2.2. Viral RNA extraction and cDNA

2.2. Viral RNA extraction and cDNA synthesis
Viral RNA was extracted from tissue culture supernatantusing QIA amp®Viral RNA Mini Kit (Qiagen®, Germany), fol-lowing manufacturer’s instructions. Trizol reagent (Invitrogen,CA, USA) was also used to isolate RNA from clinical samples. Synthesis of cDNA was carried out in 20 l reaction using Revert Aid TMH minus first Strand cDNA Synthesis kit (Fermen-tas, USA) following manufacturer’s instructions. Briefly, 11 l of the purified RNA were added to a mixture containing 4 l RTbuffer (5×), 1 l of random hexamer, 2 l 10 mM dNTP, 1 l RNa seinhibitor and l l of Moloney murine leukaemia virus reverse transcriptase. The reaction was carried out at 25◦C for 5 min,42◦C for 60 min and 70◦C for 5 min and stored at −40◦C untiluse.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. ไวรัสอาร์เอ็นเอ cDNA และสกัดสังเคราะห์อาร์เอ็นเอไวรัสถูกสกัดจากเนื้อเยื่อ supernatantusing QIA แอมป์ ® อาร์เอ็นเอไวรัสมินิชุด (Qiagen ® เยอรมัน) คำแนะนำของผู้ผลิต fol ควายเหล็ก Trizol รีเอเจนต์ (Invitrogen, CA, USA) ถูกใช้เพื่อแยกอาร์เอ็นเอจากตัวอย่างที่ทางคลินิก การสังเคราะห์ cDNA ถูกดำเนินในปฏิกิริยา 20 l ใช้กลับ TMH ช่วยลบ cDNA สาระแรกชุดสังเคราะห์ (Fermen tas สหรัฐอเมริกา) ต่อไปนี้คำแนะนำของผู้ผลิต สั้น ๆ l 11 ของอาร์เอ็นเอบริสุทธิ์ได้เพิ่มส่วนผสมที่ประกอบด้วย 4 l RTbuffer (5 ราย), l 1 1 l อาร์เอ็นเอ seinhibitor และ l l Moloney murine leukaemia ไวรัสกลับ transcriptase, dNTP 2 l 10 มม. hexamer สุ่ม ปฏิกิริยาเกิดขึ้นใน 25◦C สำหรับ 5 นาที 42◦C สำหรับ 60 นาทีและ 70◦C สำหรับ 5 นาที และเก็บไว้ที่ −40◦C untiluse

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 การสกัดอาร์เอ็นเอไวรัสและยีนสังเคราะห์
ไวรัสอาร์เอ็นเอเป็นสารสกัดจาก supernatantusing การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ QIA amp®Viral RNA มินิ Kit (Qiagen®, เยอรมนี), fol-ควายเหล็กแนะนำของผู้ผลิต น้ำยา Trizol (Invitrogen, CA, USA) นอกจากนี้ยังถูกใช้ในการแยก RNA จากตัวอย่างทางคลินิก การสังเคราะห์ cDNA ได้ดำเนินการในวันที่ 20? ปฏิกิริยาลิตรโดยใช้ Revert ช่วยเหลือ TMH ลบชุด Strand ยีนสังเคราะห์แรก (Fermen-tas สหรัฐอเมริกา) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต สั้น ๆ 11? ลิตร RNA บริสุทธิ์ถูกเพิ่มเข้าไปในส่วนผสมที่มี 4? L RTbuffer (5 ×) 1? ลิตร hexamer สุ่ม 2? L 10 มม dNTP 1? L RNA seinhibitor และ L? ลิตรโมโลนีย์หมา ไวรัสโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาว transcriptase ย้อนกลับ ปฏิกิริยาได้ดำเนินการที่25◦C 5 นาที42◦C 60 นาทีและ70◦Cเวลา 5 นาทีและเก็บไว้ที่-40◦C untiluse

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การสกัดอาร์เอ็นเอไวรัสและยีนสังเคราะห์
ไวรัส RNA ถูกสกัดจากเนื้อเยื่อ supernatantusing มั่น®ไวรัส RNA มินิแอมป์ชุด ( เพิ่ม® , เยอรมัน ) , คำสั่งเสียงต่ำ fol ผู้ผลิตของ trizol Reagent ( Invitrogen , CA , USA ) ยังใช้แยก DNA จากตัวอย่างทางคลินิกการสังเคราะห์ cDNA ได้ดําเนินการใน 20  L ปฏิกิริยาใช้กลับช่วย tmh ลบเส้นดีเอ็นเอสังเคราะห์ชุดแรก ( fermen กระเป๋าถือ , USA ) คำสั่งต่อไปนี้ของผู้ผลิต . สั้น ๆ , 11  ลิตรทำให้ RNA มีการเพิ่มส่วนผสมที่ประกอบด้วย 4  ผม rtbuffer ( 5 × ) 1  ผมสุ่มเฮกเซอเมอร์ 2  L 10 มม. dntp 1  l L l seinhibitor RNA และ  เมอโลนีย์ ~ ลูคีเมียไวรัส reverse transcriptase .ปฏิกิริยาที่ถูกดำเนินการใน 25 ◦ C เป็นเวลา 5 นาที , 42 ◦ C นาน 60 นาที และ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและ◦อุณหภูมิ− 40 ◦ C untiluse .