Identification of isolated bacteria

Identification of isolated bacterial cultures:
Identification of isolated bacterial cultures was done
on the basis of its growth characteristics on different
differential media and biochemical properties such as
Gram’s reaction, motility testing, lactose fermentation,
indole production, methyl red, Voges proskauer (VP)
reaction, citrate utilization, H2S production, catalase and
urease tests using a standard protocol (Holt, 1994).
Determination of asparaginase activity:
(a) Qualitative assay for production of Lasparaginase
by isolated E. coli cultures: Agar
diffusion technique was used for qualitative assay of
L-asparginase by isolated bacterial cultures. Modified
Czapek Dox’s Medium (pH 6.8) supplemented with
sodium nitrate 2.0gm, potassium chloride 0.5gm,
magnesium glycerophosphate 0.5gm, ferrous sulphate
0.01gm, potassium sulphate 0.35gm, sucrose 30.0gm,
agar agar 12.0gm, L-asparagine (1%w/v), distilled
water 1000 ml and phenol red (0.009 % w/v) was used
as an assay medium. Sterilized medium (10 ml) was
distributed in the presterilized culture tubes to prepare
stabs. After that a loopful culture of each isolate was
inoculated on the surface of solidified stabs and
incubated at 37°C for 24 to 48 hours. Uninoculated
stab was regarded as a negative control. Stabs were
examined for change in colour of medium from
yellowish to pink due to change of pH indicating the
positive asparaginase activity. Gradation of
asparaginase activity was done on the basis of the
extent of colour change of medium. Every experiment
was conducted in triplicate.
(b) Production of L-asparaginase: The secondary
screening of bacterial isolates for L-asparaginase
production was done on modified M9 broth medium
(pH 7) supplemented with L-asparagine (1%w/v),
which was inoculated with E. coli cultures and
incubated for 24 hours at 37°C; 35 ml of medium was
taken in a conical flask of 150 ml and inoculated with
1 ml culture of bacteria having density 2×106 cell / ml
and incubated at 37°C for 24 hours. After completion
of the incubation period, culture broth was centrifuged
at 5,000 rpm for 20 min at 4°C. To assay intracellular
L- asparaginase enzyme’s activity, cell pellet was
suspended in 15 ml of 0.1M Tris-HCl buffer (pH 7.4)
and sonicated using ultra-sonicator for 15 min at 4°C.
Cell debris was removed by centrifuging at 4°C for 10
min at 10,000 rpm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บัตรประจำตัวของวัฒนธรรมของแบคทีเรียที่แยก:
ประจำตัวประชาชนของวัฒนธรรมแบคทีเรียที่แยกทำ
บนพื้นฐานของลักษณะการเจริญเติบโตที่มีต่อสื่อ
ความแตกต่างที่แตกต่างกันและคุณสมบัติทางชีวเคมีเช่น
ปฏิกิริยากรัมของการทดสอบการเคลื่อนที่หมักแลคโตส
ผลิตอินโดล, สีแดงเมธิล, voges Proskauer (VP)
ปฏิกิริยาการใช้ซิเตรทผลิต H2S, catalase และ
การทดสอบ urease ใช้โปรโตคอลมาตรฐาน (โฮลท์, 1994)
กำหนดกิจกรรม asparaginase.
