง 10 นาทีหลังจากนั้น 180V จนก้าวหน้าด้านหน้าถึงปุ่มของเจล สำหรับ 2D-PAGE 300 กรัมของโปรตีนที่ถูกresuspended ใน 50 L ของบัฟเฟอร์สลาย (9.5 M ยูเรีย 2% Triton X-100 1.6% ampholytes 4-7 ช่วง 0.4% ampholytes 3-10 ช่วงและ 5% - mercaptoethanol) บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา15 นาทีและโหลดไปยังห้องปฏิบัติการทำเจลมิติครั้งแรก (115 มิลลิเมตรความสูงและ3 มมท่อขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของเส้นเลือดฝอยภายใน) ค่า pH 4.0-7.0 การไล่ระดับสีที่ใช้ prefocusing เจลได้ดำเนินการตามโปรแกรมต่อไปนี้: 200V 15 นาที, 300V สำหรับ 15 นาทีและ 400V สำหรับ15 นาที Isoelectric มุ่งเน้น (IEF) เป็นที่ 400V 20 ชั่วโมงจะเสร็จสมบูรณ์8000Vh หลังจาก IEF เจลที่ถูกอัดจากหลอดแก้วและเส้นเลือดฝอยequilibrated ทันทีใน 2 มิลลิลิตรสมดุลวิธีการแก้ปัญหา(กลีเซอรีน 10%, 5%? -mercaptoethanol 2.3% SDS, 0.0625 M Tris-HCl pH 6.8) เป็นเวลา 10 นาที แนวตั้งระบบ SDS-PAGE ดำเนินการที่มีห้องปฏิบัติการที่ทำเจลริลาไมด์เป็นเนื้อเดียวกัน(ริลาไมด์ 11.5%; 180 มิลลิเมตรความสูง 120 มิลลิเมตรและกว้าง) ที่แรงดันไฟฟ้าคงที่ของ 50V ในช่วง 16 ชั่วโมง หน้าและเจล 2D-PAGE แช่ในสารละลายเมทานอล25% และ 7.5% กรดอะซิติก 30 นาทีสีในCoomassie สดใสสีฟ้า R-250 เป็นเวลา 12 ชั่วโมง (0.1% Coomassie สีน้ำเงิน R- 250, เมทานอล 25%, 7.5% กรดอะซิติก) และ destained ในการแก้ปัญหาของเมทานอล25% และ 7.5% กรดอะซิติก การวิเคราะห์ได้ทำใน quadruplicate. สารเคมีทุกคนที่จบการวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

polyacrylamide gel electrophoresis
โปรตีนในพลาสมาดิบได้หมดและตัวอย่าง
โดยใช้หน้าโดยใช้โปรโตคอลมาตรฐาน [ 17 ] และ 2D-PAGE
โดยใช้วิธีส่วน [ 18 ] ดัดแปลงรายงาน
ก่อนหน้านี้ [ 13 ] หน้า wasperformedinamini ห้อง ; eachgelhad10 บ่อ
และในแต่ละลิตรโปรตีนด้วยสารละลายโหลด เจลถูก
วิ่งที่ 120V ช่วง 10 นาที และหลังจากที่ 180v จนก้าวหน้า
ด้านหน้าถึงปุ่มเจล สำหรับ 2D-PAGE 300 กรัมของโปรตีน resuspended
50 ลิตรการสลายบัฟเฟอร์ ( 9.5 M ยูเรีย 2 %
Triton X-100 , 1.6 % น้ำหนักแรกเกิดน้อยกว่าปกติ 4 – 7 ช่วง , 0.4% น้ำหนักแรกเกิดน้อยกว่าปกติ 3 – 10
ช่วงและ 5%  - mercaptoethanol ) บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาทีและ
โหลดลงแล็บ ทำเจลมิติแรก ( 115 มม.
ความสูงและ 3 มิลเส้นผ่าศูนย์กลางภายในหลอดเส้นเลือดฝอย ) 4.0 – 7.0 M
สีถูกใช้ เจล prefocusing ได้ดําเนินการตาม
ต่อไปนี้รายการ : 200v 15 นาที 300v สำหรับ 15 นาทีและ 15 นาทีสำหรับ
400v Isoelectric สำ ( IEF ) คือการ 400v 20 H ,
เสร็จ 8000vh . หลังจาก IEF , เจลถูกอัดจาก
แก้วและหลอดเส้นเลือดฝอย equilibrated ทันที 2 มิลลิลิตร สารละลาย equilibration
( 10% กลีเซอรอล , 5%  - mercaptoethanol , 2.3 % SDS ,
M HCl pH 6.8 และผลจาก SDS-PAGE เป็นแนวตั้ง ) นาน 10 นาที วิ่ง
กับแล็บทำให้เป็นเนื้อเดียวกันอะคริลาไมด์เจลอะคริลาไมด์ ( 11.5 % ;
180 มม. และ 120 มม. ความกว้างความสูง ) ที่แรงดันไฟฟ้าคงที่ของ 50v
16 . ระหว่างหน้าและ 2D-PAGE เจลชุ่มทางออก
ของเมทานอล 25% และ 7.5 % กรดเป็นเวลา 30 นาที เลอะ
เหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าสดใส 12 H ( 0.1% เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้า R -
250 , 25 % เมทานอลกรดอะซิติกร้อยละ 7.5 ) และ destained ในสารละลาย
เมทานอล 25% และ 7.5 % กรดอะซิติก การวิเคราะห์ได้ประกอบด้วยสี่ส่วน .
สารเคมีคือวิเคราะห์จบ