2.3. Molecular genetic marker evalu

2.3. Molecular genetic marker evaluation
The DNA was extracted from the muscle samples using a standard
DNA extractionmethod (GenEluteMammalian Genomic DNAMiniprep
Kit, Sigma Aldrich, St Louis, MO). The mutation of SCD was the C/T mutation
in the second exon described by Ren et al. (2004) at position
3101. This mutation does not lead to an amino acid exchange. Primers
were designed to amplify a fragment containing the mutation
(SCDexonF: ctctctcccagctctgcact, SCDexonR: agcccaccacaacacctaag).
The DGAT1 (silent mutation in the second intron), DGAT2 (in 3′-UTR),
MTTP (in exon 18 inducing a phenylalanine to leucine substitution),
FASN (a synonymousmutation in exon 4) and H-FABP (in intron 2) polymorphismswere
described in Nonneman and Rohrer (2002), Yin, Yang,
Han, Fan, and Liu (2012), Maharani et al. (2012), Muñoz et al. (2003)
and Gerbens et al. (1997), respectively. Amplifications were performed
using 12.5 ng of porcine DNA, 1× PCR buffer, 2.5 mM of MgCl2,
0.125 mM each dNTP, 0.3 mM of each primer and 0.35 U Taq polymerase
(Promega,Madison,WI, USA). For one sample, itwas not possible to
obtain any amplification and for 4 other samples we did not get MTTP
amplification. Digestions were performed using the restriction enzyme
for each PCR-RFLP test following the recommendations of the
manufacturer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การประเมินผลเครื่องหมายพันธุโมเลกุลดีเอ็นเอถูกสกัดจากตัวอย่างกล้ามเนื้อที่ใช้มาตรฐานExtractionmethod ดีเอ็นเอ (GenEluteMammalian Genomic DNAMiniprepชุด ซิก Aldrich, St Louis, MO) การกลายพันธุ์ของ SCD ได้กลายพันธุ์ C/Tใน exon ที่สองที่อธิบายโดยเร็น et al. (2004) ที่ตำแหน่ง3101 ไม่กลายพันธุ์นี้ทำให้การแลกเปลี่ยนกรดอะมิโน ไพรเมอร์ถูกออกแบบมาเพื่อขยายส่วนที่ประกอบด้วยการกลายพันธุ์(SCDexonF: ctctctcccagctctgcact, SCDexonR: agcccaccacaacacctaag)DGAT1 การ (สภาพการกลายพันธุ์ใน intron 2), DGAT2 (ใน 3′-UTR),MTTP (ใน exon 18 inducing phenylalanine จะแทน leucine),FASN (synonymousmutation ใน exon 4) และ H-FABP (ใน intron 2) polymorphismswereอธิบายไว้ใน Nonneman และ Rohrer (2002), หยิน หยางฮั่น พัดลม และหลิว (2012), al. ร้อยเอ็ดโรงแรมมหารานี (2012), Muñoz และ al. (2003)และ Gerbens et al. (1997), ตามลำดับ ดำเนิน amplificationsใช้ 12.5 ng ของดีเอ็นเอช่วง บัฟเฟอร์ PCR 1 × 2.5 มม.ของ MgCl20.125 มม.แต่ละ dNTP, 0.3 มม.รองพื้นแต่ละและ 0.35 U Taq พอลิเมอเรส(Promega เมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา) สำหรับตัวอย่างหนึ่ง ไม่สามารถรับขยายใด ๆ และตัวอย่างอื่น ๆ 4 เราไม่ได้ MTTPขยาย Digestions ได้ดำเนินการโดยใช้เอนไซม์จำกัดสำหรับการทดสอบ PCR-RFLP แต่ละระยะของการผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3