(ก) การวิเคราะห์เชิงคุณภาพสำหรับการผลิต lasparaginase
โดยแยกอีเมล วัฒนธรรม coli: วุ้น
เทคนิคการกระจายที่ใช้สำหรับการทดสอบคุณภาพของ l
-asparginase จากวัฒนธรรมของแบคทีเรียที่แยก กลางแก้ไข
czapek Dox ของ (ph 6.8) เสริมด้วย 2.0gm
โซเดียมไนเตรตโพแทสเซียมคลอไรด์ 0.5gm
แมกนีเซียม glycerophosphate 0.5gm ซัลเฟตเหล็ก
0.01gm โพแทสเซียมซัลเฟต 0.35gm, 30.0gm ซูโครส
วุ้นวุ้น 12.0gm, L-asparagine (1% w / v)
กลั่นน้ำ 1000 มล. และสีแดงฟีนอล (0.009% w / v) ถูกนำมาใช้เป็นสื่อกลางใน
ทดสอบ สื่อผ่านการฆ่าเชื้อ (10 มล. ) เป็น
กระจายในหลอดวัฒนธรรม presterilized เพื่อเตรียม
แทง หลังจากนั้น loopful วัฒนธรรมของแต่ละแยกเป็น
เชื้อบนพื้นผิวของแทงแข็งและ
บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ถึง 48 ชั่วโมง uninoculated
แทงถูกมองว่าเป็นตัวควบคุมเชิงลบ แทงถูก
ตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงในสีของกลางจาก
สีเหลืองสีชมพูเนื่องจากการเปลี่ยนแปลงของ ph แสดง
กิจกรรม asparaginase บวก ชั้นของ
กิจกรรม asparaginase ทำบนพื้นฐานของ
ขอบเขตของการเปลี่ยนสีของกลาง ทุกการทดลอง
ได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า
(ข) การผลิต L-asparaginase. รอง
คัดกรองแบคทีเรียกับ L-asparaginase
การผลิตได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับการแก้ไข m9 กลางน้ำซุป
(ph 7) เสริมด้วย L-asparagine (1% w / v)
ซึ่งได้รับเชื้ออี วัฒนธรรมและ coli
บ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 37 ° c; 35 มล. ของกลางเป็น
ถ่ายในขวดรูปกรวย 150 มล. และเชื้อด้วย
1 มล. วัฒนธรรมของเชื้อแบคทีเรียที่มีความหนาแน่นของ 2 × 106 เซลล์ / ml
และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง หลังจากเสร็จสิ้น
ของระยะเวลาการบ่มน้ำซุปวัฒนธรรมถูกหมุนเหวี่ยง
ที่ 5,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส สำหรับวิเคราะห์การภายในเซลล์ l
-asparaginase เอนไซม์กิจกรรมเม็ดเซลล์
ลอยอยู่ใน 15 ml ของบัฟเฟอร์ 0.1m tris-hcl (ph 7.4)
และ sonicated ใช้อัลตร้า sonicator เวลา 15 นาทีที่ 4 ° c.
เศษเซลล์ถูกลบออกโดยการปั่นแยกที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที
ที่ 10,000 รอบต่อนาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รหัสวัฒนธรรมแยกแบคทีเรีย:
ทำรหัสของวัฒนธรรมแยกแบคทีเรีย
ตามลักษณะการเจริญเติบโตในต่าง
สื่อที่แตกต่างและคุณสมบัติทางชีวเคมีเช่น
กรัมของปฏิกิริยา การทดสอบ motility หมักย่อยแลคโตส,
ผลิตอินโดล methyl แดง Voges proskauer (VP)
ปฏิกิริยา ใช้ซิเตรต ผลิตไข่เน่า catalase และ
ทดสอบยูที่ใช้โพรโทคอลมาตรฐาน (Holt, 1994)
กำหนด asparaginase activity:
(a) วิเคราะห์เชิงคุณภาพสำหรับการผลิตของ Lasparaginase
วัฒนธรรมแยก E. coli: Agar
เทคนิคแพร่ถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์เชิงคุณภาพของ
L-asparginase วัฒนธรรมแยกแบคทีเรีย ปรับเปลี่ยน
กลาง Czapek Dox (pH 6.8) เสริมด้วย
โซเดียมไนเตรต 2.0 กรัม โพแทสเซียมคลอไรด์ 0.5 กรัม,
แมกนีเซียม glycerophosphate 0.5 กรัม ซัลเฟต
0.01 กรัม โพแทสเซียมซัลเฟต 0.35 กรัม ซูโครส 30.0 กรัม,
agar agar 12.0 กรัม L-asparagine (1%w/v), กลั่น
น้ำ 1000 ml และสีแดงวาง (0.009% w/v) ใช้
เป็นสื่อการวิเคราะห์ Sterilized กลาง (10 ml) ถูก
กระจายในหลอด presterilized วัฒนธรรมเพื่อจัดเตรียม
stabs หลังจากที่ ถูกวัฒนธรรมของแต่ละ isolate loopful
inoculated บนพื้นผิวของ solidified stabs และ
incubated ที่ 37° C ใน 24-48 ชั่วโมง Uninoculated
แทงถูกถือเป็นตัวควบคุมค่าลบ Stabs ถูก
ตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงสีของกลางจาก
สีเหลืองกับสีชมพูเนื่องจากการเปลี่ยนแปลงของค่า pH แสดง
asparaginase บวกกิจกรรม ไล่ระดับสีของ
asparaginase กิจกรรมที่ทำบนพื้นฐานของการ
ขอบเขตของการเปลี่ยนแปลงสีของกลาง ทดลองทุก
ได้ดำเนินการใน triplicate.
(b) ผลิตของ L-asparaginase: มัธยม
คัดกรองของ isolates แบคทีเรียสำหรับ L-asparaginase
ผลิตเสร็จในแก้ไข M9 ซุปกลาง
(pH 7) เสริม ด้วย L-asparagine (1%w/v),
which ถูก inoculated กับ E. coli วัฒนธรรม และ
incubated ตลอด 24 ชั่วโมงที่ 37 ° C 35 มิลลิลิตรของกลางถูก
มาในทรงกรวยหนาวของ 150 ml และ inoculated กับ
วัฒนธรรม 1 ml ของแบคทีเรียที่มีความหนาแน่น 2 × 106 เซลล์ / มล.
และ incubated ที่ 37° C 24 ชั่วโมง หลังจากเสร็จ
ของระยะฟักตัว ซุปวัฒนธรรม centrifuged
ที่ 5000 รอบต่อนาทีสำหรับ 20 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส การวิเคราะห์ intracellular
L-asparaginase ของเอนไซม์ เซลล์เม็ดถูก
ถูกระงับใน 15 มิลลิลิตร 0.1M HCl ทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์ (pH 7.4)
และ sonicated ใช้อัลตร้า sonicator 15 นาทีที่ 4° C
เศษเซลล์ถูกเอาออก โดย centrifuging ที่ 4° C 10
นาทีที่ 10000 rpm

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การระบุตัวตนของจุดเกิดจากเชื้อแบคทีเรียวัฒนธรรม:
การระบุตัวตนของวัฒนธรรมเกิดจากเชื้อแบคทีเรียแยกเป็นการกระทำ
บนพื้นฐานของการขยายตัวในลักษณะแตกต่างกันไปส่วนที่แตกต่างและการใช้สื่อ
ทางชีวเคมีคุณสมบัติเช่น
กรัมของปฏิกิริยา, D ( TM ) Annuloplasty Ring การทดสอบ,แลคโตสหมัก,
indole การผลิต,ผลิตสีแดง, voges proskauer ( VP )
ปฏิกริยา, citrate การใช้กำลังการผลิต, H 2 S การผลิต, catalase และ
urease การทดสอบโดยใช้โปรโตคอลมาตรฐาน(จำหน่าย, 1994 )..
การกำหนด asparaginase กิจกรรม:
(ก)ในเชิง คุณภาพ สอบสำหรับการผลิต lasparaginase
ซึ่งจะช่วยโดยแยก e .ผลทางวัฒนธรรม:สาหร่ายทะเล
ซึ่งจะช่วยน้ำท่วมทุ่งเทคนิคก็นำมาใช้สำหรับ คุณภาพ สอบของ
L - asparginase โดยแยกเชื้อแบคทีเรียวัฒนธรรม. มีขนาดกลางได้รับการแก้ไขของ dox
czapek ( PH 6.8 )และเสริมด้วยโปแตสเซียมคลอไรด์ GM
โซเดียมดินประสิว 2.0 0.5 GM
แมกนีเซียม glycerophosphate 0.5 GM ,ซึ่งมีธาตุเหล็กจุนสี
0.01 gm ,โปแตสเซียมจุนสี 0.35 gm ,ซูโครส 30.0 gm ,
สาหร่ายสาหร่ายทะเล 12.0 gm , L - เมื่อได้รับความร้อน( 1% w / v )กลั่น
น้ำ 1000 มล.และฟีนอลสีแดง( 0.009% w / v )ถูกใช้
ซึ่งจะช่วยเป็นที่สอบมีขนาดกลาง มีขนาดกลางไปฆ่าเชื้อได้ทั้งใบ( 10 มล.)เป็น
กระจายตัวอยู่ในท่อวัฒนธรรม presterilized เพื่อเตรียม
ฆาตกร หลังจากนั้นทางวัฒนธรรม loopful ของแยกแต่ละ
ตามมาตรฐานinoculated อยู่บนพื้นผิวของฆาตกรและ
ซึ่งจะช่วยตอกย้ำ incubated ใน C 37 °สำหรับ 24 ถึง 48 ชั่วโมง แทงข้างหลัง uninoculated
ถือว่าเป็นการควบคุมในทางลบ ฆาตกรเป็น
ซึ่งจะช่วยตรวจสอบสำหรับการเปลี่ยนแปลงในสีของขนาดกลางจาก
มีสีเหลืองเป็นสีชมพูเนื่องจากการเปลี่ยนแปลงของค่า pH เพื่อแสดงกิจกรรม
ในเชิงบวก asparaginase ที่ ไล่โทนสีของกิจกรรม
asparaginase ก็ทำได้บนพื้นฐานของ
เท่าที่มีการเปลี่ยนสีของขนาดกลาง การทดลอง
ทุกครั้งคนในเป็นสาม.
( B )การผลิตของ L - asparaginase :รอง
ซึ่งจะช่วยกลั่นกรองของเชื้อแบคทีเรียแยกสำหรับ L - asparaginase
การผลิตเป็นการกระทำที่ได้รับการแก้ไข M 9 ซุปขนาดกลาง
( PH 7 )และเสริมด้วย L - เมื่อได้รับความร้อน( 1% w / v ),
ซึ่งเป็น inoculated พร้อมด้วย e .ผลวัฒนธรรมและ
incubated สำหรับ 24 ชั่วโมงที่ 37 ° C ; 35 มล.ขนาดกลางมี
ซึ่งจะช่วยได้ในรูปทรงกรวยกลมกระติกน้ำ 150 มล.และ inoculated ด้วย
1 วัฒนธรรมมล.ของแบคทีเรียมีบริการข้อมูลของสถานีฐานความหนาแน่น 2 x 106 มล.
และ incubated ใน C 37 ° C สำหรับ 24 ชั่วโมง หลังจากเสร็จสิ้นการ
ของแสดงระยะฟักตัวน้ำซุปที่มีวัฒนธรรม centrifuged
ที่ 5 , 000 รอบต่อนาทีสำหรับ 20 นาทีที่ 4 ° C ในการพยายาม intracellular
L - asparaginase เอนไซม์ของกิจกรรม,ห้องขังเม็ดเป็น
ถูกพักใน 15 มล.ของบริษัททริสเรทติ้งจำกัด 0.1 ม. - HCL /บัฟเฟอร์( PH 7.4 )
และ sonicated โดยใช้ Ultra - sonicator สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ° C .
คราบเซลล์ถูกลบออกโดย centrifuging ที่ 4 ° C สำหรับ 10
นาทีที่ 10 , 000 รอบต่อนาที