การประเมินผลทางพันธุกรรมระดับโมเลกุลเครื่องหมายดีเอ็นเอถูกสกัดจากตัวอย่างของกล้ามเนื้อโดยใช้มาตรฐาน
extractionmethod ดีเอ็นเอ (GenEluteMammalian จีโนม DNAMiniprep
ชุดซิกดิช, เซนต์หลุยส์, มิสซูรี่) การกลายพันธุ์ของ SCD เป็น C / T
การกลายพันธุ์ในเอกซ์ซอนที่สองอธิบายโดยRen et al, (2004) ที่ตำแหน่ง
3101 การกลายพันธุ์นี้ไม่ได้นำไปสู่การแลกเปลี่ยนกรดอะมิโน
ไพรเมอร์ได้รับการออกแบบเพื่อขยายส่วนที่มีการกลายพันธุ์
(SCDexonF: ctctctcccagctctgcact, SCDexonR: agcccaccacaacacctaag).
DGAT1 (กลายพันธุ์เงียบใน intron วินาที) DGAT2 (ใน 3- UTR)
MTTP (ในเอกซ์ซอน 18 การกระตุ้นให้เกิดการ phenylalanine leucine ทดแทน)
FASN (synonymousmutation ในเอกซ์ซอน 4) และ H-FABP (ใน intron 2) polymorphismswere
อธิบายไว้ใน Nonneman และ Rohrer (2002),
หยินหยางฮั่น, พัดลมและหลิว (2012), มหารานีและอัล (2012), Muñoz et al, (2003)
และ Gerbens et al, (1997) ตามลำดับ เครื่องขยายเสียงได้ดำเนินการโดยใช้ 12.5 งะดีเอ็นเอหมู 1 ×บัฟเฟอร์ PCR 2.5 มิลลิของ MgCl2, 0.125 มิลลิ dNTP แต่ละ 0.3 มิลลิของแต่ละไพรเมอร์และ 0.35 U โพลิเมอร์ Taq (Promega เมดิสันวิสคอนซินสหรัฐอเมริกา) สำหรับหนึ่งตัวอย่าง itwas ไม่ได้ที่จะได้รับการขยายและ4 ตัวอย่างอื่น ๆ ที่เราไม่ได้รับ MTTP ขยาย ย่อยได้ดำเนินการโดยใช้เอนไซม์ข้อ จำกัดสำหรับการทดสอบแต่ละ PCR-RFLP ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 เครื่องหมายโมเลกุลพันธุกรรมการประเมิน
ดีเอ็นเอจากตัวอย่างการใช้กล้ามเนื้อ extractionmethod ดีเอ็นเอมาตรฐาน
( genelutemammalian จีโนม dnaminiprep
ชุด ซิกม่า Aldrich St Louis , MO ) การกลายพันธุ์ของ SCD เป็น C / T การกลายพันธุ์ใน exon
2 อธิบายโดยเรน et al . ( 2004 ) ที่ตำแหน่ง
3101 . การกลายพันธุ์นี้ไม่ได้นำไปสู่การเปลี่ยนกรดอะมิโน ไพรเมอร์
ถูกออกแบบมาเพื่อขยายส่วนที่มีการกลายพันธุ์
( scdexonf : ctctctcccagctctgcact scdexonr : , agcccaccacaacacctaag )
dgat1 ( เงียบการกลายพันธุ์ใน iNtRON วินาที ) , dgat2 ( ใน 3 ’ - UTR )
mttp ( ใน exon 18 ให้เกิดการทดแทนลิวซีน , ฟีนิลอะลานีน )
fasn ( synonymousmutation ใน exon 4 ) h-fabp ( iNtRON และ 2 ) polymorphismswere
และอธิบายไว้ใน nonneman รอเรอร์ ( 2002 ) , หยิน , หยาง ,
ฮัน พัดลม และ หลิว ( 2012 ) , มหารานี et al . ( 2012 ) หมู่ที่ 15 ออนซ์ et al . ( 2003 ) และ
gerbens et al . ( 1997 ) ตามลำดับ การใช้ amplifications
12.5 นาโนจาก DNA PCR buffer 1 × 2.5 มม. 800 มม. แต่ละไอโซโทป
, dntp 0.3 มม. ของแต่ละสีและ 0.35 วูทัค Polymerase
( promega เมดิสัน , WI , USA ) สำหรับตัวอย่าง , มันเป็นไปไม่ได้

ได้รับการเพิ่มใด ๆและ 4 ตัวอย่างอื่นที่เราไม่ได้รับ mttp
( . digestions การใช้เอนไซม์สำหรับแต่ละการทดสอบต่อไปว่า

คำแนะนำของผู้ผลิต